免疫學(xué)檢驗(yàn)基礎(chǔ)理論知識(shí)

1、免疫學(xué)檢驗(yàn)基礎(chǔ)理論知識(shí),胡琳琳,抗原: 凡能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細(xì)胞并能與之發(fā)生特異性結(jié)合的物質(zhì)稱為抗原(antigen、Ag)?？乖镔|(zhì)具有免疫原性與反應(yīng)原性。 免疫原性（抗原作用）: 指能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細(xì)胞的特性。 反應(yīng)原性（抗原反應(yīng)）: 指抗原與相應(yīng)的抗體或致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)的特性。,抗 原,完全抗原與半抗原 完全抗原: 具有免疫原性與反應(yīng)原性的物質(zhì)，多為分子量大于5000的蛋白

2、質(zhì)。 半抗原: 只具有反應(yīng)原性而無免疫原性的物質(zhì)，一般為小分子化合物，例如某些激素、藥物等。,抗 原,免疫系統(tǒng)組成,抗體: 機(jī)體受到抗原物質(zhì)刺激后，由B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞產(chǎn)生的，能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白(Ig)?？贵w的基本結(jié)構(gòu) 所有種類Ig的單體分子結(jié)構(gòu)都是相似的，即由兩條相同的重鏈(H)和兩條相同的輕鏈(L)四條肽鏈構(gòu)成的“Y”字形的分子。,抗 體,IgM:分子量最大的免疫球蛋白，抗原刺激誘

3、導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答中最先產(chǎn)生的抗體。在感染過程中血清IgM水平升高，說明有近期感染，有助于早期診斷。IgG:血清中含量最高，是再次免疫應(yīng)答的主要抗體，是唯一能夠通過胎盤的抗體。感染后出現(xiàn)時(shí)間較晚，持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，是既往感染的標(biāo)志。IgA:分為血清型和分泌型，分泌型IgA是參與粘膜局部免疫的主要抗體。IgE:血清中含量最少，介導(dǎo)1型超敏反應(yīng)。IgD:血清型IgD作用尚不清楚。,免疫球蛋白,定義：抗原與相應(yīng)抗體之間的特異性結(jié)合反應(yīng)。

4、原理：抗原抗體的特異性結(jié)合是基于抗原決定簇與抗體超變區(qū)分子間的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性和親和性。這種特性是有抗原、抗體分子空間構(gòu)型所決定的。,抗原抗體反應(yīng),特異性 空間結(jié)構(gòu)互補(bǔ)，如同鑰匙和鎖，一一對(duì)應(yīng)。 共同抗原：物質(zhì)表面往往不止一種抗原決定簇，兩種不同抗原物質(zhì)可具有部分相同或類似結(jié)構(gòu)的抗原決定簇。能與彼此相應(yīng)的抗體出現(xiàn)交叉反應(yīng)。,抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn),比例性 指抗原與抗體特異性結(jié)合反應(yīng)時(shí)，生成肉眼可見結(jié)合物的量與反應(yīng)物

5、濃度的關(guān)系，只有當(dāng)二者濃度比例適當(dāng)是，才出現(xiàn)可見反應(yīng)。 鉤狀效應(yīng)（倒鉤）：抗體過量-前帶，抗原過量-后帶。,抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn),,,可逆性 抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合復(fù)合物后，在一定條件下又可解離為游離抗原與抗體的特性稱為抗原抗體結(jié)合的可逆性。 復(fù)合物解離因素：1.抗體對(duì)相應(yīng)抗原的親和力。2.環(huán)境因素。PH值，離子強(qiáng)度。,抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn),反應(yīng)物自身因素抗原：理化性狀，表面抗原決定簇的種類和數(shù)目抗體： 來源

6、：來源不同動(dòng)物的免疫血清，等價(jià)帶寬窄不同。 濃度：與相應(yīng)抗原濃度合適才易出現(xiàn)可見反應(yīng)。 特異性與親和力：早期獲得的抗血清親和力低，特異性好；后期獲得的往往親和力高。診斷試劑盡可能選高特異性、高親和力的抗體。才能提高試驗(yàn)的可靠性。,影響抗原抗體反應(yīng)的因素,反應(yīng)環(huán)境條件電解質(zhì) 反應(yīng)必須要有電解質(zhì)參與。酸堿度 一般以pH6～9為易溫度 一般以15 ～ 40℃，最適溫度為37 ℃。范圍內(nèi)溫度

7、越高反應(yīng)速度越快，溫度越低反應(yīng)越慢但結(jié)合的越牢固。>56 ℃會(huì)導(dǎo)致解離甚至變性。,影響抗原抗體反應(yīng)的因素,雙抗體夾心法 適用于檢測(cè)分子中具有至少兩個(gè)抗原決定簇的多價(jià)抗原，而不能用于小分子半抗原。 利用連接在固相載體上的抗體和酶標(biāo)抗體可分別與樣品中被檢測(cè)抗原分子上的兩個(gè)不同抗原決定簇結(jié)合，形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體免疫復(fù)合物。,酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)類型,15,,,,1、已知抗體包 被于載體表面,3、加酶標(biāo)抗體

8、與抗原結(jié)合,4、加酶作用的底物產(chǎn)生顏色,2、加待檢物抗原與抗體結(jié)合,4、加酶作用的底物 不產(chǎn)生顏色,,,,1、已知抗體包 被于載體表面,2、加待檢物無抗 原與抗體結(jié)合,3、加酶標(biāo)抗體 無抗原結(jié)合,+,-,Y,,Y,E,Y,,Y,Y,Y,Y,Y,,,,,Y,Y,,Y,Y,,,,Y,Y,Y,Y,Y,Y,,雙抗體夾心法測(cè)抗原,間接法 此法是測(cè)抗體的常用方法。將抗原連接在固相載體上，樣本中待檢抗體與之結(jié)合成 固

9、相抗原-待檢抗體復(fù)合物，再用酶標(biāo)二抗（針對(duì)待檢抗體的抗體）與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合。,酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)類型,17,,,,,,,,1、已知抗原吸附于載體表面,2、加待檢物無抗體與抗原結(jié)合,3、加酶標(biāo)抗Ig與抗體結(jié)合,4、加酶作用的底物產(chǎn)生顏色,1、已知抗體吸附于載體表面,2、加待檢物有抗體與抗原結(jié)合,3、加酶標(biāo)的抗Ig抗體,4、加酶作用的底物不產(chǎn)生顏色,,,,,,-,,,,,,,Y,E,Y,,,,,,,,,,,+,,間接法

10、測(cè)抗體,競(jìng)爭(zhēng)法 競(jìng)爭(zhēng)法可用于抗原和半抗原的定量測(cè)定，也可對(duì)抗體進(jìn)行測(cè)定。 酶標(biāo)記抗原（抗體）與待測(cè)品中的抗原（抗體）具有相同的與固相抗體結(jié)合的能力；反應(yīng)體系中，固相抗體（抗原）和酶標(biāo)抗原（抗體）是固定限量，且前者的結(jié)合位點(diǎn)少于酶標(biāo)記與待測(cè)抗原（抗體）分子數(shù)量和；反應(yīng)后，結(jié)合于固相載體上的復(fù)合物中被測(cè)定的酶標(biāo)抗原（抗體）的量與待測(cè)品中的抗原（抗體）的濃度成反比。,酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)類型,19,,,,,,,+,-,,Y,,Y

11、,Y,Y,Y,Y,,Y,Y,E,Y,,,,2、加待檢物抗原與酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與抗體結(jié)合,3、加酶作用的底物不顯色或顯色弱,3、加酶作用的底物顯色,1、已知抗體包被于載體表面,1、已知抗體包被于載體表面,2、加待測(cè)物和酶標(biāo)抗原，酶標(biāo)抗原與抗體結(jié)合,,競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原,捕獲法 最常用于IgM抗體檢測(cè)。先將針對(duì)IgM的第二抗體連接于固相載體，用以結(jié)合樣品中所有的IgM抗體，然后加入特異抗原與待檢IgM抗體結(jié)合；再加入抗原

12、特異的梅標(biāo)抗體，最后形成固相二抗- IgM-抗原-梅標(biāo)抗體復(fù)合物。,酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)類型,21,,,,,,,+,-,,,,,1、固相化抗人　IgM,,1、固相化抗人　IgM,2、加待測(cè)物特異性IgM與非特異性IgM和抗人IgM結(jié)合,3、加特異性抗原，與特異性抗體結(jié)合,4、加酶標(biāo)抗體與特異性抗原結(jié)合，加底物顯色,3、加特異性抗原，不能與非特異性IgM結(jié)合,4、加酶標(biāo)抗體無抗原結(jié)合，加底物不顯色,,捕獲法原理,2、