大鼠i型膠原col-i酶聯(lián)免疫分析

1、大鼠I型膠原（COLI）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍：96T1gL32gL使用目的：本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中I型膠原（COLI）含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠I型膠原（COLI）水平。用純化的大鼠I型膠原（COLI）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入I型膠原（COLI），再與HRP標(biāo)記的I型膠原（COLI）抗體結(jié)合，形成抗體抗原酶標(biāo)抗體復(fù)合物

2、，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的I型膠原（COLI）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠I型膠原（COLI）濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml1瓶6ml1瓶12孔8條6ml1瓶6ml1瓶6ml1瓶789終止液6ml1瓶0.5ml1瓶1.5ml1瓶1份2酶標(biāo)試劑標(biāo)準(zhǔn)品（64gL）標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液3酶

3、標(biāo)包被板4樣品稀釋液5顯色劑A液6顯色劑B液10說明書11封板膜12密封袋2張1個(gè)標(biāo)本要求1標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。32gL16gL8gL4gL2gL5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品3

4、號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液150l的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液150l的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液150l的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液150l的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50l，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40l，然后再加待測樣品10l（樣品

5、最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50l，空白孔除外。7.溫育：操作同3。8.洗滌：操作同5。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50l，再加入顯色劑B50l，輕輕震蕩混勻，37℃避光