氣液相色譜儀

1、氣液相色譜儀液相色譜儀系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內(nèi)由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的配系數(shù)在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)經(jīng)過反復(fù)多次的吸附解吸的分配過程各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出通過檢測(cè)器時(shí)樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來高效液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、

2、高效液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，下面將分別敘述其各自的組成與特點(diǎn)。1進(jìn)樣系統(tǒng)一般采用隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣間完成進(jìn)樣操作，進(jìn)樣量是恒定的。這對(duì)提高分析樣品的重復(fù)性是有益的。2輸液系統(tǒng)該系統(tǒng)包括高壓泵、流動(dòng)相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強(qiáng)為l47～44X107Pa，流速可調(diào)且穩(wěn)定，當(dāng)高壓流動(dòng)相通過層析柱時(shí)，可降低樣品在柱中的擴(kuò)散效應(yīng)，可加快其在柱中的移動(dòng)速

3、度，這對(duì)提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動(dòng)相貯存錯(cuò)和梯度儀，可使流動(dòng)相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變，包括改變洗脫液的極性、離子強(qiáng)度、PH值，或改用競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物（即使僅有一個(gè)基團(tuán)的差別或是同分異構(gòu)體）都能獲得有效分離。3.分離系統(tǒng)該系統(tǒng)包括色譜柱、連接管和恒溫器等。色譜柱一般長度為10～50cm（需要兩根連用時(shí)，可在二者之間加一連接管），內(nèi)徑為內(nèi)徑為2～5mm，由“優(yōu)質(zhì)不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦

4、合金等材料制成，住內(nèi)裝有直徑為5～10μm粒度的固定相（由基質(zhì)和固定液構(gòu)成）固定相中的基質(zhì)是由機(jī)械強(qiáng)度高的樹脂或硅膠構(gòu)成，它們都有惰性（如硅膠表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔徑可達(dá)1000）和比表面積大的特點(diǎn)，加之其表面經(jīng)過機(jī)械涂漬加之其表面經(jīng)過機(jī)械涂漬（與氣相色譜中固定相的制備一樣），或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因化學(xué)法偶聯(lián)各種基因（如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等）或配體的有機(jī)化合物。因此，這類固定相對(duì)結(jié)構(gòu)

5、不同的物質(zhì)有良好的選擇性。例如，在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素（PSA）后，就可以把成纖維細(xì)胞中的一種糖蛋白分離出來。另外，固定相基質(zhì)粒小，柱床極易達(dá)到均勻、致密狀態(tài)，極易降低渦流擴(kuò)散效應(yīng)?；|(zhì)粒度小，微孔淺，樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短。這些對(duì)縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。根據(jù)柱效理論分析，基質(zhì)粒度小，塔板理論數(shù)N就越大。這也進(jìn)一步證明基質(zhì)粒度小，會(huì)提高分辨率的道理。再者，高效液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調(diào)到60C，通過改善傳質(zhì)速度，縮

6、短分析時(shí)間，就可增加層析柱的效率。氣相色譜儀的基本構(gòu)造有兩部分，即分析單元和顯示單元?dú)庀嗌V儀的基本構(gòu)造有兩部分，即分析單元和顯示單元。前者主要包括起源及控制計(jì)量裝置﹑進(jìn)樣裝置﹑恒溫器和色譜柱。后者主要包括檢定器和自動(dòng)記錄儀。色譜柱（包括固定相）和檢定器是氣相色譜儀的核心部件色譜儀利用色譜柱先將混合物分離，然后利用檢測(cè)器依次檢測(cè)已分離出來的組分。色譜柱的直徑為數(shù)毫米，其中填充有固體吸附劑或液體溶劑，所填充的吸附劑或溶劑稱為固定相。與固定

7、相相對(duì)應(yīng)的還有一個(gè)流動(dòng)相。流動(dòng)相是一種與樣品和固定相都不發(fā)生反應(yīng)的氣體，入試樣與通入試樣后平衡性的差異（以電位差的形式來表現(xiàn)）記錄下來，得到色譜峰，反映待測(cè)物濃度。2、特點(diǎn)、特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，性能穩(wěn)定，靈敏度適宜，對(duì)大多數(shù)物質(zhì)都有響應(yīng)，尤其適應(yīng)常規(guī)分析、氣體分析。池體為不銹鋼塊，熱敏元件一般為錸鎢絲組成，溫度系數(shù)為正。由于熱導(dǎo)檢測(cè)器屬于濃度型檢測(cè)器，所以檢測(cè)器的靈敏度與池體的幾何結(jié)構(gòu)、池體溫度、穩(wěn)定性、熱絲的穩(wěn)定性能、所用載氣的熱傳導(dǎo)率，

8、以及氣體流量的穩(wěn)定性、純度、流速等因素有關(guān)。檢測(cè)器響應(yīng)與橋流使用密切相關(guān)，橋流大，靈敏度高，但是噪聲隨之增大，壽命也會(huì)縮短。TCD檢測(cè)條件的選擇：1）.載氣種類載氣種類TCD檢測(cè)器通常使用氫氣或者氦氣作為載氣檢測(cè)器通常使用氫氣或者氦氣作為載氣，因?yàn)樗鼈兊臒釋?dǎo)系數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于其它化合物，故靈敏度高，且易于定量，線性范圍寬。從理論上從理論上講用氦氣較合理講用氦氣較合理，但它價(jià)格昂貴，因此在我國一般都選用氫氣作載氣但它價(jià)格昂貴，因此在我國一般都選

9、用氫氣作載氣，質(zhì)檢中心目前除美除美國熱電的兩臺(tái)國熱電的兩臺(tái)GC2000氣相色譜儀氣相色譜儀TCD檢測(cè)器用的氬氣作載氣外檢測(cè)器用的氬氣作載氣外，其余色譜所有TCD檢測(cè)器均是采用氫氣作載氣。用氫氣作載氣要防止泄漏和爆炸，有條件話應(yīng)該將尾氣排到室外。（2）.載氣純度載氣純度影響靈敏度，實(shí)驗(yàn)證明：在電橋電流120mA～200mA范圍內(nèi)，用99.999％的超純氫氣比用99％的普氫靈敏度高6％～13％，同時(shí)，基線漂移和噪聲也可以大大降低。載氣純度對(duì)

10、峰形也有影響，用TCD作高純氣中雜質(zhì)檢測(cè)時(shí)，載氣純度應(yīng)比被測(cè)氣體高十倍以上，否則易出倒峰。（3）.載氣流速TCD為濃度型檢測(cè)器，對(duì)流速波動(dòng)很敏感，TCD的峰面積響應(yīng)值反比于載氣流速。因此，在檢測(cè)過程中，載氣流速必須保持恒定。在柱分離許可的情況下，以低一些為妥。流速波動(dòng)可能導(dǎo)致基線噪聲和漂移增大。在加橋流之前，首先應(yīng)該測(cè)定流量，讓柱流量和參比流量相等。對(duì)于福立的色譜，用的H2作載氣，大致流量可參照色譜儀上貼的“穩(wěn)流閥調(diào)節(jié)圈數(shù)與載氣流量對(duì)照

11、表”調(diào)節(jié)，然后用皂膜流量計(jì)測(cè)定具體的參比流量和柱流量；對(duì)2#SP3240，可以在色譜儀正面面板上改變柱壓力，然后用皂膜流量計(jì)在檢測(cè)器兩出口測(cè)定具體需要的參比流量和柱流量；對(duì)GC2000，先在儀器程序中選擇所用的載氣種類，然后設(shè)定柱前壓，檢測(cè)器兩出口一個(gè)是參比氣（Refflow）出口，一個(gè)是載氣尾吹氣（Mkup）的出口，可根據(jù)具體測(cè)定需要改變載氣壓力、參比氣及尾吹氣的流量最終使兩出口氣體流量相等。（4）.電橋電流電橋電流可以顯著提高TCD

12、的靈敏度。一般認(rèn)為S值與電流的3次方成正比。但是電流的提高又受到噪聲和使用壽命的限制。橋流設(shè)定與TCD檢測(cè)池的溫度及使用的載氣種類密切相關(guān)TCD的使用注意事項(xiàng)不能在沒有載氣通過的情況下打開儀器，會(huì)影響柱子的使用壽命，更不能升溫加上電流，否則檢測(cè)器的核心部件錸鎢絲會(huì)在短時(shí)間內(nèi)燒毀。載氣一定要在開機(jī)之前開，在儀器溫度穩(wěn)定后開始做樣前再給橋流，降溫關(guān)機(jī)之前要先關(guān)橋流（福立的色譜將橋流設(shè)為0，北分的SP3420和熱電的GC2000將橋流設(shè)為OF

13、F）。然后將柱溫設(shè)為室溫，待溫度降下來后關(guān)機(jī)再關(guān)載氣。在每次開機(jī)前都檢查一下熱導(dǎo)排出口有沒有氣出來（福立及北分的色譜儀電源關(guān)掉后仍有壓力，熱電的GC2000關(guān)機(jī)后氣源自動(dòng)切斷），沒有的情況下千萬不要開機(jī)和加電流，要仔細(xì)檢查看氣源供氣是否正常，氣路系統(tǒng)有無漏氣，閥門是否打開，壓力顯示是否正常，不能解決的問題立即上報(bào)，一切正常后才能開機(jī)。進(jìn)樣時(shí)要時(shí)刻注意硅膠墊的松緊度，很松了馬上把橋電流關(guān)掉換上新的硅膠墊。進(jìn)樣時(shí)感覺特別容易，用TCD檢測(cè)器