種子萌發(fā)試驗(yàn)操作規(guī)程

1、1種子萌發(fā)試驗(yàn)操作規(guī)程種子萌發(fā)試驗(yàn)操作規(guī)程種子和幼苗是植物一生最脆弱而又最關(guān)鍵的階段它們經(jīng)歷著較高的死亡風(fēng)險(xiǎn)(Hammond&Brown1995)面臨著不可預(yù)測(cè)、多變的環(huán)境。在這樣的選擇壓力下，不同植物有著不同的生活史對(duì)策，最大目的是在有利的條件下增加幼體數(shù)量，同時(shí)減少不利條件下個(gè)體死亡風(fēng)險(xiǎn)。種子的萌發(fā)能力影響著幼苗存活、個(gè)體適合度及植物生活史的表達(dá)。因此，種子萌發(fā)時(shí)的抗性已成為植物抗逆生理的重要研究課題。1.種子基本信息種子基本信息記

2、錄試驗(yàn)種子名稱、產(chǎn)地、種子數(shù)量、采集人等基本信息，根據(jù)種子數(shù)量合理安排后續(xù)試驗(yàn)內(nèi)容。2.種子基本形狀的觀測(cè)（根據(jù)試驗(yàn)要求選取）：種子基本形狀的觀測(cè)（根據(jù)試驗(yàn)要求選?。?.1種子大小種子大小測(cè)定20粒種子的長(zhǎng)度和直徑，取平均值。2.2千粒重千粒重以1000粒3組的平均值為其平均千粒重(標(biāo)準(zhǔn)誤差)。2.3種子形態(tài)觀察種子形態(tài)觀察3.種子萌發(fā)試驗(yàn)程序：種子萌發(fā)試驗(yàn)程序：3.1萌發(fā)預(yù)試驗(yàn)萌發(fā)預(yù)試驗(yàn)選取少量種子進(jìn)行萌發(fā)試驗(yàn)，檢測(cè)種子是否存在休眠

3、。3.2打破種子休眠試驗(yàn)打破種子休眠試驗(yàn)根據(jù)種子基本形狀及采集生境確定可能的休眠原因，設(shè)計(jì)打破休眠的方法，并檢測(cè)效果。3.2.1生理休眠及其打破方法生理休眠及其打破方法這類種子具有通透性種皮和充分發(fā)育的胚，但缺乏足夠的生長(zhǎng)勢(shì)去克服胚包圍物的機(jī)械阻力。有三個(gè)水平：非深休眠、中等休眠、深休眠。一些非深休眠的種子可采用熱和冷層積處理可以破除休眠。這種休眠種子較多，比例大。具有生理休眠的鹽生植物主要分布在以下科中：番杏科、莧科、蕓薹屬、石竹科、

4、藜科、莎草科、大戟科、禾本科和玄參科。這些植物多半生長(zhǎng)在鹽沼、鹽荒漠、峭壁和沙丘地區(qū)。3.2.2形態(tài)休眠及其打破方法形態(tài)休眠及其打破方法3如果種子量足夠，可設(shè)置5、10、15、20、25、30℃等恒定溫度下，分別在持續(xù)光照，持續(xù)黑暗或日夜變換光照下(光照10h，黑暗14h)萌發(fā)。4.2.2在日在日夜變換溫度下萌發(fā)夜變換溫度下萌發(fā)在光照條件不變情況下，萌發(fā)溫度隨日夜而變換(10h14h):25℃5℃25℃10℃25℃15℃25℃20℃30

5、℃5℃30℃10℃30℃15℃30℃20℃30℃25℃。4.2.3種子在持續(xù)光照、暗中的萌發(fā)種子在持續(xù)光照、暗中的萌發(fā)將種子在適宜的溫度(如25℃)下，分別放在持續(xù)光照下(100μEM2S1)或暗中進(jìn)行萌發(fā)試驗(yàn)。5.種子耐鹽性試驗(yàn)（可根據(jù)種子數(shù)量調(diào)整因素梯度）：種子耐鹽性試驗(yàn)（可根據(jù)種子數(shù)量調(diào)整因素梯度）：設(shè)置不同梯度鹽濃度，如NaCl溶液濃度0、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500mmolL。分

6、別挑取50粒籽粒飽滿的種子，均勻擺放在鋪有兩層濾紙的9cm培養(yǎng)皿中，每皿加NaCl溶液5ml，每?jī)商旄鼡Q一次鹽溶液。NaCl溶液濃度為：0、50、100、200、400、800mM，以胚根露出種皮作為萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)，每天固定時(shí)間記錄萌發(fā)數(shù)。20天后，將未萌發(fā)種子轉(zhuǎn)至上述無(wú)鹽營(yíng)養(yǎng)液中，記錄10天的萌發(fā)恢復(fù)數(shù)。30天總萌發(fā)率=(a＋b)c100%，a為鹽處理20天的萌發(fā)數(shù)，b為鹽處理后未萌發(fā)種子轉(zhuǎn)至無(wú)鹽營(yíng)養(yǎng)液10天的恢復(fù)萌發(fā)數(shù)，c為每皿種子數(shù)50

7、粒。上述培養(yǎng)皿放于25℃恒溫黑暗培養(yǎng)箱中，每處理3次重復(fù)。6.種子耐旱性試驗(yàn)（可根據(jù)種子數(shù)量調(diào)整因素梯度）：種子耐旱性試驗(yàn)（可根據(jù)種子數(shù)量調(diào)整因素梯度）：利用等滲的聚乙二醇（PEG）模擬設(shè)置不同干旱梯度，如PEG6000濃度分別為:0、1.0%、2.5%、5.0%、7.5%、10%、20%、30%、40%【對(duì)應(yīng)的滲透壓根據(jù)Michel和Kaufmann文獻(xiàn)中PEG溶液濃度與滲透勢(shì)的關(guān)系方程，計(jì)算公式如下:ψs=(1.18102)C(1.

8、18104)C2(2.67104)CT(8.39107)C2T。式中，ψs是溶液的滲透勢(shì)(bar)，1bar=0.1Mpa；C是PEG6000溶液的濃度(gkgH2O)；T是溶液的溫度(℃)。】將所選種子用0.1%HgCl2消毒，再用無(wú)菌水沖洗后，置于鋪有浸透各濃度PEG溶液濾紙的培養(yǎng)皿中，每皿50粒，3次重復(fù)，置于室溫下培養(yǎng)，每天定時(shí)觀察并記錄發(fā)芽種子數(shù)。7.種子耐冷性試驗(yàn)（可根據(jù)種子數(shù)量調(diào)整因素梯度）：種子耐冷性試驗(yàn)（可根據(jù)種子數(shù)量