平面色譜法(山西醫(yī)科大學)

1、1第十九章平面色譜法平面色譜法（planechromatography）是組分在以平面為載體的固定相和流動相之間吸附或分配平衡而進行的一種色譜方法。該法具有操作簡單，不需要昂貴的儀器設備，分析速度快，結果直觀，并有較高的分離能力。平面色譜法主要包括薄層色譜法（thinlayerchromatography；TLC）和紙色譜法（paperchromatograph）。紙色譜法出現(xiàn)于20世紀的40年代，主要用于微量分析，特別在生化和醫(yī)藥分析

2、中的應用十分廣泛。但色譜紙的機械強度較差，傳質阻力大，使該法的應用和推廣受到了限制。20世紀60年代，薄層色譜法的發(fā)展和普及，使得紙色譜法的應用逐漸減少。20世紀80年代出現(xiàn)了儀器化薄層色譜法（instrumentalthinlayerchromatography），薄層色譜的每一步驟均由儀器來代替以往的手工操作，再配以薄層掃描儀，這樣就使在較長時期內被認為只能用來定性和半定量的薄層色譜法定量結果的重現(xiàn)性和準確度大大提高，成為一種有價值

3、的分離分析方法。第一節(jié)平面色譜法的分類和原理一、平面色譜法的分類平面色譜法按操作方式可分為：1薄層色譜法薄層色譜法是把固定相均勻地涂布在玻璃板、塑料板或鋁箔上形成厚薄均勻的薄層，在此薄層上進行混合組分分離的色譜法。按照薄層色譜法的分離機制不同，薄層色譜法又可分為吸附薄層色譜法、分配薄層色譜法和分子排阻薄層色譜法。2紙色譜法紙色譜法的固定相一般為紙纖維上吸附的水分，流動相為與水互不相溶的有機溶劑，根據(jù)被分離混合組分在水和有機溶劑中的溶解能

4、力不同，在色譜紙上產(chǎn)生差速遷移而得到分離的方法。紙色譜分離原理屬于分配色譜的范疇。3薄層電泳法薄層電泳法是帶電荷的被分離物質（蛋白質、核苷酸、多3下，被測組分的比移值與參考物質比移值之比。（192）(s)(i)(s)f(i)frLLRRR??式中Rf(i)和Rf(s)分別為組分i和參考物質s在相同條件下的比移值。L(i)和L(s)分別為組分i和參考物質s在平面色譜上的移動距離。相對比移值在一定程度上消除了測定中的系統(tǒng)誤差，因此與比移值相

5、比具有較高的重現(xiàn)性和可比性。測定Rr時，可以選擇純物質加到試樣中作為參考物質，也可以是試樣中的某一已知組分。Rr可以大于1，也可以小于1。Rr與被測組分、參考物質、色譜條件等因素有關。（二）相平衡參數(shù)1分配系數(shù)（distributioncoefficient；K）和保留因子（retentionfact；k）平面色譜法中的相平衡參數(shù)也可用分配系數(shù)和保留因子來描述（見第十六章色譜法概論）。2K、k與Rf值之間的關系設R為單位時間內一個分子在

6、流動相中出現(xiàn)的幾率（即在流動相中停留的時間分數(shù)），若R=13，則表示這個分子有13的時間在流動相中，23的時間在固定相中。對于具有統(tǒng)計意義的大量待測組分分子而言，則表示13的分子在流動相中，23的分子在固定相中。組分在固定相與流動相中的量可分別用csVs和cmVm表示，cs為組分在固定相中的濃度，cm為組分在流動相中的濃度，Vs為色譜平面中固定相所占的體積，Vm為平面中流動相所占的體積。因此，msmmss1VVKVcVcRR???整理上