級四次分生作業(yè)藍(lán)色考題

1、1《分子生物學(xué)》作業(yè)一第24章第8章1.什么是什么是SNP？試述研究？試述研究SNP的意義。的意義。全稱SingleNucleotidePolymphisms，是指在基因組DNA上單個堿基的變異引起的DNA序列多態(tài)性。是人類可遺傳變異中最常見的一種.。SNP自身的特性決定了它更適合于對復(fù)雜性狀與疾病的遺傳解剖以及基于群體的基因識別等方面的研究：1）、SNP數(shù)量多，分布廣泛。2）、SNP適于快速、規(guī)模化篩查。3）、SNP等位基因頻率的容易

2、估計。4）、易于基因分型。SNPs的二態(tài)性，也有利于對其進(jìn)行基因分型。對SNP的深入研究具有以下幾方面意義：的深入研究具有以下幾方面意義：（1）由于SNP的低突變率、高密度、易于檢測的特性，使得它在遺傳學(xué)分析中得到廣泛應(yīng)用；（2）SNP具有已知性、可遺傳性、可檢測性，研究SNP可用于疾病基因的定位、克隆和鑒定。尋找疾病相關(guān)的突變位點，發(fā)展疾病預(yù)防策略，（3）研究SNP本身對機體的影響，尤其是疾病的易感性，從而個性化醫(yī)療。通過對藥物靶點個

3、體差異性分析，個性化藥物、方法治療。（4）法醫(yī)學(xué)研究。法醫(yī)檢驗中可以用DNA芯片分析SNP位點，應(yīng)用于親權(quán)鑒定等；(5)器官移植中供體受體配對分析。對SNP的研究將有助于解釋個體的表型差異、不同群體和個體對疾病特別是對負(fù)責(zé)疾病如腫瘤、某些遺傳疾病、糖尿病、自身免疫性疾病等的易感性和疾病的關(guān)聯(lián)基因，此外還在法醫(yī)學(xué)和致病基因的搜尋中發(fā)揮重大作用。2.F開放閱讀框架(openreadingframe，F(xiàn))：在DNA鏈上，由蛋白質(zhì)合成的起始密碼

4、開始，到終止密碼為止的一個連續(xù)編碼序列。3.調(diào)節(jié)基因調(diào)節(jié)基因指一段有效地DNA片段，他通過轉(zhuǎn)錄、翻譯而產(chǎn)生調(diào)節(jié)蛋白，該蛋白與操縱基因相互作用，從而對操縱子的活動進(jìn)行控制。4.請介紹目前蛋白質(zhì)組學(xué)研究中最常用的基本技術(shù)流程并簡述其原理。請介紹目前蛋白質(zhì)組學(xué)研究中最常用的基本技術(shù)流程并簡述其原理。蛋白質(zhì)組學(xué)常用的研究方法有雙向凝膠電泳和質(zhì)譜技術(shù)，基于凝膠的工作流程是目前使用的較為廣泛的、發(fā)展最為成熟的工作流程。（1）樣品制備—樣品來源于細(xì)胞

5、、組織、體液等。也可采用全蛋白或進(jìn)行預(yù)分級（線粒體、高爾基體、葉綠體、膜蛋白、核蛋白等）以提高低豐度蛋白質(zhì)的上樣量及檢測靈敏度。應(yīng)注意盡可能擴(kuò)大蛋白質(zhì)的溶解度和解聚，以提高分辨率。（2）樣品分離—雙向凝膠電泳（twodimensionalelectrophesis，2DE）：利用蛋白質(zhì)的等電點與分子量差異分離之。第一向：等電聚焦IEF第二向：SDSPAGE。（3）染色方法考馬斯亮藍(lán)染色、銀染（不含戊二醛）、熒光染色（Cy3、Cy5），放

6、射性同位素標(biāo)記等。5.簡述酵母雙雜交技術(shù)的原理。簡述酵母雙雜交技術(shù)的原理。答：答：很多真核生物的位點特異轉(zhuǎn)錄激活因子通常具有兩個可分割開的結(jié)構(gòu)域，即DNA特異結(jié)合域（BD）與轉(zhuǎn)錄激活域（AD）。這兩個結(jié)構(gòu)域各具功能，互不影響。但一個完整的激活特定基因表達(dá)的激活因子必須同時含有這兩個結(jié)構(gòu)域否則無法完成激活功能。不同來源激活因子的BD區(qū)與AD結(jié)合后則特異地激活被BD結(jié)合的基因表達(dá)?；谶@個原理，可將兩個待測蛋白分別與這兩個結(jié)構(gòu)域建成融合蛋白

7、，并共表達(dá)于同一個酵母細(xì)胞內(nèi)。如果兩個待測蛋白間能發(fā)生相互作用，就會通過待測蛋白的橋梁作用使AD與BD形成一個完整的轉(zhuǎn)錄激活因子并激活相應(yīng)的報告基因表達(dá)。通過對報告基因表型的測定可以很容易地知道待測蛋白分子間是否發(fā)生了相互作用。3交情況等。8.舉例說明載體應(yīng)具備的基本要素以及雙抗生素篩選和藍(lán)白斑篩選的原理。舉例說明載體應(yīng)具備的基本要素以及雙抗生素篩選和藍(lán)白斑篩選的原理。(1)載體應(yīng)具有以下特征載體應(yīng)具有以下特征①能自我復(fù)制并具有較高的拷

8、貝數(shù)，并有適宜的相對分子量，一般應(yīng)10kb②帶有遺傳篩選標(biāo)記；③有適當(dāng)?shù)南拗泼盖形稽c，便于外源基因的插入和篩選。（2）雙抗生素篩選原理雙抗生素篩選原理：某些質(zhì)粒載體如pBR322質(zhì)粒中裝有Ampr和Tetr抗性基因，在含四環(huán)素和氨芐青霉素的平皿上都能夠生長的細(xì)菌只含有空載體，此篩選方法稱為雙抗生素對照篩選。(3)Bluewhite(3)Bluewhitescreen:screen:藍(lán)白斑篩選。藍(lán)白斑篩選。即β半乳糖苷酶基因失活篩選。其原

9、理是：某些質(zhì)粒載體帶有大腸桿菌乳糖操縱子的lacZ’基因，該基因含一段編碼β半乳糖苷酶氨基末端145個氨基酸α－肽的DNA片斷，IPTG可誘導(dǎo)此片斷合成，此片斷能與宿主細(xì)胞所編碼的缺陷型β半乳糖苷酶實現(xiàn)基因內(nèi)α－互補，形成完整的β－半乳糖苷酶。該酶能催化指使劑底物X－gal形成藍(lán)色菌落。當(dāng)外源基因插入lacZ’基因中MCS(多克隆位點)，lacα－肽基因閱讀框架被破壞，細(xì)菌內(nèi)將無β－半乳糖苷酶活性，結(jié)果重組克隆呈白色菌落。9.有哪些常用

10、的探針標(biāo)記物？有哪些常用的探針標(biāo)記物？如何進(jìn)行探針的標(biāo)記？如何進(jìn)行探針的標(biāo)記？放射性同位素標(biāo)記放射性同位素標(biāo)記:常用標(biāo)記探針的同位素用標(biāo)記探針的同位素:32P：β，半衰期短（，半衰期短（14.3d），標(biāo)記核苷三磷酸，靈敏度很高，分辨率不高。，標(biāo)記核苷三磷酸，靈敏度很高，分辨率不高。35S：β，標(biāo)記蛋氨酸或取代核苷酸，標(biāo)記蛋氨酸或取代核苷酸α位磷酸基中的氧，靈敏度高，分辨率較位磷酸基中的氧，靈敏度高，分辨率較高，核酸序列測定和原位雜交。高

11、，核酸序列測定和原位雜交。3H：β，半衰期長（，半衰期長（4417d），使用較少。，使用較少。125I：γ，分辨率高，操作簡單，安全防護(hù)要求較高，原位雜交。，分辨率高，操作簡單，安全防護(hù)要求較高，原位雜交。同位素標(biāo)記方法同位素標(biāo)記方法1.缺口平移法（雙鏈）缺口平移法（雙鏈）2隨機引物法隨機引物法（單鏈）（單鏈）3.DNA探針的末端標(biāo)記探針的末端標(biāo)記4PCR標(biāo)記標(biāo)記DNA探針探針5單向體外轉(zhuǎn)錄制備單向體外轉(zhuǎn)錄制備RNA探針探針非放射性標(biāo)記

12、非放射性標(biāo)記1）.酶標(biāo)記核酸探針酶標(biāo)記核酸探針辣根過氧化物酶（HRP）易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，便宜，易觀察，應(yīng)用最廣泛。常用標(biāo)記方法是戊二醛交聯(lián)法和過碘酸鈉法2）生物素（生物素（biotin）標(biāo)記核酸探針）標(biāo)記核酸探針應(yīng)用廣泛，可替代同位素標(biāo)記。用鏈親和素系統(tǒng)檢測。酶促標(biāo)記法操作復(fù)雜，價格昂貴。光敏生物素（photobiotin）標(biāo)記方法簡單，價格適宜。地高辛（地高辛（DIG）：）：標(biāo)記于dUTP上，通過隨機引物或缺口平移法引入DNA分子中?？?/p>

13、長期保存，不受組織、細(xì)胞中內(nèi)源性生物素的干擾，敏感性高，檢測產(chǎn)物反差好，背景染色低。廣泛應(yīng)用于Southern印跡雜交、斑點雜交、菌落雜交尤其是原位雜交。熒光素（熒光素（fluescein）：）：標(biāo)記方法有直接法和間接法。非放射性標(biāo)記方法非放射性標(biāo)記方法1.化學(xué)修飾法：簡單、成本低、較通用?；瘜W(xué)修飾法：簡單、成本低、較通用。2.酶促反應(yīng)標(biāo)記法：靈敏度高，過程較復(fù)雜，成本較高。酶促反應(yīng)標(biāo)記法：靈敏度高，過程較復(fù)雜，成本較高。10.影響核酸

14、分子雜交的因素有那些？如何進(jìn)行雜交條件的優(yōu)化？影響核酸分子雜交的因素有那些？如何進(jìn)行雜交條件的優(yōu)化？影響核酸分子雜交的因素：影響核酸分子雜交的因素：（1）溫度和時間：一般認(rèn)為比Tm低25℃左右的溫度是復(fù)性的最佳條件，越遠(yuǎn)離此溫度，復(fù)性速度就越慢；復(fù)性時溫度下降必須是一緩慢過程，若在超過Tm的溫度下迅速冷卻至低溫（如4℃以下），復(fù)性幾乎是不可能的。（2）DNA濃度：DNA復(fù)性的第一步是兩個單鏈分子間的相互作用“成核”，“成核”速度與DNA