小麥葉片生理指標(biāo)測定

1、小麥葉片生理指標(biāo)測定小麥葉片生理指標(biāo)測定1、種子處理：1、0.1%氯化汞浸泡小麥種子30分鐘，進行消毒，小麥種子放在較大的培養(yǎng)皿中2、將氯化汞倒入廢液瓶，注意必須戴兩層手套，因為氯化汞劇毒，且用完的手套不能碰實驗室里其它的任何東西，以防污染，最好把用完的手套放到DNA顯色室中的廢手套收集桶里；3、然后用無菌蒸餾水沖洗3遍以上4、最后用倒入適量無菌水（稍微讓水浸沒種子表面）進行種子萌發(fā)，每天換次新水。2、小麥培養(yǎng)1、在種子發(fā)芽以后，在芽長

2、1cm左右的時候，將種子放入用網(wǎng)縫好的塑料泡沫上，然后放入裝有自來水的培養(yǎng)盒中2、大概三天左右的時間，將水倒掉，換上12hoagl營養(yǎng)液（配方見下面的附件），每三天換一次營養(yǎng)液。3、小麥處理及指標(biāo)測定1、小麥培養(yǎng)兩周后，在兩葉一心期，用適當(dāng)PEG6000濃度的12hoagl營養(yǎng)液換掉原營養(yǎng)液，各設(shè)一個對照（即沒加PEG6000的12hoagl營養(yǎng)液）2、每隔24h取一次樣，在72h后復(fù)水（即將PEG6000溶液倒掉，換成新配的12hoa

3、gl營養(yǎng)液）4、生理指標(biāo)測定稱取受干旱、高溫、低溫等逆境脅迫的植物葉片1g，加入少量石英砂和10％三氯乙酸2ml，研磨至勻漿，再加8ml10％三氯乙酸進一步研磨，勻漿以4000rmin離心10min，其上清液為丙二醛提取液。2.2.顯色反應(yīng)及測定顯色反應(yīng)及測定取4支干凈試管，編號，3支為樣品管（三個重復(fù)），各加入提取液2ml，對照管加蒸餾水2ml，然后各管再加入2ml0.6％硫代巴比妥酸溶液。搖勻，混合液在沸水浴中反應(yīng)15min，迅速冷

4、卻后再離心。取上清液分別在532、600和450nm波長下測定吸光度（A）值。五、丙二醛含量計算：五、丙二醛含量計算：由于蔗糖－TBA反應(yīng)產(chǎn)物的最大吸收波長為450nm，毫摩爾吸收系數(shù)為85.410－3，MDA－TBA反應(yīng)產(chǎn)物在532nm的毫摩爾吸收系數(shù)分別是7.410－3和15510－3。532nm非特異性吸光值可以600nm波長處的吸光值代表。按雙組分分光光度法原理，建立方程組，解此方程組即可求出MDA及可溶性糖濃度。方程組：A45

5、0=（85.410－3）C糖（A532－A600）=（15510－3）CMDA（7.410－3）C糖解得：A450C糖=——————=11.71A450（mmolL－1）85.410－3CMDA=6.45（A532－A600）－0.56A450（μmolL－1）公式中：A450—在450nm波長下測得的吸光度值A(chǔ)532—在532nm波長下測得的吸光度值A(chǔ)600—在600nm波長下測得的吸光度值﹡—1.55105為摩爾比吸收系數(shù)C糖、CM

6、DA分別是反應(yīng)混合液中可溶性糖、MDA的濃度。1.1.按下式計算提取液中按下式計算提取液中MDAMDA濃度濃度反應(yīng)液體積（ml）CMDA—————————1000提取液中MDA濃度（μmolml－1）=———————————————測定時提取液用量（ml）2.2.按下式計算樣品中按下式計算樣品中MDAMDA含量含量提取液中MDA濃度（μmolml－1）提取液總量（ml）MDA含量（μmolg－1Fw）=—————————————————