豬藍耳病及其防控策略

1、豬藍耳病及其防控策略,王和平 15802627769 湖南中岸生物藥業(yè)有限公司,豬藍耳病概述,豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS，簡稱豬藍耳病）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的，以妊娠母豬流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎、木乃伊胎等生殖障礙和各階段年齡的豬的呼吸道癥狀和仔豬斷奶前死亡率高為主要特征的接觸性傳染病。,1987，首次在美國 “豬的神秘病”；未分離到病毒。1990年六月在德國 “歐洲流產(chǎn)風暴”被命名為“母豬后期流產(chǎn)”，19

2、90年12月開始荷蘭的“豬流行性流產(chǎn)和呼吸道綜合征”，1991年荷蘭出現(xiàn)了“藍色流產(chǎn)”。1991年荷蘭中央獸醫(yī)局用豬肺泡巨噬細胞分離到致病因子“萊利斯塔的病毒”LV-- Lelystad（地名） ，1992年國際獸醫(yī)局決定使用“豬繁殖與呼吸綜合征”。1998年我國的臺灣從美國引種豬時就帶入本??；1995年我國大陸是從加拿大引種查出PRRSV抗體并分離到病毒。1996年郭寶清首次從國內(nèi)發(fā)病的豬群中分離出PRRSV；2006年，

3、首先在我國南方爆發(fā)的“豬無名高熱”疫情中，農(nóng)業(yè)部最終調(diào)查結(jié)果表明，豬繁殖與呼吸障礙綜合征變異株在此次疫情中扮演了重要角色。,PRRS的流行史,分類地位 PRRSV屬于尼多病毒目(Nidovirales)、動脈炎病毒科、動脈炎病毒屬的成員，根據(jù)病毒的抗原性，基因組及致病性的差異，PRRSV可分為2個型，即歐洲型（LV株為代表株）和美洲型（ATCC-VR2332株為代表株），兩種毒株間氨基酸的同源性約為60%。,PRRS的

4、病原學,PRRSV在OIE和我國病毒分類屬于B（II）類動物傳染病。粒子為球形，呈20面體對稱，直徑48-65nm，有囊膜，表面有纖突。核衣殼直徑25-30nm，外繞脂質(zhì)雙層膜。N蛋白是核衣殼蛋白，抗原型最強E蛋白是由ORF5編碼的，能誘導中和抗體。該病毒不能凝集紅細胞，無血凝活性,PRRSV的形態(tài)和理化特性,PRRS的形態(tài),▲PRRSV對乙醚、氯仿等脂溶劑敏感。▲不耐熱，56℃處理15-20分鐘，37℃處理10-24小時，

5、20 ℃放置6天，病毒滴度下降10倍。56℃處理45分鐘，37℃處理48小時，病毒徹底滅活?！睗竦沫h(huán)境有助于PRRSV 存活，低溫下保存的PRRSV具有較好的穩(wěn)定性，而干燥的環(huán)境中則迅速失活?！鳳RRSV只在一個很窄的pH值范圍保持穩(wěn)定，pH小于5或大于7的情況下，其感染力下降90%以上。,理化特性,PRRSV基因組為不分節(jié)段、單股正鏈RNA病毒，其基因組長約15kb,含有8個開放閱讀框(ORF)，病毒基因組的每個ORF與相鄰

6、的ORF發(fā)生部分重疊。,● ORF1編碼病毒RNA的復制酶和聚合酶。 ● ORF2-7分別編碼病毒的GP2、GP3、GP4、 GP5、M和N蛋白。,分子生物學,,,,,,,ORF2,ORF3,ORF4,ORF5,ORF6,,ORF7,,An,,,,,ORF1ab,,,,An,,,,,15.1kb,GP2 GP3 GP4 GP5 M N,771bp

7、 765bp 537bp 603bp 525bp 372bp,,,,,,,,,,,,,,,AnAnAnAnAnAnAn,mRNA1234567,,,PRRSV VR2332,PRRSV基因組,●ORF1編碼病毒RNA的復制酶和聚合酶。 ●ORF2-7分別編碼病毒的GP2、GP3、GP4、GP5、M和N蛋白?！裼蒓RF5編碼的GP5蛋白為囊膜糖蛋白，可

8、誘導細胞凋亡，這可能與疾病的發(fā)生有關(guān)?！馩RF6編碼的M蛋白是基質(zhì)蛋白，M蛋白不僅可誘導產(chǎn)生中和抗體，還能夠誘發(fā)很強的特異性細胞免疫應答。 ●N蛋白即核衣殼蛋白，由ORF7編碼，N蛋白在病毒粒子中含量較高，免疫原性極強，是PRRS診斷中具有診斷意義的結(jié)構(gòu)蛋白之一，但其產(chǎn)生抗體無中和活性和保護性免疫反應。,基因及其編碼蛋白,藍耳病的四個特點,1、抗體依賴性病毒增殖效應(ADE) ADE是指在一定抗體存在下可介導和加強病

9、毒的感染力。在肺泡巨噬細胞中加入一定滴毒的PRRSV抗體，可以使PRRSV滴度提高10-100倍。,–早期誘導產(chǎn)生的抗體能夠促進病毒在機體內(nèi)的復制，促進藍耳病臨床癥狀的形成,,,,,非中和抗體,,中和抗體,,,藍耳病的四個特點,２、強烈的免疫抑制破壞非特異免疫的巨噬細胞（PAM）系統(tǒng)使豬喪失了抗感染能力、對疫苗的反應能力和對藥物治療的支持能力極易引起混合感染或繼發(fā)感染,巨噬細胞的作用,健康的豬巨噬細胞吞噬病源微生物--- 機體

10、健康 的保障,藍耳病致病機理,藍耳病毒強毒導致巨噬細胞死亡,,由藍耳病引起的混合感染和繼發(fā)感染是使被感染豬群死亡率高的主要原因,繼發(fā)感染,免疫抑制豬瘟疫苗免疫抗體上不去,促進PCV2繁殖和擴散能力,藍耳病病毒感染對豬瘟疫苗免疫的影響,,,豬藍耳病感染與豬瘟疫苗免疫應答的關(guān)系（后備豬）,注：1.各組的S/P值范圍分別是3.0以上、 2.5～2.0、 2.0～1.5 、 1.5～1.0、1.0以下；2.共102頭后備母豬，豬瘟疫苗已

11、免疫3次。,結(jié)果表明，免疫后豬瘟抗體水平的高低與藍耳病毒感染有很強的負相關(guān)性。藍耳病毒感染越嚴重，其瘟豬抗體水平越低；,臨床檢測一,,,豬藍耳病感染與豬瘟疫苗免疫應答的關(guān)系（經(jīng)產(chǎn)母豬）,注：1.各組的S/P值范圍分別是2.5以上、2.5～2.0、2.0～1.0、1.0～0.4、0.4以下；2. 共67頭經(jīng)產(chǎn)母豬。,結(jié)果同樣表明，經(jīng)產(chǎn)母豬免疫后豬瘟抗體水平的高低與藍耳病毒感染也有很強的負相關(guān)性。藍耳病毒感染越嚴重，其抗體水平越低；,臨床

12、檢測二,PCV感染與藍耳感染關(guān)系,注：為兩者之間的感染相關(guān)性直觀些，表中的數(shù)據(jù)進行了處理,結(jié)論： ①　豬群藍耳病毒感染可強烈干擾了豬瘟疫苗的免疫應答，是目前豬瘟免疫不合格的一個重要原因。 ②　豬群感染圓環(huán)病毒（PCV－2）后可加重藍耳病毒的感染強度，間接干擾母豬群對豬瘟疫苗的免疫應答。辦法：選擇合格的高效價的疫苗；加強管理提高豬體自身抵抗力。,藍耳病的四個特點,3、 容易變異藍耳病病毒是所有檢測到的RNA病毒里進化速度最快的病

13、毒。 高致病性PRRSV 是NsP2基因533-561位連續(xù)缺失29個氨基酸和481位氨基酸的缺失毒株，使之表達的E蛋白也發(fā)生了改變，毒力顯著增強。豬可以被兩種或兩種以上類型的藍耳病病毒感染,藍耳病的四個特點,4 、持續(xù)感染豬感染后2~3周內(nèi)出現(xiàn)病毒血癥，且可以持續(xù)6~7周。藍耳病毒可以在感染豬體內(nèi)存在數(shù)月，感染豬能排毒80-100天（最長357天）并感染同群豬。持續(xù)性感染的后果：亞健康母豬存在，保育豬易感染。,,,藍耳病

14、的特征之一是其能夠長時間在感染豬群及豬體內(nèi)存在，形成持續(xù)性感染,主要傳播方式,1.通過初乳和乳汁將病毒傳給哺乳仔豬2.通過精液傳給配種母豬；3.母豬若在懷孕晚期感染PRRSV，則可發(fā)生經(jīng)胎盤感染妊娠胎兒 疫病傳入的主要方式是引種,藍耳病當前主要癥狀,母豬沒有流產(chǎn)或偶爾出現(xiàn)；死胎、木乃伊可能比較多或根本沒有；產(chǎn)弱仔多，八字腿多；部分仔豬眼瞼水腫；母豬返情率很高；尤其配種后24-40天；44-61天返情；第一胎母豬返情率比

15、較高；保育或中大豬呼吸道病很嚴重。喘氣、發(fā)燒比例20%以上。保育豬眼瞼腫脹、皮膚發(fā)白、毛粗硬、甚至腹部出現(xiàn)紫色出血點，耳朵發(fā)紫。,PRRS-母豬繁殖障礙,表現(xiàn)形式：1、懷孕后期感染，流產(chǎn)，產(chǎn)新鮮死胎，并且產(chǎn)活仔豬在斷奶前死亡率升高。2、母豬產(chǎn)前短時發(fā)熱或厭食，分娩時間延長，產(chǎn)后無乳。3、母豬出現(xiàn)病毒血癥，背腹部或耳部出現(xiàn)針尖狀出血點。,PRRS-仔豬呼吸障礙,表現(xiàn)形式：食欲不振，厭食，四肢皮膚出現(xiàn)“斑點”樣充血或發(fā)紺；高熱，

16、呼吸困難、腹式呼吸，犬坐；流淚，眼瞼水腫并形成“淚斑”,1、發(fā)熱或不發(fā)熱，厭食，流感樣癥狀；2、難于控制的腹瀉；3、外表正常豬注射其他疫苗后即發(fā)病。,PRRS-仔豬隱性感染,PRRS-繼發(fā)感染,皮膚發(fā)紅，發(fā)熱，減食，繼發(fā)細菌感染，副豬、鏈球菌、傳胸。造成病毒病免疫失敗，各種疾病混合感染。育肥豬發(fā)育遲緩，生長速度緩慢。保育階段損失20-30%,防控措施,控制藍耳病的三個基本點：,合格、優(yōu)質(zhì)的弱毒苗免疫最基本的豬場生物安全措

17、施必要的、適時的藥物保健措施,藍耳病疫苗,目前國內(nèi)現(xiàn)有滅活疫苗：傳統(tǒng)型滅活疫苗高致病性變異株滅活疫苗弱毒疫苗：傳統(tǒng)型毒株致弱活疫苗高致病性變異株致弱活疫苗自然弱毒株疫苗,國內(nèi)豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）疫苗株,活疫苗經(jīng)典PRRS疫苗 VR2332株CH-1RR98株高致病性PRRS活疫苗湖南株（HuN4-F112株） 江西株（JXA1-R株）天津株（TJM-F92）,,藍耳病疫苗,R98株 中岸，

18、瑞普，南農(nóng)高科 3個廠豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗(VR2332株) 德國 1個廠豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗(Ch-1R株) 哈爾濱維科、上海海利、大北農(nóng)、成都天邦、普萊柯、諾倍威、南京乾元浩、華派和易邦 9個廠高致病性PRRSV活疫苗(JX

19、A1-R株) 9個廠高致病性PRRSV活疫苗（HuN4-F112株） 4個廠高致病性PRRSV活疫苗（TJM-F92株） 5個廠豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗(Ch-1a株） 哈爾濱高致病性PRRSV滅活疫苗(JXA-1) 19個廠 藍耳病活疫苗列表（31個廠）,,,目前的藍耳病

20、疫苗,自然弱毒和人工弱毒的區(qū)別,自然弱毒：本身不致病，在豬體內(nèi)天然存在，不會對豬產(chǎn)生任何影響（致?。?，但是又具有良好的免疫原性，即接種后能有效的預防藍耳病的發(fā)生。人工弱毒：本是強毒，能夠引起豬發(fā)病，但經(jīng)過人工方法致弱后，暫時不對豬產(chǎn)生致病性，接種后也能夠預防藍耳病的發(fā)生，但后遺癥是若干代后存在毒力返強的可能，也就是說接種這種疫苗可能會導致以后藍耳病的爆發(fā)。在科研中，自然弱毒株的疫苗是天然的疫苗，是可遇不可求的毒株，很多研究人員一輩子

21、都得不到。,37,藍耳病弱毒苗免疫后的好處,疾病狀態(tài)下縮短排毒時間縮短病毒血癥和持續(xù)感染時間減輕肺組織的病變縮短病毒在臟器的存留時間預防情況下提高豬群免疫力杜絕了流產(chǎn)風暴，減輕PRDC的病情降低保育豬的發(fā)病率和死亡率、發(fā)病時疾病的可控程度顯著提高減少混合感染和繼發(fā)感染：可以降低圓環(huán)病毒感染對養(yǎng)殖場的影響,影響PRRS疫苗質(zhì)量的關(guān)鍵因素,免疫佐劑,快速提升免疫力，增強免疫效果,蘭芷優(yōu)---中國第1個藍耳病自然弱毒活疫苗,

22、蘭芷優(yōu)的優(yōu)勢,自然弱毒株，安全穩(wěn)定不變異免疫原性好，經(jīng)典變異均保護抗原含量高，純凈高效無應激進口稀釋液，快速提升免疫力滴鼻和肌注，適用于任何豬群,一、自然弱毒株，毒力不返強，安全穩(wěn)定不變異,毒力返強試驗：R98株分離自藍耳抗體陽性而臨床健康的豬群，為美洲型自然弱毒株，高度安全穩(wěn)定。疫苗種毒在細胞上連續(xù)傳100代，豬體連續(xù)回歸10代，毒力穩(wěn)定，不返強。疫苗種毒體內(nèi)外連續(xù)傳30代，病毒基因序列未發(fā)生變異，遺傳穩(wěn)定性好。,蘭芷優(yōu)種毒不

23、同代次病毒接種仔豬無致病性（1-100代不返強）,蘭芷優(yōu)種毒不同代次病毒接種母豬無致病性試驗（F1-F100),不同免疫劑量的安全性試驗：分別以單劑量和10倍劑量免疫1日齡仔豬、14日齡仔豬和不同日齡妊娠母豬（配種前21天后備母豬，妊娠30天經(jīng)產(chǎn)母豬，妊娠60天經(jīng)產(chǎn)母豬及妊娠90天經(jīng)產(chǎn)母豬）。免疫仔豬及母豬精神、食欲、體溫均正常，無任何不良反應，母豬在預產(chǎn)期順利產(chǎn)仔，對各組所產(chǎn)仔豬進行RT-PCR檢測，均未檢測到藍耳病毒。結(jié)果表明：該

24、疫苗對豬是高度安全的。,母豬安全性試驗,注：各免疫每頭肌肉注射10頭份“蘭芷優(yōu)”，對照組肌肉注射生理鹽水。免疫后觀察豬體溫、采食量、增重情況，產(chǎn)仔情況及仔豬成活率等指標，并且對所有仔豬進行藍耳病毒PT-PCR檢測?！皺z測仔豬帶毒*”：分母代表檢測數(shù)，分子代表陽性數(shù)。,仔豬安全性試驗,注：評價指標為：觀察免疫豬體溫、采食量、增重情況；“*”：分母代表檢測數(shù)，分子代表陽性數(shù)。,蘭芷優(yōu),,,10個使用劑量注射后觀察21天，豬的體溫、精神、食欲

25、沒變化,5頭份疫苗各注射0.2ml 觀察10天全部存活,蘭芷優(yōu)疫苗安全檢驗,二、免疫原性好，經(jīng)典變異均保護,R98株與美洲型經(jīng)典毒株VR2332株同源性高達99.5%以上，免疫后能有效刺激機體快速產(chǎn)生保護性抗體、細胞免疫和粘膜免疫，對藍耳病經(jīng)典毒株和變異毒株均能提供有效保護。對不同的藍耳病病毒攻擊，均有良好的交叉保護，對普通藍耳病臨床保護95.4%以上，對高致病藍耳病保護率為80%以上。完全可代替進口藍耳病活疫苗。,蘭芷優(yōu)對變異

26、株藍耳病毒的攻毒保護試驗,用28~30日齡PRRSV抗體陰性健康仔豬5頭，每頭頸部肌肉注射1頭份蘭芷優(yōu)，同時設(shè)同齡PRRSV抗體陰性健康仔豬5頭作為對照。接種后30日，分別用變異毒株JXA1株（105.0TCID50/ml）攻擊，滴鼻2ml/頭，連續(xù)觀察4周，根據(jù)體溫、臨床表現(xiàn)和轉(zhuǎn)歸情況進行判定。結(jié)果表明：疫苗免疫組發(fā)病率降低80%，死亡率降低40%。試驗證明：“蘭芷優(yōu)”對變異株藍耳病有很好的免疫保護作用。見下表：,蘭芷優(yōu)對變異株藍耳病

27、毒的攻毒保護試驗,注：試驗中攻毒毒株為豬繁殖與呼吸綜合征變異毒株JXA1株；臨床表現(xiàn)*：-無明顯臨床異常表現(xiàn)，+表示臨床癥狀嚴重程度；歸宿**：-沒有死亡，剖殺，+死亡。,三、抗原含量高，純凈高效無應激,采用細胞工廠替換原有轉(zhuǎn)瓶生產(chǎn)工藝，同時采用病毒復種技術(shù)，在提高了病毒產(chǎn)量的同時，確保疫苗批內(nèi)一致，批間穩(wěn)定；采用超聲破碎收毒工藝，規(guī)避傳統(tǒng)工藝對病毒免疫原性和效價的影響，確保每頭份疫苗抗原含量≥106.0TCID50 (國標≥105.

28、0TCID50 )，病毒含量高，免疫無需加量，一次免疫僅需1頭份，即可產(chǎn)生較好的免疫保護。采用低溫連續(xù)流離心純化技術(shù)，快速有效地去除細胞培養(yǎng)液中細胞碎片等雜蛋白，疫苗純凈無應激。,細胞工廠,細胞工廠（Cell Factory）是一種設(shè)計精巧的細胞培養(yǎng)裝置，在有限的空間內(nèi)利用了最大限度的培養(yǎng)表面，從而節(jié)省了大量的廠房空間，無需進行任何廠房改造即可實現(xiàn)擴大產(chǎn)能的目的。采用世界最先進的丹麥NUNC公司生產(chǎn)的NUNC細胞工廠系統(tǒng)培養(yǎng)疫苗。

29、目前有1，2，10和40層的規(guī)格的設(shè)備。低污染風險，節(jié)省空間，培養(yǎng)表面經(jīng)測試保證最有利于細胞貼附和生長。特有的專利設(shè)計能有效的保證操作的無菌性，最大限度降低批間差異，提高病毒產(chǎn)量，實現(xiàn)操作規(guī)程化。,細胞工廠培養(yǎng)設(shè)備,病毒復種,細胞長滿單層，接種病毒后，在培養(yǎng)液中再接種一層細胞，提高細胞密度，提高病毒產(chǎn)量，減少批間差異。,連續(xù)流管式分離機,低溫連續(xù)流離心純化技術(shù) Continuous centrifugation technique,1

30、、去除雜蛋白等，降低疫苗副反應2、低溫環(huán)境，快速離心，保持良好的抗原性,四、進口專用稀釋液，快速提升免疫力,中岸生物采用法國進口免疫增強劑，調(diào)節(jié)免疫功能，特別是提高細胞免疫效力，可有效提升疫苗的免疫效果。免疫后7天產(chǎn)生抗體，14天即可產(chǎn)生有效保護，一次免疫有效抗體水平可維持140天。用于緊急免疫，效果顯著。,五、滴鼻和肌注，適用于任何豬群,蘭芷優(yōu)可滴鼻免疫，藍耳病主要是經(jīng)呼吸道傳播感染的，模擬自然感染途徑，滴鼻接種可快速產(chǎn)生局部粘膜免

31、疫，形成藍耳病的第一道防疫屏障，再結(jié)合注射免疫對藍耳病的防控效果更好。,蘭芷優(yōu)滴鼻藍耳病免疫新突破,參考免疫方法,1、藍耳病陰性豬場，不推薦免疫接種疫苗，或僅免疫滅活疫苗（目前幾乎沒有陰性豬場）。2、藍耳病陽性豬場，根據(jù)豬場藍耳病毒情況、抗體情況安排免疫，建議用專用稀釋液稀釋成每頭份2ml，肌肉注射。經(jīng)產(chǎn)母豬 首次應用疫苗，全群普免一次，1頭份/頭，以后實行跟胎免疫；或每4~5個月免疫一次，1頭份/頭。后備母豬 配種前3

32、~6周，1頭份/頭；未免藍耳病疫苗的外購后備母豬進入隔離舍3~5天后免疫一次，1頭份/頭。仔 豬 對未曾用過藍耳病疫苗的豬場，首次免疫對產(chǎn)房和保育舍的所有小豬全群免疫，1頭份/頭；以后對產(chǎn)房內(nèi)未免疫仔豬，2~4周齡免疫一次，1頭份/頭。 3、藍耳病發(fā)病豬場 全群緊急免疫，母豬2頭份/頭、仔豬1頭份/頭，30天后同樣頭份加強免疫一次。,自然弱毒，安全穩(wěn)定不變異：高致病毒株、CH-1R株　?。遥梗钢臧踩行В貉邪l(fā)

33、時間十年，5年大量臨床應用，未發(fā)現(xiàn)基因重組，高度安全（數(shù)據(jù)展示），對高致病毒株有很好保護力（數(shù)據(jù)展示）（豬場使用情況展示）　　高致病毒株不安全：研發(fā)時間短、不建議打母豬、打后發(fā)病　　CH-1R株不安全：已發(fā)生變異（資料展示）、打后發(fā)病效果確切，性價比高：勃林格 同源性在９９.５％以上，效果與勃林格的相當，但價格優(yōu)勢對經(jīng)典毒株和高致病毒株均有良好保護 對普通藍耳病臨床保護95.4%以上，對高致病藍耳病保護