彈性纖維染色方法

1、改良改良Masson三色染色法在膠原纖維三色染色法在膠原纖維中的應(yīng)用中的應(yīng)用中華首席醫(yī)學(xué)網(wǎng)2006年05月24日11:05:41Wednesday648作者：王玨朱禮國，唐幕湘張健《鄖陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報》2006年2月25卷1期實(shí)驗(yàn)技術(shù)加入收藏夾【關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞】膠原纖維[關(guān)鍵詞]改良；Masson三色染色法；膠原纖維目前，Masson三色染色法仍是膠原纖維染色的主要方法之一。它在臨床外檢和科研教學(xué)等方面有著重要的意義。在實(shí)際工作中，我們認(rèn)為傳

2、統(tǒng)的Masson三色染色法[1]操作程序多，染色效果欠佳，且不太穩(wěn)定，對其做了改進(jìn)，現(xiàn)將做法介紹如下。1方法方法1.1染液的配制Harris蘇木素、1%鹽酸酒精、麗春紅酸性品紅、1%磷鉬酸、2%苯胺藍(lán).1.2染色方法石蠟切片3~4μm脫蠟至水Harris蘇木素染3min流水沖洗1%的鹽酸酒精分化3~5s流水沖洗溫水返藍(lán)1min流水沖洗麗春紅酸性品紅加溫染3min，蒸餾水沖洗1%磷鉬酸分化1min，不洗，擦凈載玻片上的磷鉬酸殘液，2%苯胺

3、藍(lán)復(fù)染1min，95%的酒精沖洗，95%酒精及無水酒精脫水，冷風(fēng)吹干，中性樹膠封片。網(wǎng)狀纖維網(wǎng)狀纖維是一種纖細(xì)的纖維。它沿著網(wǎng)狀細(xì)胞和突起分支，并互相交織成網(wǎng)，因而被稱為網(wǎng)狀纖維，又因這種纖維對銀的浸染著色特別顯著。故又稱為嗜銀纖維。它主要由III型膠原蛋白構(gòu)成，也具有642nm周期性橫紋[1]。它主要分布于骨髓、脾、淋巴結(jié)、肝和肺等臟器。癌組織中間未見有網(wǎng)狀纖維，但在其邊緣可見有大量的網(wǎng)狀纖維，但在其邊緣可見有大量的網(wǎng)狀纖維圍繞，俗稱

4、癌巢。一、網(wǎng)狀纖維的形成一、網(wǎng)狀纖維的形成它的形成主要是在纖維母細(xì)胞的粗面內(nèi)漿網(wǎng)中，合成可溶性膠原。在醛糖、類脂的作用下，形成可溶性膠原，隨后它被分泌到細(xì)胞外，在基質(zhì)中（或在細(xì)胞的表面）通過原膠原蛋白分子間的交聯(lián)，聚合成為不溶性的膠原原纖維即網(wǎng)狀纖維。二、網(wǎng)狀纖維在組織化學(xué)上的反應(yīng)二、網(wǎng)狀纖維在組織化學(xué)上的反應(yīng)網(wǎng)狀纖維的主要成分是網(wǎng)硬蛋白，在組織化學(xué)上，網(wǎng)狀纖維和膠原纖維是容易區(qū)別的。網(wǎng)狀纖維是分支纖細(xì)的纖維。VanGieson氏染色不

5、顯色或微紅色。PAS反應(yīng)呈現(xiàn)紅紫色，銀浸染為黑色。膠原纖維用VanGieson氏染色為紅色，PAS反應(yīng)呈微粉紅色。銀浸染為黃色或棕黃色。三、網(wǎng)狀纖維的顯示三、網(wǎng)狀纖維的顯示1染色染料技術(shù)：從網(wǎng)狀纖維的顯示，區(qū)別和效果等方面，這種技術(shù)被認(rèn)為是不可靠的，其原因是它只能跟膠原纖維區(qū)別開來。2金屬浸染技術(shù)：這種技術(shù)對于顯示網(wǎng)狀纖維被認(rèn)為是十分可靠和廣泛使用的方法，它不但能夠區(qū)別網(wǎng)狀纖維和膠原纖維，而且可顯示纖細(xì)的網(wǎng)狀纖維。嗜銀反應(yīng)（Argyro

6、philreaction）嗜銀細(xì)胞與親銀細(xì)胞所不同的是需要一種附加的還原劑來還原，它們比親銀細(xì)胞數(shù)量多。必須注意：親銀反應(yīng)中將找不到任何的嗜銀細(xì)胞。親銀反應(yīng)（Argentaffinreation）親銀細(xì)胞有能力，直接地，不靠外加試劑，將銀液中的銀還原為一種不溶性的黑色金屬銀沉淀的細(xì)胞稱為親銀細(xì)胞。（Cellsthathavetheabilitytodirectlyreducesilversolutionproducinganinsolu

7、bleblackmetallicsilverprecipitatearetermedangentaffincells）。四、網(wǎng)狀纖維的顯示方法四、網(wǎng)狀纖維的顯示方法有Gomis法、Godonsweets法、Wilders法、Foots法（一）（一）Gomis法1、試劑的配制：、試劑的配制：取10%硝酸銀3份，加入10%的氫氧化鉀1份，混合后產(chǎn)生大量的黑色沉淀物，倒去表面的液體，保留下沉淀物，加入1020倍或更多的蒸餾水進(jìn)行沖洗，連續(xù)沖洗

8、3次。待沉淀物清晰則可。用濃氨水逐滴加到溶液中。使沉淀物逐步溶解。待見沉淀物剩少數(shù)幾顆時，再取10%的硝酸銀液加入數(shù)滴，至溶液再現(xiàn)渾濁為止。再用氨水將其溶解，然后稀釋1015倍。即可使用。平時保存于4℃冰箱中。2、操作步驟：、操作步驟：(1)、切片脫蠟至水，蒸餾水洗，(2)、用0.5%高錳酸鉀氧化5min，(3)、自來水洗，繼用蒸餾水洗，(4)、用2%草酸漂白切片2min，(5)、自來水洗，蒸餾水洗，(6)、2%硫酸鐵銨媒染5min，(