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1、,潔凈車間員工衛(wèi)生及微生物知識(shí)培訓(xùn),,一、微生物的特點(diǎn),分布范圍廣生長(zhǎng)速度快生存能力強(qiáng),我們所生活的環(huán)境中,到處都存在著大量的微生物。在一般空氣中,微生物達(dá)800~3500個(gè)/m3,在土壤中達(dá)1~500×108個(gè)/g,在嚴(yán)重污染的水中可達(dá)107個(gè)/ml。(飲用水要求細(xì)菌總數(shù)≤100個(gè)/ml,大腸桿菌≤3個(gè)/ml。經(jīng)水塔或貯水池貯存后,短期內(nèi)可繁殖至105~106個(gè)/ml。)人的頭皮上有140萬(wàn)個(gè)/cm2,兩手上約有4~4
2、0萬(wàn)個(gè),1g指甲污垢有38億個(gè),1g糞便可達(dá)10~1000億個(gè)。可以說(shuō)微生物是無(wú)處不在,無(wú)處不有。許多以前被人們認(rèn)為是極端(高溫、高壓、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、低溫等)甚至是致死的環(huán)境,現(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)生活著各種類型的微生物(稱為極端微生物)。事實(shí)說(shuō)明,微生物有特別頑強(qiáng)的生存、繁殖和變異能力來(lái)適應(yīng)環(huán)境。,二、微生物特點(diǎn),種類多、分布廣微生物在地球上幾乎無(wú)處不有,無(wú)孔不入,人的皮膚上,口腔,腸道里都有許多微生物。微生物聚集最多的地方是土壤,土壤是各種微生
3、物生長(zhǎng)繁殖的大本營(yíng),約占微生物總量的70-90%,任意取一把土或一粒土,就是一個(gè)微生物世界,不論數(shù)量或種類均最多。在肥沃的土壤中,每克土含有20億個(gè)微生物,即使是貧瘠的土壤,每克土中也含有3-5億個(gè)微生物??諝饫飸腋≈鵁o(wú)數(shù)細(xì)小的塵埃和水滴,它們是微生物在空氣中的藏身之地。哪里塵埃多,哪里的微生物就多。迄今為止,我們知道的微生物約有10萬(wàn)種,目前已知的種類只占地球上實(shí)際存在的微生物總數(shù)的20%,人類生產(chǎn)和生活中僅開發(fā)利用了已發(fā)現(xiàn)微生物種
4、數(shù)的1%。,個(gè)體小、面積大生物的個(gè)體極其微小,必須借助顯微鏡放大幾倍、幾百倍、上千倍,乃至數(shù)萬(wàn)倍才能看清。桿菌的寬度是0.5微米,因此80個(gè)桿菌“肩并肩”地排列成橫隊(duì),也只有一根頭發(fā)絲的寬度。桿菌的長(zhǎng)度約2微米,故1500個(gè)桿菌頭尾銜接起來(lái)僅有一顆芝麻長(zhǎng)。 物體的表面積和體積之比稱為比表面積。大腸桿菌的比表面積是人的30萬(wàn)倍。,吸收多、轉(zhuǎn)化快微生物有驚人的繁殖速度,大多數(shù)微生物幾十分鐘內(nèi)就可以繁殖一代,如細(xì)菌一般每20~30分鐘既可
5、分裂一次;微生物的食譜非常廣泛,凡是動(dòng)植物能利用的營(yíng)養(yǎng),微生物都能利用,大量的動(dòng)植物不能利用的物質(zhì),甚至劇毒的物質(zhì),微生物照樣可以視為美味佳肴。如大腸桿菌在合適條件下,每小時(shí)可以消耗相當(dāng)于自身重量2000倍的糖,而人體則需要40年之久。,適應(yīng)強(qiáng)、易變異多數(shù)細(xì)菌能耐0~-196℃的低溫;在海洋深處的某些硫細(xì)菌可在250~300℃的高溫條件下正常生長(zhǎng);一些嗜鹽細(xì)菌甚至能在飽和鹽水中正常生活;產(chǎn)芽孢細(xì)菌和真菌孢子在干燥條件下能保藏幾十年、
6、幾百年。由于微生物繁殖快,也可在短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生大量變異的后代。正是由于這個(gè)特性,人們才能夠按照自己的要求不斷改良在生產(chǎn)上應(yīng)用的微生物,如青霉素生產(chǎn)菌的發(fā)酵水平由每毫升20單位上升到近10萬(wàn)單位,利用變異和育種得到如此大幅度的產(chǎn)量提高。,三、微生物的類群和形態(tài)結(jié)構(gòu),微生物按其結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成及生活習(xí)性等分為三大類:原核細(xì)胞型:細(xì)菌、放線菌、支原體、衣原體、立克次氏體、螺旋體等真核細(xì)胞型:真菌非細(xì)胞型:病毒 噬菌體,芽孢桿菌
7、 (細(xì)菌),淡水中的螺旋菌 spirochetes .,蠟樣芽孢桿菌,蠟樣芽孢桿菌,蠟樣芽孢桿菌,蠟樣芽孢桿菌(細(xì)菌),,,噬菌體,SARS病毒是一類新發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒,禽流感病毒,愛滋病毒,,,粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征,沙門氏菌的菌落特征,銅綠假單孢菌的菌落特征,弗氏志賀氏菌的菌落特征,粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征,放線菌的菌落特征 A:諾爾斯氏鏈霉菌; B:皮疽諾卡氏菌; C:酒紅指孢囊菌; D:游動(dòng)放
8、線菌; E:小單胞菌; F:皺雙孢馬杜拉放線菌,產(chǎn)抗菌素的放線菌的菌落特征A:卡特利鏈霉菌; B:弗氏鏈霉菌;C:吸水鏈霉菌金淚亞種;D:卡那霉素鏈霉菌;E:除蟲鏈霉菌; F:生磺酸鏈霉菌,,,,,,各種曲霉的菌落,各種病原真菌的菌落,青霉的菌落,青霉的菌落,,,各種酵母菌的菌落,啤酒酵母的菌落,紅酵母的菌落,四、微生物的營(yíng)養(yǎng),水分:水占細(xì)胞漿的70%~90%,是細(xì)胞的重要組成成分
9、。較普遍的觀點(diǎn)認(rèn)為,只有在含水的環(huán)境中微生物才能存活。但也有人發(fā)現(xiàn)在無(wú)水碳?xì)浠衔镏形⑸锟砷L(zhǎng)期存活。碳源:碳源是構(gòu)成細(xì)胞的重要物質(zhì)。有些微生物的碳源必須來(lái)自有機(jī)碳化合物如糖、蛋白質(zhì)、脂肪、有機(jī)酸等(同時(shí)利用其化學(xué)能),屬異養(yǎng)型;有些微生物不需有機(jī)碳化合物,以CO2為碳源,屬自養(yǎng)型(分為光能自養(yǎng)型和化能自養(yǎng)型)。,氮源:氮是組成蛋白質(zhì)和核酸的重要元素。無(wú)機(jī)鹽類:細(xì)菌所需無(wú)機(jī)鹽包括磷、硫、鎂、鐵、鉀、鈉、鈣、氯、錳、鋅、鈷、銅等。其中
10、磷、硫、鎂、鉀、鈉、鐵需要量較多,其他只需微量。生長(zhǎng)因子:生長(zhǎng)因子是某些微生物生長(zhǎng)發(fā)育所必需,而其自身又不能合成的一類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。包括維生素、嘌呤和嘧啶。,五、微生物生長(zhǎng)的影響因素,1、營(yíng)養(yǎng)物2、PH值3、溫度4、氧氣5、滲透壓6、表面張力,六、消毒與滅菌,消毒與滅菌是微生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)中最基本的操作,從事藥品生產(chǎn)和檢驗(yàn)的人員都應(yīng)當(dāng)了解消毒與滅菌的方法及其意義,嚴(yán)格遵守操作規(guī)程,否則會(huì)影響產(chǎn)品質(zhì)量,危害患者安全。,概念,無(wú)菌——不
11、存在活的生物(GMP指南)。 “無(wú)菌”從定義上來(lái)說(shuō)是一個(gè)絕對(duì)的概念,但遺憾的是,在科學(xué)和技術(shù)高度發(fā)展的今天,藥品的絕對(duì)無(wú)菌即做不到,也無(wú)法加以證實(shí)。然而,無(wú)菌制劑的安全性要求人們?cè)O(shè)定無(wú)菌的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)。FDA、歐洲制藥工業(yè)界曾將百萬(wàn)分之一微生物污染率作為滅菌產(chǎn)品“無(wú)菌”的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn),它和蒸汽滅菌后產(chǎn)品中微生物存活的概率為 10-6(即產(chǎn)品的無(wú)菌保證值為6),系同一標(biāo)準(zhǔn)的不同表示法。這一標(biāo)準(zhǔn)于1980起收錄于USP 中,如今已為世界各國(guó)
12、普遍接受和采用。,概念,滅菌——使達(dá)到無(wú)菌狀態(tài)的方法(GMP指南)。用物理或化學(xué)方法殺滅傳播媒介上所有的微生物,使其達(dá)到無(wú)菌(GB)。通常是指殺滅或除去全部活的微生物(包括繁殖體和芽孢)。消毒——用物理或化學(xué)方法殺滅或清除傳播媒介上的病原微生物,使其達(dá)到無(wú)害化(GB)。通常是指殺死病原微生物的繁殖體,但不能破壞其芽孢。所以消毒是不徹底的,不能代替滅菌。,概念,無(wú)菌制劑——不存在活的微生物的制劑(GMP指南)。非無(wú)菌制劑——所含活的微
13、生物量符合衛(wèi)生學(xué)標(biāo)準(zhǔn)的制劑(GMP指南)。,常用消毒劑,① 70%~75%乙醇水溶液;② 0.5%洗必泰溶于70%乙醇,再加入2%甘油,用于皮膚、器具等消毒;③異丙醇 75%水溶液,用于皮膚、器具等消毒;④甲醛 37%~40%甲醛液8~9ml,再加入4~5g高錳酸鉀,每m3熏蒸量,密閉12~24h,刺激性強(qiáng);⑤戊二醛 2%水溶液,用于空氣、器具等消毒。廣譜、高效、低毒,可殺芽孢和病毒,毒性較輕;,常用消毒劑,⑥新潔爾滅(苯扎溴銨
14、) 0.1%水溶液,用于皮膚、粘膜、器具等消毒,有清潔和消毒雙重功效,抗菌譜較窄;⑦杜滅芬(消毒寧) 0.05%~0.1%水溶液,用于皮膚、器具等消毒;⑧過(guò)氧乙酸 a、 0.2%~0.5%水溶液;b、新配0.5%水溶液;c 、1g/m3; 用于器具等消毒,抗菌譜廣,可用于皮膚消毒殺滅某些病毒;熏蒸,但性質(zhì)不穩(wěn)定。⑨乳酸 a、0.33~1mol/L;b、 1~1.5ml/m3熏蒸或與等量苯酚合用熏蒸 噴霧,用于空氣消毒,有強(qiáng)殺菌
15、作用;熏蒸,密閉12h以上。⑩麝香草酚 5%麝香草酚溶于50%乙醇,噴灑墻面、地面,殺霉菌。,干熱滅菌,常見的有火焰、燒灼、干烤和紅外線滅菌等。①火焰、燒灼:通常用于實(shí)驗(yàn)室無(wú)菌操作中金屬或其它耐火材料制成的器具的滅菌。②干烤和紅外線:利用干熱空氣或熱輻射進(jìn)行滅菌。一般135~145℃需3~5h,160~170℃需2h以上,170~180℃需1h以上,180~200℃需0.5~1h。除熱原,則需250℃30min,或200℃45m
16、in,180℃2h??諝鈧鳠崧?,穿透力不強(qiáng),故干熱滅菌時(shí)間長(zhǎng)。干熱滅菌時(shí)烤箱內(nèi)裝入物品應(yīng)留有空隙,以利空氣流動(dòng),否則使箱內(nèi)溫度不均,部分物品滅菌不徹底。,濕熱滅菌,通過(guò)熱蒸汽或沸水使蛋白質(zhì)變性而殺滅微生物的方法。濕熱穿透力強(qiáng),滅菌效果較干熱好。①煮沸或流通蒸汽滅菌:常壓下沸水和蒸汽的溫度是100℃,一般處理30~60min可殺死細(xì)菌繁殖體,但不能完全殺滅芽孢。此法適用于不能高壓蒸汽滅菌的物品。②低溫間隙滅菌(巴斯德滅菌法):將物品先
17、用60~80℃加熱(或煮沸)1h,然后置20~25℃保存24h(或常溫過(guò)夜),使其中殘存的芽孢萌發(fā)成繁殖體,再用以上條件滅菌,如此反復(fù)三次。本法適用于不耐高溫或高溫下易變質(zhì)的物品,但很費(fèi)時(shí)。,高壓蒸汽滅菌(熱壓滅菌),超過(guò)一個(gè)大氣壓時(shí),水的沸點(diǎn)高于100℃,反之亦然。高壓蒸汽滅菌就是通過(guò)加壓提高蒸汽溫度,滅菌效果最好。它簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、可靠、無(wú)毒,是最可靠、應(yīng)用最廣泛的滅菌法。此法適用于耐高溫和潮濕的物品。常用條件為:115.5℃ 、30
18、min; 121.5℃ 、20min; 126.5℃、 15min。,注意事項(xiàng),a.必須完全排出滅菌器內(nèi)的空氣。否則會(huì)影響滅菌器內(nèi)溫度達(dá)到規(guī)定的要求。b. 注意被滅菌物品的溫度。滅菌器內(nèi)溫度與被滅菌物品的溫度一般是一致的,但在蒸汽輸入過(guò)快時(shí),后者可能低于前者,所以升溫時(shí)要有一定的預(yù)熱時(shí)間。另外,降溫過(guò)快易引起玻璃炸裂。因此,對(duì)于一種滅菌產(chǎn)品,應(yīng)制定一固定的滅菌曲線(像凍干曲線一樣)。c. 定期檢查滅菌器內(nèi)溫度的準(zhǔn)確性。,化學(xué)滅菌
19、,利用化學(xué)試劑形成的氣體來(lái)殺滅微生物的方法。常用的滅菌劑為環(huán)氧乙烷(又稱氧化乙烯)。環(huán)氧乙烷是廣譜殺菌劑,能殺滅細(xì)菌、芽孢和多種病毒,還能殺死昆蟲及蟲卵。但由于環(huán)氧乙烷易燃易爆且有毒(有致變異性),用于藥品方面極有限,多用于醫(yī)療器械、塑料制品等滅菌。(不能用于橡膠和乳膠手套,能將其溶解。,濾過(guò)除菌,利用細(xì)菌不能通過(guò)致密孔濾材的原理,除去對(duì)熱不穩(wěn)定的藥品溶液或液體物質(zhì)中的細(xì)菌的方法。過(guò)濾法一般只能除菌,不能除去支原體和病毒。過(guò)濾除菌的效果
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