mtt實(shí)驗(yàn)操作步驟

1、MTT的操作方法的操作方法一、一、MTT是什么是什么MTT是一種粉末狀化學(xué)試劑，全稱為3(45)dimethylthiahiazo(zy1)35diphenytetrazoliumroe，漢語(yǔ)化學(xué)名為3(4，5二甲基噻唑2)2，5二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍(lán)。是一種黃顏色的染料。二、二、MTT法用來(lái)做什么法用來(lái)做什么簡(jiǎn)單地說(shuō)：是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。MTT主要有兩個(gè)用途1藥物（也包括其他處理方式如放射線照射）對(duì)體外培養(yǎng)的細(xì)胞

2、毒性的測(cè)定；2細(xì)胞增殖及細(xì)胞活性測(cè)定。三、為何三、為何MTT可以用來(lái)做上述工作可以用來(lái)做上述工作檢測(cè)原理為活細(xì)胞活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚（Fmazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶標(biāo)儀在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。根據(jù)測(cè)得的吸光度值（OD值），來(lái)判斷活細(xì)胞數(shù)量，OD值越

3、大，細(xì)胞活性越強(qiáng)（如果是測(cè)藥物毒性，則表示藥物毒性越小）。四、實(shí)驗(yàn)所需材料四、實(shí)驗(yàn)所需材料1MTT溶液的配制溶液的配制通常MTT配成的終濃度為5mgml須用PBS或生理鹽水做溶劑。市面上一般MTT的包裝為100mg250mg或1g1.1對(duì)于100mg這樣的小包裝，廠家都是將MTT放入小管中的，個(gè)人建議不要再用天平稱量分裝，而應(yīng)該一次性將其全配制成溶液，如100mg用20mlPBS來(lái)溶解。具休做法，24（10）：455457），該溶解液不

4、需去除原培養(yǎng)基，但溶解較慢。（個(gè)人覺(jué)得其溶解的能力不如DMSO強(qiáng)）該溶解液因含有SDS，在低溫保存的時(shí)候易產(chǎn)生結(jié)晶，因此在用之前必須提前幾小時(shí)拿至室溫，將SDS結(jié)晶全部溶解后再使用。五、MTT法實(shí)驗(yàn)步驟法實(shí)驗(yàn)步驟1:胰酶消化對(duì)數(shù)期細(xì)胞，終止后離心收集，制成細(xì)胞懸液，細(xì)胞計(jì)數(shù)調(diào)整其濃度至510104ml。細(xì)胞詳細(xì)計(jì)數(shù)方法請(qǐng)參照易生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)中的相關(guān)文章。對(duì)于初學(xué)者而言，要使細(xì)胞達(dá)到510104ml往往不知從何處著手，我在這里向大家提供一個(gè)