食物中毒及腸道傳染病采樣上傳

1、食物中毒及腸道傳染病采樣,,前 言,食物中毒和腸道傳染病是最常見(jiàn)的衛(wèi)生事件,在食物中毒和腸道傳染病診斷與技術(shù)處理過(guò)程中,實(shí)驗(yàn)室檢查是非常重要的,檢驗(yàn)結(jié)果直接關(guān)系到食物中毒和腸道傳染病事件的控制和病人的救治,在食物中毒和腸道傳染病流行病學(xué)調(diào)查中對(duì)可疑標(biāo)本的采集與送檢,是保證檢驗(yàn)質(zhì)量的前提,同時(shí)也是一項(xiàng)涉及面較廣的基本技能,每個(gè)衛(wèi)生工作者都應(yīng)掌握。,病原學(xué)分類,食物中毒：化學(xué)性 生物性 生物性：細(xì)菌、病毒、真菌毒素

2、細(xì)菌性食物中毒：人體攝入了被細(xì)菌或其毒素污染的食品后所出現(xiàn)的非傳染性急性、亞急性疾病腸道傳染?。荷镄?生物性：細(xì)菌、病毒 細(xì)菌性腸道傳染?。簩傥覈?guó)法定傳染病，主要包括霍亂、痢疾、傷寒、副傷寒及其它感染性腹瀉采樣：細(xì)菌性食物中毒的樣品采集最具代表性,一、標(biāo)本的采集原則,1.典型性原則 食物中毒標(biāo)本的采集不同于衛(wèi)生評(píng)價(jià)采樣,應(yīng)根據(jù)中毒病人的臨床表現(xiàn)和現(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)調(diào)查,初步判斷中毒類型,根據(jù)可疑食物的性質(zhì)采集

3、可能含毒最多的標(biāo)本。如細(xì)菌性食物中毒以病人用藥前的排泄物、可疑殘留食物,尤其是動(dòng)物性食物為主;真菌及真菌毒素性食物中毒以食物原料為主;化學(xué)性與植物性食物中毒以可疑殘留食物、食物原料、病人排瀉物及體液為主。,一、標(biāo)本的采集原則,2.適時(shí)性原則 為了防止可疑食物丟失和被檢物質(zhì)組分發(fā)生變化,保證得到正確結(jié)論必須盡快采樣送檢。流調(diào)人員到達(dá)現(xiàn)場(chǎng)后應(yīng)及時(shí)采樣送檢,臨床有時(shí)需要實(shí)驗(yàn)室結(jié)果采用針對(duì)性的藥物進(jìn)行搶救,故采樣送檢的時(shí)間性在食物中毒處理中尤

4、其重要。,3.適量性原則 由于引起食物中毒的毒物種類繁多,有時(shí)需實(shí)驗(yàn)室檢索的項(xiàng)目很多,這要求有一定的樣本量,在可能的情況下盡量多采。4.程序原則 采樣、送檢、留樣和出具報(bào)告必須按規(guī)定的程序進(jìn)行，各階段都要有完整的手續(xù)，責(zé)任分明。,一、標(biāo)本的采集原則,二、食物中毒標(biāo)本的采集,通過(guò)初步調(diào)查結(jié)果和對(duì)中毒事故的初步判斷，根據(jù)需要進(jìn)行采樣，樣品一般情況下有以下幾種：Ａ.食品原料及剩余食品；Ｂ.患者的嘔吐物、糞便、血液、尿

5、液；Ｃ.食品容器及加工工具表面涂抹；Ｄ.食品生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)者的手試、肛試，必要時(shí)可做全面的身體健康檢查；Ｅ.其他與中毒食品有關(guān)的物品或病人的標(biāo)本等。,1.采樣用具要求,所有采樣的用具包括標(biāo)本容器要符合微生物檢驗(yàn)的無(wú)菌及無(wú)抑菌物質(zhì)采樣用具包括酒精燈、鑷子、剪刀、勺子、試管架、滅菌棉拭子、滅菌肛拭管、滅菌生理鹽水管、滅菌１％ＮaCl營(yíng)養(yǎng)肉湯管、Ｃ-Ｂ運(yùn)送培養(yǎng)基、分離平板、pH7.6甘油緩沖液、滅菌容器(玻璃瓶、塑料袋、紙袋等)、飲盒；

6、,1.采樣用具要求,止血帶、采樣墊巾、無(wú)菌棉簽、復(fù)合碘伏消毒液、真空采血管（生化項(xiàng)目用生化管；免疫項(xiàng)目用生化管或肝素抗凝管；血常規(guī)項(xiàng)目用2mlEDTA-K2抗凝管）、持針器、一次性靜脈采血針。,2.采樣人要求,A. 采樣必須由2 名以上專業(yè)人員執(zhí)行,出示證件說(shuō)明來(lái)意及采樣依據(jù),告知被采樣人所享有的權(quán)利和義務(wù),在被采樣者的陪同下進(jìn)行樣品的采集。 B. 注意被采樣人及采樣人員的衛(wèi)生和安全，采樣人員采樣時(shí)應(yīng)著工作服，戴口罩和一次性手套。,

7、3.采樣方法,（1）殘存食物、原料的采集　在沒(méi)有明確的可疑中毒食品線索時(shí)，采取樣品應(yīng)注意樣品的代表性;如果已取得可疑中毒食品的部分依據(jù)，則應(yīng)注意樣品的典型性，即有針對(duì)性地采取最容易、最可能、感官異常、最明顯部位的樣品。采樣數(shù)量比衛(wèi)生監(jiān)測(cè)采樣應(yīng)稍多一些，以便多次反復(fù)檢測(cè)。采取可疑食物時(shí)，最好采取餐桌上剩余食物。若做細(xì)菌檢驗(yàn)，必須注意無(wú)菌操作，可用滅菌鑷子夾取后，放入滅菌的容器內(nèi)，取200～500克。,,如無(wú)剩余食物時(shí)，可用滅菌鹽水，

8、沖洗盛裝過(guò)可疑食物的容器或食具，并將洗滌水裝入滅菌容器內(nèi)采樣；亦可用沾有滅菌生理鹽水的消毒棉拭子在盛過(guò)可疑中毒食物的容器內(nèi)涂擦，用剪刀剪除棉簽柄，或是將棉簽柄在試管口折斷（用酒精燈火焰燒斷），使棉簽頭置入裝有滅菌鹽水的試管內(nèi)。體積較大的肉食及魚類等，可將其表面消后，取內(nèi)部樣品，放入滅菌容器內(nèi)。必要時(shí)也可采取半成品及原料送檢。,,（2）食物制售環(huán)節(jié)的采樣炊具、容器、鍋、盆、桶、刀、菜板、抹布等樣品的采取，可用棉拭沾滅菌１％ＮaCl

9、營(yíng)養(yǎng)肉湯管反復(fù)涂擦，棄去手指接觸污染部分棉簽，然后置于增菌液內(nèi)。菜板可用消毒刀刮取其表面，抹布可用滅菌剪刀剪下一塊，剪下的抹布、菜板(墩)刮下的木屑，分別用滅菌工具采取，置入不同的裝有少量滅菌生理鹽水的試管內(nèi)。,,（3）患者吐瀉物及糞便的采集患者嘔吐物、排泄物及洗胃液樣品，應(yīng)取新鮮的，并避免混入其他雜質(zhì)和細(xì)菌。若懷疑為細(xì)菌性食物中毒，采糞便時(shí)應(yīng)用肛拭子采樣，已用抗生素治療后采取糞便樣品，可能影響檢驗(yàn)效果。若病人正在洗胃或嘔吐，則應(yīng)直

10、接采取洗胃液或嘔吐物裝入滅菌的容器內(nèi)。中毒者的糞便、嘔吐物樣品，每份取5-10克，洗胃液100～200ml。,,肛拭采樣A、采樣人員采樣前檢查肛拭管表面是否光滑、有無(wú)破損及裂痕以防意外；然后將肛拭管放于潤(rùn)滑液中（滅菌的pH7.6甘油緩沖液、生理鹽水或肉湯)B、被檢者采樣時(shí)匍匐于病床或桌椅上，充分暴露其肛門，采樣者囑被檢者放松，避開(kāi)內(nèi)外痔，將肛拭管輕輕插入肛門約5cm，兒童約２-3cm,輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)一圈，擦取直腸表面的粘液后取出，放入

11、生理鹽水、增菌液或C-B運(yùn)送培養(yǎng)基中。C、為防止污染，裝有增菌液的試管在開(kāi)、蓋塞子時(shí)應(yīng)將試管口在酒精燈火焰上滅菌。,,特別注意：病人痔瘡嚴(yán)重？采病人剛排出的新鮮糞便，用滅菌棉簽從糞便中采取樣品，放入采便盒或采便管內(nèi) 若讓中毒病人自行留便可能影響致病菌的檢出率。,（4）血、尿樣采集　懷疑是感染型細(xì)菌性食物中毒時(shí)，可在發(fā)病初期采血直接培養(yǎng)病原體。觀察從患者血液、排泄物中分離出的菌株，是否與食物中分離出的菌株同一菌型。對(duì)疑似細(xì)菌性

12、食物中毒,應(yīng)采患者急性期(3 d 內(nèi)) 和恢復(fù)期(2 周左右) 血液。方法:無(wú)菌操作抽取靜脈血3m1 于無(wú)菌試管中,同時(shí)采集1 份正常人血樣作對(duì)照；尿樣品每份取100-200毫升。,（5）組織器官的采集　組織器官采集包括尸解或手術(shù)后采取的胃、肝、腎、肺等重要器官標(biāo)本,尸解最好在病人死亡后48 h內(nèi)進(jìn)行,要注意防止所用器械帶來(lái)污染。每一采集部位應(yīng)更換消毒器械,每種組織應(yīng)多部位采集,每份標(biāo)本應(yīng)采集50～100 g 于無(wú)菌潔凈容器

13、中,分別保存冷藏送檢。,（6）從業(yè)人員帶菌檢查　細(xì)菌性食物中毒對(duì)從業(yè)人員帶菌檢查非常重要,糞便用肛拭管直接采樣(不宜留便) ,保存于增菌液中；對(duì)患有呼吸道或皮膚病從業(yè)人員,用無(wú)菌拭子對(duì)其咽部或皮膚病灶處進(jìn)行涂抹采樣,保存于無(wú)菌試管或增菌液中同時(shí)涂片數(shù)張(立即火焰固定) 。,（7）直接平板劃線分離當(dāng)高度懷疑為某些常見(jiàn)細(xì)菌性食物中毒時(shí)，為縮短檢測(cè)時(shí)間，常根據(jù)要求用可疑樣品在采樣現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行直接平板劃線分離。平板劃線分離培養(yǎng)細(xì)菌的目的

14、是將病理材料中的細(xì)菌分散，以便使細(xì)菌單在，從而發(fā)育成單個(gè)菌落，防止長(zhǎng)成菌苔，避免可疑菌被雜菌掩蓋。原理：表面劃線，可疑菌被稀 釋，單個(gè)菌發(fā)育成肉眼可見(jiàn)的有 某些特征的菌落。,,,方法：1.將整個(gè)平板劃分成A、 B、C、D四個(gè)面積不等 的區(qū)域（目測(cè)）。 各區(qū)之間的交角應(yīng)為120℃左右（平板轉(zhuǎn)動(dòng)一定角度約60℃），以便充分利用整個(gè)平板的面積，而且采用這種分區(qū)法可使D區(qū)與A區(qū)劃出的線條相平行，并可避免此兩區(qū)

15、線條相接觸。,2.點(diǎn)燃酒精燈后， 左手持皿，底朝 下，開(kāi)口向上， 右手持接種環(huán)， 在火焰上燒灼 冷卻后取少許 檢樣涂在培養(yǎng)基邊緣，將接種環(huán)上多余的檢樣在火焰上燒掉，接種環(huán)自涂抹處與平板面成30～40°夾角，以腕力在平板表面輕輕地分區(qū)進(jìn)行“Z”字形劃線，先在A區(qū)劃3-4條連續(xù)的平行線(線條多少應(yīng)依挑菌量的多少而定)。,3. 劃完A區(qū)后應(yīng)立即 燒掉環(huán)上的殘菌，以 免因菌過(guò)多而影響

16、后 面各區(qū)的分離效果。4. 將燒去殘菌后的 接種環(huán)在平板培養(yǎng)基 邊緣（無(wú)菌）冷卻一 下，并使B區(qū)轉(zhuǎn)到上方，接種環(huán)通過(guò)A區(qū)(菌源區(qū))將菌帶到B區(qū)（注意壓線），進(jìn)行“Z”字形劃線。再?gòu)腂區(qū)作C區(qū)的劃線。最后經(jīng)C區(qū)作D區(qū)的劃線，劃D區(qū)時(shí)切勿重新接觸A、B區(qū)，以免極該兩區(qū)中濃密的菌液帶到D區(qū)，影響單菌落的形成。5. 隨即將皿底放入皿蓋中，燒去接種環(huán)上的殘菌。,,三、水污染事件的樣品采集,在調(diào)查水域污染狀況時(shí)，

17、需進(jìn)行綜合分析判斷，抓住基本點(diǎn)（如水流入前、流入后充分混合的地點(diǎn)，用水地點(diǎn)，流出地點(diǎn)等），以取得代表性水樣。對(duì)江河、湖泊、泉水、井水等水源采樣時(shí)，將容器浸入水體中，待水至容器2／3處時(shí)取出。在采集管網(wǎng)系統(tǒng)水樣前，先消毒，再放水5分鐘，以保證樣品具有代表性。嚴(yán)格按無(wú)菌采樣規(guī)范要求采樣。,四、標(biāo)本的送檢,中毒標(biāo)本應(yīng)盡快分析,標(biāo)本送檢前,應(yīng)根據(jù)采樣記錄和樣品登記表清點(diǎn)樣品,填好裝箱單和送樣單,盛裝標(biāo)本的容器或包裝要牢固,防止破碎和污染,

18、把標(biāo)本放入樣品箱(或塑料桶) 中由專人負(fù)責(zé),立即送檢。微生物檢驗(yàn)和易變質(zhì)標(biāo)本一般從取樣到檢驗(yàn)不應(yīng)超過(guò)2 h ,如超過(guò)2 h ,應(yīng)將標(biāo)本保持在8 ℃以下,且不得超過(guò)6 h。短途(市內(nèi)) 運(yùn)送加冰保冷即可;長(zhǎng)途運(yùn)送需加干冰保冷（高溫季節(jié)特別注意） 。,,標(biāo)本采集與送檢是食物中毒調(diào)查處理過(guò)程中重要步驟,要求在標(biāo)本采集后應(yīng)盡可能地用快速檢驗(yàn)方法在現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行定性檢驗(yàn),以協(xié)助診斷;對(duì)現(xiàn)場(chǎng)無(wú)法進(jìn)行檢驗(yàn)的標(biāo)本在保證標(biāo)本原始狀態(tài)下盡快送檢,以便在最短的時(shí)

19、間內(nèi)查明中毒原因,采取有效的搶救措施搶救病人,制定控制措施防止蔓延。,五、注意事項(xiàng),1.采樣前應(yīng)通知實(shí)驗(yàn)室做好準(zhǔn)備，必要時(shí)，邀請(qǐng)實(shí)驗(yàn)室人員到現(xiàn)場(chǎng)采樣。 2.要填寫《采樣記錄》，《采樣記錄》中的采樣目的項(xiàng)要填寫具體的檢驗(yàn)項(xiàng)目?！恫蓸佑涗洝芬行l(wèi)生調(diào)查人和被采樣人的簽名。3.樣品必須貼上標(biāo)簽，填寫名稱或編號(hào)、時(shí)間、地點(diǎn)、數(shù)量、現(xiàn)場(chǎng)條件、采樣人等。4.做到嚴(yán)密封閉包裝，置冰箱內(nèi)保存，溫度通?？刂圃? ℃以下，并應(yīng)在6小時(shí)內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室，如

20、無(wú)條件時(shí)，在樣品采集和運(yùn)送途中應(yīng)用冰壺冷藏。,,5.樣品容器最好是清潔的玻璃器皿，也可用無(wú)色塑料制品，切勿使用金屬或陶土器皿。如發(fā)現(xiàn)容器可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)，應(yīng)在檢驗(yàn)報(bào)告上注明。6. 食品樣品采集盡量采取中毒患者食用后的剩余食品;無(wú)直接剩余食品時(shí)，采集可疑中毒食品的包裝或者用滅菌生理鹽水洗滌盛過(guò)可疑中毒食品的容器，取洗滌液;必要時(shí)采集半成品或原料。7. 可疑細(xì)菌性食物中毒或原因不明時(shí)，要用無(wú)菌采樣方法進(jìn)行。,,8. 可疑細(xì)菌性食物

21、中毒或原因不明時(shí)，盡可能采集未用藥患者的樣品，但用藥后的樣品仍可能有價(jià)值。9.大便樣品采集必須用采便管采集腹瀉病人大便，若讓中毒病人自行留便可能影響致病菌的檢出率。 10. 對(duì)大型食物中毒一般至少應(yīng)采集10-20名具有典型臨床癥狀的患者的檢驗(yàn)樣品，同時(shí)采集部份且有相同進(jìn)食史但未發(fā)病者的同類樣品做對(duì)照。,,11.血液采集 懷疑感染型細(xì)菌性食物中毒時(shí)，采中毒病人急性期(3天內(nèi))和恢復(fù)期(2周左右)靜脈血各3ml，至少采集5名病

22、人，同時(shí)，采集正常人靜脈血作為對(duì)照，觀察抗體效價(jià)的變化，以便明確致病菌。當(dāng)可疑化學(xué)性食物中毒時(shí)，根據(jù)情況也應(yīng)考慮采集血液樣品。12.當(dāng)懷疑細(xì)菌性食物中毒時(shí)，應(yīng)根據(jù)對(duì)食品加工人員帶菌情況調(diào)查結(jié)果進(jìn)行采樣，可用采便管對(duì)廚師進(jìn)行肛拭。對(duì)患有呼吸道感染或皮膚病從業(yè)人員，應(yīng)對(duì)其咽部皮膚病灶處進(jìn)行涂抹采樣。13.送樣要及時(shí)，做細(xì)菌檢驗(yàn)的樣品應(yīng)在冷藏箱內(nèi)保存，溫度通?？刂圃? ℃以下，并應(yīng)在6小時(shí)內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室。,影響檢測(cè)的因素,不恰當(dāng)?shù)倪x擇 不