細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本的采集、運(yùn)送與處理

1、細(xì)菌培養(yǎng)及鑒定,,概念,細(xì)菌培養(yǎng)：細(xì)菌培養(yǎng)是一種用人工方法使細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的技術(shù)。用人工方法將采集的標(biāo)本接種于培養(yǎng)基上，使其生長(zhǎng)繁殖。對(duì)培養(yǎng)出來(lái)的細(xì)菌進(jìn)一步鑒定分型及藥物敏感試驗(yàn)，為臨床的治療及抗生素選擇提供幫助。分離培養(yǎng)：將目標(biāo)菌培養(yǎng)并從雜菌中分離出來(lái)的過(guò)程.純培養(yǎng)：將單一的細(xì)菌（也可以是細(xì)胞原蟲(chóng)等）進(jìn)行增殖,不含其他雜菌,內(nèi)容簡(jiǎn)介,細(xì)菌培養(yǎng)基本原則常見(jiàn)臨床標(biāo)本的采集、運(yùn)送與處理,標(biāo)本采集的普遍原則,避免自身菌群的污染，只要可能

2、的話，應(yīng)該確定一個(gè)代表感染過(guò)程的標(biāo)本。選擇正確的解剖部位，采用適當(dāng)?shù)募夹g(shù)和設(shè)備采集標(biāo)本。選擇合適的部位采集用于厭氧菌培養(yǎng)的標(biāo)本。收集標(biāo)本量要足夠，量少可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。每份標(biāo)本上注明姓名，標(biāo)本來(lái)源，采集部位，時(shí)間和日期。將標(biāo)本放在設(shè)計(jì)用于提高可能病原體的生存、無(wú)漏、無(wú)菌、無(wú)潛在安全性問(wèn)題的容器內(nèi)。,標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)的原則,所有標(biāo)本必須立即送交實(shí)驗(yàn)室，最好不要超過(guò)2小時(shí)，如標(biāo)本處理不得不延遲，應(yīng)在合適的條件下儲(chǔ)存，但不超過(guò)24小時(shí)。

3、對(duì)環(huán)境敏感的微生物包括志賀氏菌（應(yīng)立即處理）、淋球菌、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌（對(duì)低溫敏感）。腦脊液、生殖器、眼或內(nèi)耳標(biāo)本不要冷凍。,運(yùn)送培養(yǎng)基原則,運(yùn)送所有細(xì)菌 需氧菌、厭氧菌、苛氧菌細(xì)菌不生長(zhǎng) 非營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基保持細(xì)菌存活: 標(biāo)本采集后超過(guò)24 h不應(yīng)增加或減少活菌數(shù)量,標(biāo)本的拒絕接收原則,未貼或錯(cuò)貼標(biāo)簽送檢延遲不正確的轉(zhuǎn)運(yùn)溫度和轉(zhuǎn)運(yùn)工具不合適或泄漏的容器有明顯污染的標(biāo)本干涸的拭子標(biāo)本標(biāo)本量不足同

4、一天內(nèi)同一個(gè)檢測(cè)條件的重復(fù)標(biāo)本（血培養(yǎng)除外）,問(wèn)題標(biāo)本的處理,與送檢醫(yī)生或護(hù)士聯(lián)系。對(duì)非損傷方法取得的標(biāo)本，再送新標(biāo)本。對(duì)經(jīng)損傷程序取得的標(biāo)本，和臨床聯(lián)系后可以處理，但要在申請(qǐng)單上注明問(wèn)題。特殊情況下，即使標(biāo)本質(zhì)量有損害，也必須處理。疑難病癥罕見(jiàn)病例傳染性疾病的會(huì)診,血液細(xì)菌培養(yǎng),臨床上疑為敗血癥、膿毒血癥或其他血流感染的患者，需做血液細(xì)菌培養(yǎng)以明確病原。及時(shí)、準(zhǔn)確地從患者血液中分離出病原菌，才能正確實(shí)施有效地抗菌治療，從而有

5、助于提高治愈率和降低醫(yī)療費(fèi)用。,采血時(shí)機(jī),在出現(xiàn)臨床癥狀后應(yīng)盡快抽血作培養(yǎng)，最好在發(fā)熱初期和高峰或寒戰(zhàn)時(shí)。原則上應(yīng)選擇在抗菌藥物應(yīng)用之前，對(duì)已應(yīng)用藥物而病情不允許停藥的患者也應(yīng)在下一次用藥前采血。,采血部位,通常采血部位為肘靜脈。疑似細(xì)菌性心內(nèi)膜炎時(shí)，以肘動(dòng)脈或股動(dòng)脈采血為宜。多次采血時(shí), 應(yīng)在不同部位進(jìn)行。不要從血管插管內(nèi)采血。切忌在靜滴抗菌藥物的靜脈處采取 血標(biāo)本。,采血方法,采血部位的局部皮膚應(yīng)嚴(yán)格消毒。將采集的血

6、液注入血培養(yǎng)瓶前，應(yīng)更換針頭或過(guò)火消毒針頭。血培養(yǎng)瓶口也要消毒，并待酒精揮發(fā)后（建議用酒精燈燒灼瓶口）再注入血樣, 。,采血量,每次采血量成人5～10ml，嬰幼兒1～2ml，培養(yǎng)基與血液之比以10：1為宜，以稀釋血液中的抗生素。每增加1ml血量平均提高陽(yáng)性率3.2%。,培養(yǎng)條件,視患者的感染、用藥情況選用不同的培養(yǎng)瓶。真菌培養(yǎng)可和普通培養(yǎng)共用一需氧瓶。不需要每個(gè)血培養(yǎng)都作厭氧培養(yǎng)。若同一次抽血既做需氧也做厭氧，應(yīng)先厭氧再需氧。黃

7、色——小兒瓶藍(lán)色——未用抗生素需氧綠色——已用抗生素需氧（√）紫色——未用抗生素厭氧橙色——已用抗生素厭氧（√）,胸腹水及腦脊液標(biāo)本,采集: 以無(wú)菌操作穿刺抽取，直接注入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。量少注入小兒瓶，量多的注入成人瓶。運(yùn)送: 若床邊沒(méi)有接種，用帶蓋的無(wú)菌容器送檢。,血液和無(wú)菌體液的處理,血液或無(wú)菌體液抽取后應(yīng)立即放入血培養(yǎng)瓶,立即送檢或室溫保存,不能放冰箱!實(shí)驗(yàn)室接到標(biāo)本應(yīng)立即放入血培養(yǎng)儀。中夜班收到標(biāo)本放置室溫,不用放

8、置35℃溫箱 。對(duì)急診室送來(lái)或室溫久置的標(biāo)本，應(yīng)先檢查瓶底有無(wú)變化，如變黃，應(yīng)先涂片并盲傳，以防漏檢。,尿液標(biāo)本,標(biāo)本采集時(shí)間:應(yīng)在用藥前或停藥5天后留取標(biāo)本以晨起第一次尿?yàn)橐耸鼓蛞涸诎螂變?nèi)停留6-8h以上(給細(xì)菌足夠的繁殖時(shí)間)。,尿液標(biāo)本采集方法,中段尿：女性采樣前應(yīng)先用肥皂水或0.1%高錳酸鉀溶液沖洗外陰部及尿道口。男性須翻轉(zhuǎn)包皮沖洗，用0.1%新潔爾滅消毒尿道口，滅菌紗布擦干。棄前段尿，無(wú)菌杯收集中段尿。 導(dǎo)尿管

9、導(dǎo)尿無(wú)菌操作進(jìn)行導(dǎo)尿可減少尿道污染。對(duì)留置導(dǎo)尿者，可用碘酒消毒尿道口處的導(dǎo)尿管壁，用聯(lián)空針筒的細(xì)針斜穿管壁抽吸尿液；或拔去閉式引流的集尿袋，棄去導(dǎo)尿管前段尿液，留無(wú)污染的膀胱內(nèi)尿液數(shù)毫升送檢。不可從集尿袋的下端管口留取標(biāo)本。長(zhǎng)期留置導(dǎo)尿管者，應(yīng)在更換新導(dǎo)尿管后留取尿標(biāo)本 。,尿液標(biāo)本采集方法,膀胱穿刺法: 是收集尿液的最好方法, 尤其對(duì)厭氧菌檢查,但由于是侵入損傷性操作,臨床常少用,收集的標(biāo)本可直接注入血培養(yǎng)瓶中。腎盂尿采集

10、法: 應(yīng)請(qǐng)泌尿科醫(yī)生采取, 左右側(cè)的標(biāo)本要標(biāo)明,收集的標(biāo)本可直接注入血培養(yǎng)瓶中。,尿液標(biāo)本運(yùn)送和保存,無(wú)菌杯立即送檢室溫下尿標(biāo)本擔(dān)擱稍久可導(dǎo)致尿內(nèi)細(xì)菌數(shù)量明顯增加而影響病原菌與污染菌的區(qū)分和細(xì)菌定量。不能立即送檢者，可暫存4℃冰箱。,尿液標(biāo)本處理,2小時(shí)內(nèi)處理完畢培養(yǎng)基：血瓊脂和麥康凱瓊脂。接種方法：10ul接種環(huán)垂直插入充分混勻的樣品中取一環(huán)尿液，劃線方法為從上到下劃一條直線，再畫(huà)一條垂直線，反復(fù)劃線呈棋盤(pán)狀。35

11、℃培養(yǎng)18-24h，觀察結(jié)果。,,,,,,,呼吸道標(biāo)本,標(biāo)本留取質(zhì)量的好壞直接影響到對(duì)下呼吸道病原學(xué)的診斷。標(biāo)本留取不當(dāng)會(huì)導(dǎo)致抗菌治療失敗,以及造成耐藥菌的出現(xiàn)。,標(biāo)本采集時(shí)間,痰液：以晨痰為好。多數(shù)患者晨痰較多，即使對(duì)痰量少的患者，也以清晨采集最為容易。對(duì)支氣管擴(kuò)張癥或與支氣管相通的肺空洞患者，清晨起床后進(jìn)行體位引流，可采集大量痰液。最好在應(yīng)用抗菌藥物之前或停藥1天后采集標(biāo)本。鼻咽拭子 ： 應(yīng)于抗菌藥物治療前采集為好。咽部又是呼

12、吸和食物的通路，因此亦以晨起后采集為宜。,痰標(biāo)本采集方法,自然咳痰：清水反復(fù)漱口后用力咳痰，從呼吸道深部咳出新鮮痰液于無(wú)菌容器送檢。痰量極少者可用45℃10%氯化鈉溶液霧化吸入導(dǎo)痰。氣管穿刺法: 適用于昏迷和咳嗽乏力患者。纖維支氣管鏡抽取法: 適用于纖維支氣管鏡檢查或治療的患者。用纖維支氣管鏡可直接在病灶部位采集高濃度的感染病原菌，但不能完全避免咽喉部正常菌群感染。小兒取痰法：用彎壓舌板向后壓舌，用棉拭子伸入咽部，小兒因壓舌刺激咳

13、嗽時(shí)，可噴出肺部或氣管分泌物粘在拭子上，從而獲得標(biāo)本。雙側(cè)肺部感染伴人工氣道如氣管切開(kāi)或氣管插管患者，可用吸痰管經(jīng)人工氣道估插至葉支氣管水平吸引痰液。,痰標(biāo)本運(yùn)送和保存,從病人留痰后應(yīng)在1h內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室不能及時(shí)送檢者，可暫存4℃冰箱。室溫下?lián)鷶R數(shù)小時(shí)定植于口咽部的非致病菌呈過(guò)度生長(zhǎng)而肺炎鏈球菌、葡萄球菌和流感嗜血桿菌檢出率明顯降低未用運(yùn)送培養(yǎng)基的標(biāo)本送到實(shí)驗(yàn)室后應(yīng)在30分鐘內(nèi)接種到相應(yīng)培養(yǎng)基,痰標(biāo)本的處理,培養(yǎng)基：血瓊脂、麥康凱瓊

14、脂、嗜血桿菌巧克力瓊脂和沙保弱瓊脂。劃線方法：分四區(qū)劃線，每次劃下一區(qū)前都要燒灼接種環(huán)，待冷卻后再劃。下一區(qū)與上一區(qū)要相交4-6次。35℃5%-10%二氧化碳中培養(yǎng)24-48h。,,,,,,咽拭子及口腔拭子,采集前患者應(yīng)用冷開(kāi)水反復(fù)漱口，拭子的選擇：要求無(wú)菌、不含抑制劑；預(yù)先沾濕拭子（非常重要）；由檢查者將舌向外拉，使腭垂盡可能向外牽引，將棉拭子通過(guò)舌根到咽后壁或腭垂的后側(cè)，涂抹數(shù)次以取得標(biāo)本。對(duì)化膿性扁桃體炎或口腔念珠菌病

15、，直取病灶部位，拭子要避免接觸口腔及舌粘膜。減少污染。立即送檢。室溫保存。接種同痰,保護(hù)性毛刷標(biāo)本的處理,取完后加入1ml無(wú)菌生理鹽水立即送檢。震蕩、離心、涂片染色。接種培養(yǎng)基同痰接種劃線方法同尿培養(yǎng),糞便培養(yǎng),感染標(biāo)本：感染性腹瀉，多由志賀菌、沙門(mén)菌、弧菌、耶爾森菌等腸道致病菌感染所引起。將標(biāo)本接種在相應(yīng)的選擇性分離培養(yǎng)基上即可，弧菌、耶爾森菌應(yīng)先增菌后培養(yǎng)以提高檢出率。住院患者腹瀉標(biāo)本：多為大量使用廣譜抗生素后導(dǎo)致菌群

16、失調(diào)引起。住院超過(guò)3天或入院診斷不是腸胃炎的不做常規(guī)糞便培養(yǎng)。應(yīng)考慮梭狀芽胞桿菌培養(yǎng)或毒素測(cè)定。常見(jiàn)病原菌有艱難梭菌、彎曲菌、葡萄球菌、腸球菌、念珠菌等。選擇培養(yǎng)基應(yīng)根據(jù)涂片結(jié)果而定。,糞便標(biāo)本采集,應(yīng)在發(fā)病早期并且盡量在用抗生素治療前采集。排便后，挑取有膿血、黏液部分的糞便（液狀糞便則取絮狀物），稀便不少于1ml，固體便不少于1克，無(wú)便患者可用直腸拭子。對(duì)不易獲取糞便者或嬰幼兒，可用肛拭采集。將拭子前端用無(wú)菌甘油水濕潤(rùn)。然后插

17、入肛門(mén)約4～5cm（幼兒約2～3cm）處，輕輕旋轉(zhuǎn)擦取直腸表面黏液后退出，置運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)送檢。除嬰兒和有活動(dòng)性腹瀉癥狀的患者外不推薦用拭子做常規(guī)病源檢查。,糞便標(biāo)本運(yùn)送,卡波氏管：普通培養(yǎng)堿性蛋白胨水：霍亂弧菌培養(yǎng)難辨梭菌培養(yǎng)：及時(shí)送檢，用厭氧輸送培養(yǎng)基。,糞便標(biāo)本處理,普通培養(yǎng)∶MAC、SS、10%綿羊血的彎曲桿菌培養(yǎng)基（暫無(wú))四區(qū)劃線（同痰標(biāo)本）MAC、SS 35℃培養(yǎng)10%綿羊血的彎曲桿菌培養(yǎng)基42℃ 5%-10%

18、二氧化碳培養(yǎng),生殖道、尿道標(biāo)本采集,男性患者:尿道標(biāo)本:2h不排尿清洗龜頭后,用碘伏等消毒后,擠出分泌物或以專用細(xì)拭子插入尿道口1-2cm旋轉(zhuǎn)采取分泌物立即送檢。前列腺液標(biāo)本: 應(yīng)由醫(yī)師按摩前列腺,以無(wú)菌操做自尿道口采取前列腺液放在無(wú)菌杯內(nèi)送檢。,生殖道、尿道標(biāo)本采集,女性患者: 成年患者: 應(yīng)在擴(kuò)陰器的支持下,以無(wú)菌棉拭子擦去分泌物，再用新的無(wú)菌拭子緊貼宮頸內(nèi)道采樣送檢。未成年患者: 不應(yīng)使用擴(kuò)陰器, 應(yīng)以無(wú)菌拭子在陰道口

19、處采取分泌物送檢。尿道：2h不排尿，拭去尿道口滲出物，再插入尿道口1-2cm旋轉(zhuǎn)采取分泌物立即送檢。,生殖道、尿道標(biāo)本處理,立即送檢普通培養(yǎng)和淋球菌培養(yǎng)：室溫支原體、衣原體：4℃保存,生殖道標(biāo)本處理,普通培養(yǎng)：血瓊脂三區(qū)劃線35℃培養(yǎng),手術(shù)創(chuàng)口、燒傷創(chuàng)面與膿液處理,無(wú)菌生理鹽水擦洗病灶表面后，用棉拭子采取病灶深部的膿液和分泌物，置運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)送檢。采2個(gè)拭子，一個(gè)培養(yǎng)，一個(gè)涂片。 開(kāi)放性膿腫：盡可能抽吸或?qū)⑹米由钊雮冢o