抗鉛聯(lián)合苯酚降解多功能菌的構(gòu)建.pdf

1、本文對高效降酚菌和抗鉛菌做質(zhì)粒消除實(shí)驗，并提取相關(guān)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5α中，初步定位相關(guān)功能基因的位置。
　　 通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)移方法構(gòu)建抗重金屬鉛聯(lián)合苯酚降解的環(huán)境多功能菌。測試轉(zhuǎn)化子在含鉛環(huán)境下的降酚效果，同時提取抗鉛降酚轉(zhuǎn)化子中的質(zhì)粒電泳進(jìn)行分子驗證。
　　 研究了不同環(huán)境條件對轉(zhuǎn)化子的生長狀況的影響，及不同環(huán)境條件下轉(zhuǎn)化子對苯酚的降解效果及質(zhì)粒遺傳穩(wěn)定性。
　　 取得研究結(jié)果如下：
　　 1．通過質(zhì)

2、粒消除實(shí)驗，高效降酚菌株降酚能力顯著降低，抗鉛菌株仍然保持原有抗鉛性狀。提取高效降酚菌株中質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5α中，轉(zhuǎn)化后大腸桿菌DH5α獲得了降酚性能。
　　 2．提取高效降酚菌質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化到抗鉛菌感受態(tài)細(xì)胞，篩選出有效的轉(zhuǎn)化菌株，測試抗鉛降酚轉(zhuǎn)化子在含高濃度鉛時的降酚能力，轉(zhuǎn)化子在100mg/L鉛濃度下，對500mg/L苯酚降解率在第89h達(dá)到97.4％，確認(rèn)用質(zhì)粒轉(zhuǎn)移方法能夠成功構(gòu)建既能抗重金屬鉛又能有效降解苯酚的多功能

3、菌。
　　 3．通過接入一定量的抗鉛降酚轉(zhuǎn)化子富集液到以苯酚為唯一碳源的無機(jī)鹽培養(yǎng)基中，隔一定時間測其苯酚降解率，觀察不同條件下抗鉛降酚轉(zhuǎn)化子的降解活性。在鉛濃度50～300mg/L，轉(zhuǎn)化子都能快速有效降解底物中的苯酚。不同苯酚初始濃度下，苯酚被轉(zhuǎn)化子完全降解所需時間差異較大，隨著酚濃度增大，其所需時間越長，完全降解所需時間差異主要表現(xiàn)在延滯期所需時間不同。溫度對轉(zhuǎn)化子降解苯酚影響表現(xiàn)為，在20～25℃，隨著溫度升高，完全降解所

4、需降解時間越短，25～30℃隨著溫度升高降解時間越長，當(dāng)溫度升至35℃時，轉(zhuǎn)化子無法有效降解培養(yǎng)液中的苯酚。在pH值5～7時，轉(zhuǎn)化子完全降解苯酚所需時間相差不大，但是當(dāng)pH值升高后，苯酚降解受抑制。向培養(yǎng)基添加葡萄糖時，發(fā)現(xiàn)低濃度的葡萄糖能促進(jìn)轉(zhuǎn)化子對苯酚的降解，高濃度抑制其對苯酚降解。
　　 4．通過測試抗鉛降酚轉(zhuǎn)化子在OD600的吸光度值觀察抗鉛降酚菌在不同環(huán)境中的生長量，轉(zhuǎn)化子在pH值5～9，溫度25～40℃范圍內(nèi)生長良好

5、；對苯酚耐受能力較強(qiáng)，能在500mg/L苯酚濃度仍然保持較高的生長量；當(dāng)轉(zhuǎn)速達(dá)到100r/min后生長旺盛。5．在不同環(huán)境條件下富集培養(yǎng)后的抗鉛降酚轉(zhuǎn)化子分別稀釋涂布到含酚選擇板和無酚非選擇板上培養(yǎng)后，計算選擇板與非選擇板上菌落數(shù)的比值，來衡量環(huán)境條件對抗鉛降酚轉(zhuǎn)化子質(zhì)粒遺傳表達(dá)穩(wěn)定性的影響。溫度對其穩(wěn)定性影響較大，達(dá)到40℃高溫轉(zhuǎn)化子質(zhì)粒容易丟失。酚脅迫下，在苯酚濃度從50～500mg/L范圍內(nèi)，隨著苯酚濃度升高，轉(zhuǎn)化子穩(wěn)定性逐漸提高