亞甲基藍(lán)分光光度法測定陰離子表面活性劑(實(shí)訓(xùn)).

1、亞甲基藍(lán)分光光度法測定陰離子表面活性劑,姚進(jìn)一 副教授,水環(huán)境監(jiān)測,1.1 儀器（1）分光光度計(jì)，1cm比色皿；（2）250mL分液漏斗，最好聚四氟乙烯（PTFE）活塞 ；（3）索氏抽提器：150mL平底燒瓶，Φ35×160mm抽出筒，蛇形冷凝管。1.2 試劑（1） 氫氧化鈉（NaOH）：4%，即1mol/L（2） 硫酸（H2SO4）：3%，即0.5mol/L,1.儀器、試劑,亞甲基藍(lán)分光光度法測定陰離子

2、表面活性劑,（3） 氯仿：即三氯甲烷（CHCl3）（4）直鏈烷基苯磺酸鈉（LAS）貯備溶液（1.00mg/mL） 稱取0.100 g 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)LAS（平均分子量344.4），準(zhǔn)確至0.001 g ，溶于50mL水中，轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中，稀釋至標(biāo)線并混勻。此溶液每毫升含1.00mg LAS，保存于4℃冰箱中。只能放置一周時(shí)間。,1.儀器、試劑,亞甲基藍(lán)分光光度法測定陰離子表面活性劑,（5）直鏈烷基苯磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（10.0mg

3、/L） 準(zhǔn)確吸取10.0mL直鏈烷基苯磺酸鈉貯備溶液，用水稀釋至1000mL，此溶液每毫升含10.0µg LAS。當(dāng)天配制。（6）亞甲藍(lán)溶液 先稱取50g的NaH2PO4·H2O置于燒杯中，加入約300mL水溶解，緩慢沿杯壁加入6.8mL濃硫酸，混勻，轉(zhuǎn)移到1000 mL容量瓶中。另稱取0.030g亞甲藍(lán)（指示劑級）置于燒杯中，用50mL水溶解后也移入此容量瓶中，用水稀釋至標(biāo)線，搖勻。此溶液貯存于棕色試劑瓶

4、中。,1.儀器、試劑,亞甲基藍(lán)分光光度法測定陰離子表面活性劑,（7）酚酞指示劑溶液（2%） 將1.0g酚酞溶于50mL乙醇[C2H5OH，95%(V/V)]中，然后邊攪拌邊加入50mL水，濾去形成的沉淀。（8）玻璃棉或脫脂棉 在索氏抽提器中用氯仿提取4h后，取出干燥，保存在清潔的玻璃瓶中待用。,1.儀器、試劑,亞甲基藍(lán)分光光度法測定陰離子表面活性劑,取樣和保存樣品應(yīng)使用玻璃瓶，并事先經(jīng)甲醇清洗過。取樣時(shí)于取樣現(xiàn)場加入硫酸酸化至

5、pH小于2，密蓋。 短期保存可在4℃冰箱中冷藏，可保存48小時(shí)；若保存期為4天，加入1%（V/V）的40%（V/V）甲醛溶液即可；若保存期長達(dá)8天，則需用氯仿飽和水樣。 本方法測定的是水樣中溶解態(tài)的陰離子表面活性劑。若水樣混濁，在測定前應(yīng)將水樣預(yù)先經(jīng)中速定性濾紙過濾以去除懸浮物，吸附在懸浮物上的表面活性劑不計(jì)在內(nèi)。,2.樣品采集與保存,亞甲基藍(lán)分光光度法測定陰離子表面活性劑,3.1 校準(zhǔn)曲線回歸方程的測定 取一組分液漏斗10

6、個(gè)，分別加入100、99、97、95、92、88、85、80mL水，然后分別移入0、1.00、3.00、5.00、8.00、12.00、15.00、20.00mL直鏈烷基苯磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，搖勻。按“樣品測定”步驟操作，以測得的吸光度扣除空白試驗(yàn)值（零濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度）后，計(jì)算回歸方程和相關(guān)系數(shù)，相關(guān)系數(shù)低于0.999時(shí)要進(jìn)行檢驗(yàn)，不合格的要重新制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。,3.樣品測定步驟,亞甲基藍(lán)分光光度法測定陰離子表面活性劑,預(yù)計(jì)選用的試樣體

7、積,3.樣品測定步驟,亞甲基藍(lán)分光光度法測定陰離子表面活性劑,3.2 樣品測定（1）將所取試份移至分液漏斗，以酚酞為指示劑，逐滴加入1mol/L氫氧化鈉溶液至水溶液呈粉紅色，再滴加0.5mol/L硫酸到粉紅色剛好消失。（2）加入25mL亞甲藍(lán)溶液，搖勻后再移入10mL氯仿，激烈振搖30s，注意放氣(過分搖動(dòng)會(huì)發(fā)生乳化，加入少量小于10mL異丙醇可消除乳化現(xiàn)象)。慢慢旋轉(zhuǎn)分液漏斗，輕輕晃動(dòng)，使滯留在內(nèi)壁上的氯仿液珠降落，靜置分層。將氯

8、仿層通過玻璃棉或脫脂棉，放入比色皿中。,3.樣品測定步驟,亞甲基藍(lán)分光光度法測定陰離子表面活性劑,分液漏斗萃取操作注意事項(xiàng)：①使用分液漏斗進(jìn)行溶液的萃取操作時(shí)，要注意分液漏斗的活塞是否配套，漏液的不能使用，要按照分析要求提前清洗干凈、并晾干，滿足下部頸管處無水。②裝入萃取液后，塞緊磨口塞子，倒置分液漏斗，一開始輕搖4-5次即從活塞處放氣，再次振搖4-5次放氣， 觀察放氣量的多少，等到氣體不是很多時(shí)，可以多次快速搖動(dòng)后再放氣。,3.樣

9、品測定步驟,亞甲基藍(lán)分光光度法測定陰離子表面活性劑,③將分液漏斗正過來靜置一段時(shí)間，使內(nèi)部的兩相溶液出現(xiàn)清晰的分層。放液前，分液漏斗下部管頸處要塞上一小段脫脂棉，不能太緊也不能太松，不能太落上也不能太落下。④放液時(shí)，只能從下方活塞處打開放液，不能從上口處放液，放液速度要慢，出現(xiàn)氣泡時(shí)，可以輕輕敲動(dòng)分液漏斗壁，讓氣泡浮出。,3.樣品測定步驟,亞甲基藍(lán)分光光度法測定陰離子表面活性劑,⑤分液漏斗用完要及時(shí)清洗，晾干。 （3）在652nm處

10、，以氯仿為參比液，測定樣品、標(biāo)準(zhǔn)系列和空白試驗(yàn)的吸光度。（4）以樣品的吸光度減去空白試驗(yàn)的吸光度后，代入回歸方程，計(jì)算LAS的含量。,3.樣品測定步驟,亞甲基藍(lán)分光光度法測定陰離子表面活性劑,按上述“樣品測定”步驟進(jìn)行空白試驗(yàn)，僅用100mL水代替試樣。在試驗(yàn)條件下，以10mm光程的比色皿測得的空白試驗(yàn)吸光度不應(yīng)超過0.02，否則應(yīng)仔細(xì)檢查設(shè)備和試劑是否有污染。,4.空白試驗(yàn),亞甲基藍(lán)分光光度法測定陰離子表面活性劑,用亞甲藍(lán)活性物質(zhì)（

11、MBAS）報(bào)告結(jié)果，以LAS計(jì)（平均分子量為344.4）。 c = m /V 式中：c ——水樣中亞甲藍(lán)活性物的濃度，mg/L m ——從校準(zhǔn)曲線方程計(jì)算出的LAS質(zhì)量，µg V ——水樣體積，mL 結(jié)果以三位小數(shù)表示。,5.結(jié)果表示,亞甲基藍(lán)分光光度法測定陰離子表面活性劑,（1）主要被測物以外的其他有機(jī)的硫酸鹽、磺酸鹽、羧酸鹽、酚類以及無機(jī)的硫氰酸鹽、氰酸鹽、硝酸鹽和氯化物等，他們或

12、多或少的與亞甲藍(lán)作用，生成可溶于氯仿的藍(lán)色絡(luò)合物，致使測定結(jié)果偏高。通過水溶液反洗可消除這些正干擾（有機(jī)硫酸鹽、磺酸鹽除外），其中氯化物和硝酸鹽的干擾大部分被去除。經(jīng)水溶液反洗仍未除去的非表面活性物引起的正干擾，可借氣提萃取法將陰離子表面活性劑從水相轉(zhuǎn)移到有機(jī)相而加以消除。,6.干擾及其消除,亞甲基藍(lán)分光光度法測定陰離子表面活性劑,（2）一般存在于未經(jīng)處理或一級處理的污水中的硫化物，它能與亞甲藍(lán)反應(yīng)，生成無色的還原物而消耗亞甲藍(lán)試劑?？?/p>

13、將試樣調(diào)制堿性，滴加適量的過氧化氫（H2O2，30%），避免其干擾。（3）存在季銨類化合物等陽離子物質(zhì)和蛋白質(zhì)時(shí)，陰離子表面活性劑將與其作用，生成穩(wěn)定的絡(luò)合物，而不與亞甲藍(lán)反映，使測定結(jié)果偏低。這些陽離子類干擾物可采用陽離子交換樹脂（在適當(dāng)條件下）去除。,6.干擾及其消除,亞甲基藍(lán)分光光度法測定陰離子表面活性劑,（4）生活污水及工業(yè)廢水中的一般成分，包括尿素、氨、硝酸鹽，以及防腐用的甲醛和氯化汞以表明不產(chǎn)生干擾。然而，并非所有天然的干