hplc常見故障排除完美版

1、HPLC常見故障排除完美版（常見故障排除完美版（1）注意：在對NH2改性的色譜柱進行再生時，由于NH2可能成銨根離子的形式存在，因此應(yīng)該在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液完全流出。如果簡單的有機溶劑水的處理不能夠完全洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì)，用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。色譜柱的維護色譜柱的維護1使用預(yù)柱保護分析柱（硅膠在極性流動相離子性流動相中有一定的溶解度）2大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2－7.5，盡量不超過該

2、色譜柱的pH范圍3避免流動相組成及極性的劇烈變化4流動相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理5如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相，應(yīng)在實驗完畢柱子沖洗干凈，并保存大乙腈中6壓力升高是需要更換預(yù)柱的信號HPLC六通閥進樣器的使用及保養(yǎng)六通閥進樣器的使用及保養(yǎng)六通閥進樣器是高效液相色譜系統(tǒng)中最理想的進樣器，它是由圓形密封墊(轉(zhuǎn)子)和固定底座(定子)組成。美國Rheodyne公司的六通閥進樣器最為通用，各大HPLC儀器制造商均以此產(chǎn)品作為儀器的進樣

3、器。工作原理：1、手柄位進樣(Load)位置時，樣品經(jīng)微量進樣針從進樣孔注射進定量環(huán)，定量環(huán)充滿后，多余樣品從放空孔排出；2、將手柄轉(zhuǎn)動至進樣(Inject)位置時，閥與液相流路接通，由泵輸送的流動相沖洗定量環(huán)，推動樣品進入液相分析柱進行分析。雖然六通閥進樣器具有結(jié)構(gòu)簡單、使用方便、壽命長、日常無需維修等特點，但正確的使用和維護將能增加使用壽命，保護接口設(shè)備，同時增加分析準確度。如使用得當(dāng)?shù)脑挘ㄩy進樣器一般可連續(xù)進樣3萬次而無需維修

4、。以下淺談有關(guān)六通閥進樣器的使用及保養(yǎng)事宜(僅供參考)：1、手柄處于Load和Inject之間時，由于暫時堵住了流路，流路中壓力驟增，再轉(zhuǎn)到進樣位，過高的壓力在柱頭上引起損壞，所以應(yīng)盡快轉(zhuǎn)動閥，不能停留在中途。在HPLC系統(tǒng)中使用的注射器針頭有別于氣相色譜，是平頭注射器。一方面，針頭外側(cè)緊貼進樣器密封管內(nèi)側(cè)，密封性能好，不漏液，不引入空氣；另一方面，也防止了針頭刺壞密封組件及定子。2、六通閥進樣器的進樣方式有部分裝液法和完全裝液法兩種。

5、使用部分裝液法進樣時，進樣量最多為定量環(huán)體積的75％，如20gL的定量環(huán)最多進樣15pL的樣品，并且要求每次進樣體積準確、相同；使用完全裝液法進樣時，進樣量最少為定量環(huán)體積的3至5倍，即20gL的定量環(huán)最少進樣60至1001aL的樣品，這樣才能完全置換樣品定量環(huán)內(nèi)殘留的溶液，達到所要求的精密度及重現(xiàn)性。推薦采用100ul的平頭進樣針配合20ul滿環(huán)進樣。3、可根據(jù)進樣體積的需要自已制作定量環(huán)，一般不要求精確計算定量環(huán)的體積，譬8壓緊，然

6、后取下2，再用4將濾網(wǎng)的邊緣壓平平衡色譜柱反相色譜柱在經(jīng)過出廠測試后是保存在乙腈水中的。請一定確保您所使用的流動相和乙腈水互溶。由于色譜柱在儲存或運輸過程中可能會干掉，因此在用流動相分析樣品之前，應(yīng)使用10－20倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱；如果您所使用的流動相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水“過渡“。硅膠柱或極性色譜柱在經(jīng)過出廠測試后是保存在正庚烷中的。如果該色譜柱需要使用含水的流動相，請在使用流動相之前用乙醇或異丙醇平衡如何平衡色譜柱？

7、如何平衡色譜柱？平衡過程中，將流速緩慢地提高用流動相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線（緩沖鹽或離子對試劑度如果較低，則需要較長的時間來平衡）色譜柱的再生進行色譜柱再生時，應(yīng)使用一個謙價的泵，我們建議最好不使用您的高效液相色譜儀上的泵。表1建議用來沖洗的溶劑體積色譜柱尺寸柱體積所用溶劑的體積12541.6ml30ml25043.2ml60ml2501020ml400ml請根據(jù)下表選擇您的再生方法：極性固定相（如Si，NH2，DIOL基色譜填料

8、）的再生：正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水非極性固定相（如反相色譜填料RP－18，RP－8，CN等）的再生：水→乙腈→氯仿（或異丙醇）→乙腈→水0.05M稀硫酸可以用來清洗已污染的色譜柱注意：在對NH2改性的色譜柱進行再生時，由于NH2可能成銨根離子的形式存在，因此應(yīng)該在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液完全流出。如果簡單的有機溶劑水的處理不能夠完全洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì)，用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。色譜柱的維