豬免疫球蛋白gigg酶聯(lián)免疫分析elisa

1、1豬免疫球蛋白豬免疫球蛋白G(IgG)G(IgG)酶聯(lián)免疫分析酶聯(lián)免疫分析(ELISA)(ELISA)試劑盒使用說明書試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測(cè)豬血清，血漿及相關(guān)液體樣本中免疫球蛋白G(IgG)的含量。實(shí)驗(yàn)原理：實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中豬免疫球蛋白G(IgG)水平。用純化的豬免疫球蛋白G(IgG)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入免疫球蛋白G(IgG)，再與HRP標(biāo)記

2、的免疫球蛋白G(IgG)抗體結(jié)合，形成抗體抗原酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的免疫球蛋白G(IgG)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中豬免疫球蛋白G(IgG)濃度。試劑盒組成試劑盒組成：試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個(gè)1個(gè)酶標(biāo)包被板1

3、4819628℃保存標(biāo)準(zhǔn)品：2700ngL0.5ml1瓶0.5ml1瓶28℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml1瓶1.5ml1瓶28℃保存酶標(biāo)試劑3ml1瓶6ml1瓶28℃保存樣品稀釋液3ml1瓶6ml1瓶28℃保存顯色劑A液3ml1瓶6ml1瓶28℃保存顯色劑B液3ml1瓶6ml1瓶28℃保存終止液3ml1瓶6ml1瓶28℃保存濃縮洗滌液(20ml20倍)1瓶(20ml30倍)1瓶28℃保存3混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十

4、孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1800ngL，1200ngL，600ngL，300ngL，150ngL)。2.加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃

5、動(dòng)混勻。3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。7.溫育：操作同3。8.洗滌：操作同5。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.終止：

6、每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。計(jì)算：計(jì)算：以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。試劑盒性能：