級(jí)分子生物學(xué)考題與作業(yè)匯總

1、分子生物學(xué)分子生物學(xué)閉卷閉卷一、名詞解釋一、名詞解釋8個(gè)個(gè)41、有機(jī)溶劑沉淀法有機(jī)溶劑沉淀法2、基因組基因組（genome）：是一個(gè)細(xì)胞或一種生物體的整套遺傳物質(zhì)，包括基因和非編碼DNA。即該生物體的一套染色體中的完整的DNA序列。3、LCMSLCMS4、genegenetherapytherapy［基因治療］［基因治療］：（狹義）將具有正常功能的基因置換或增補(bǔ)患者體內(nèi)有缺陷的基因，從而達(dá)到治療疾病的目的。（廣義）將某種遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移到患

2、者細(xì)胞內(nèi)，使其在體內(nèi)發(fā)揮作用，最終達(dá)到治療疾病的目的。5、RealtimeRealtime（熒光定量）（熒光定量）PCRPCR：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)累積實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。6、基因診斷：、基因診斷：即分子診斷，指通過(guò)分子生物學(xué)和分子遺傳學(xué)技術(shù)，直接檢測(cè)遺傳物質(zhì)結(jié)構(gòu)和表達(dá)是否異常，從而對(duì)人體的健康狀態(tài)和疾病做出診斷的方法。7、分子標(biāo)記物：、分子標(biāo)記物：8、逆轉(zhuǎn)錄、逆

3、轉(zhuǎn)錄PCRPCRP207P207二、問(wèn)答題二、問(wèn)答題8個(gè)：個(gè)：8，8，8，8，1010，8，10101、酵母雙雜交技術(shù)的原理和應(yīng)用？［、酵母雙雜交技術(shù)的原理和應(yīng)用？［1313、1414考題］考題］P41P412、蛋白質(zhì)分離純化的基本原則？常用有哪些方法？、蛋白質(zhì)分離純化的基本原則？常用有哪些方法？3、基因診斷的方法哪些？杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良（、基因診斷的方法哪些？杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良（DMD)DMD)的基因診斷可采用什么方法？原理與步驟如何？的基因

4、診斷可采用什么方法？原理與步驟如何？P78P78基因診斷的方法有：PCR；核酸雜交；基因芯片；bDNA；NASBA；測(cè)序。杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良（DMD)的診斷方法：多重PCR4、pUCpUC載體常用的篩選方法是什么載體常用的篩選方法是什么原理與步驟？［］原理與步驟？［］5、寡核苷酸探針的設(shè)計(jì)原則？、寡核苷酸探針的設(shè)計(jì)原則？1)探針長(zhǎng)度：一般要求在10～50bp。2)G／C含量為40％～60％。3)探針?lè)肿又袘?yīng)避免互補(bǔ)序列。4)避免同一堿基連續(xù)

5、出現(xiàn)，一般不能多于4個(gè)，如GGGG或CCCC。5)借助計(jì)算機(jī)相應(yīng)軟件與已知的各種基因序列進(jìn)行同源性比較。6、CtCt值的含義與作用。值的含義與作用。意義：確定初始模板的濃度。初始DNA量越多熒光達(dá)到某一值（域值）時(shí)所需要的循環(huán)數(shù)越少Log濃度與循環(huán)數(shù)呈線性關(guān)系，根據(jù)樣品擴(kuò)增達(dá)到域值的循環(huán)數(shù)就可計(jì)算出樣品中所含的模板量7、閱讀文獻(xiàn)、閱讀文獻(xiàn)4原題。原題。8、骨髓干細(xì)胞的特點(diǎn)。、骨髓干細(xì)胞的特點(diǎn)?！?】名詞解釋[加灰為作業(yè)涉及的13年考題，

6、加框?yàn)樾略鲎鳂I(yè)題]1、生物大分子、生物大分子:具有較大的分子量，由簡(jiǎn)單的小分子（核苷酸或氨基酸）排列組成，蘊(yùn)含豐富信息并且具有復(fù)雜的空間結(jié)構(gòu)。2、蛋白質(zhì)組（蛋白質(zhì)組（proteomeproteome）：指由一個(gè)基因組，或一個(gè)細(xì)胞、組織表達(dá)的所有蛋白質(zhì)。3、ProbeProbe：核酸探針核酸探針：是指帶有某些標(biāo)記物（如放射性同位素、熒光物質(zhì)等）的特異性核酸序列片段，可與互補(bǔ)片段結(jié)合成雙鏈結(jié)構(gòu)，從而檢測(cè)互補(bǔ)鏈的位置。4、基因芯片（基因芯片（

7、genegenechipchip）：又稱(chēng)DNADNA微陣列（微陣列（microarraymicroarray），是由大量DNA或寡核苷酸探針密集排列所形成的探針陣列，其工作的基本原理是通過(guò)雜交檢測(cè)信息。5、DNAchip:DNAchip:DNADNA芯片芯片。指通過(guò)微陣列技術(shù)將高密度DNA片斷陣列通過(guò)高速機(jī)器人或原位合成方式以一定的順序或排列方式使其附著在如玻璃片等固相表面作為探針，熒光標(biāo)記的樣品DNARNA借助堿基互補(bǔ)作用與探針進(jìn)行雜

8、交，從而進(jìn)行大量的基因表達(dá)及檢測(cè)等方面的研究。6、SNPSNP［單核苷酸多態(tài)性］單核苷酸多態(tài)性］：指在基因組水平上由單個(gè)核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性，是決定個(gè)體差異5、酚：使蛋白質(zhì)變性沉淀，抑制DNA酶活性6、PH8.0Tris溶解：保證提后DNA進(jìn)入水相，避免滯留于蛋白質(zhì)層。1.凝膠過(guò)濾層析凝膠過(guò)濾層析：凝膠是一種具有多孔、網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的分析篩，利用這種凝膠分子篩對(duì)大小、形狀不同的分子進(jìn)行層析分離，稱(chēng)為凝膠層析。其原理是：當(dāng)樣品溶

9、液通過(guò)凝膠柱時(shí)，相對(duì)分子量較大的物質(zhì)由于直徑大于凝膠網(wǎng)孔而只能沿著凝膠顆粒間的孔隙，隨著溶液流動(dòng)，因此流程較短，向前移動(dòng)速度快而首先流出層析柱；相對(duì)分子量較小的物質(zhì)直徑小于凝膠網(wǎng)孔，可自由的進(jìn)出凝膠顆粒的網(wǎng)孔，在向下移動(dòng)過(guò)程中，它們從凝膠內(nèi)擴(kuò)散到膠?？紫逗笤龠M(jìn)入另一凝膠顆粒，如此不斷的進(jìn)入與溢出，使流量增長(zhǎng)，移動(dòng)速率慢而最后流出層析柱；而中等大小的分子將在大、小分子物質(zhì)之間被洗脫，這樣經(jīng)過(guò)層析柱后，使混合物中的各物質(zhì)按其分子大小不同而被

10、分離。2.巢式巢式PCRPCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase(PolymeraseChainChainReaction)Reaction)）：是指利用２對(duì)引物，第一對(duì)引物的序列在模板外側(cè)，它做PCR的擴(kuò)增產(chǎn)物作為第二對(duì)引物退火的模板，第二對(duì)引物相對(duì)第一對(duì)引物在模板的內(nèi)側(cè)，再做PCR，由此提高靈敏度和特異性的PCR技術(shù)。3.3.RealtimeRealtime（熒光定量）（熒光定量）PCRPCR：在PCR反應(yīng)體系中加

11、入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)累積實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。4.變性變性(denaturation)(denaturation)：在某些理化因素的作用下，維系DNA分子二級(jí)結(jié)構(gòu)的氫鍵和堿基堆積力受到破壞，DNA由雙螺旋變成單鏈，作為與引物結(jié)合及TapDNA聚合酶延伸的模板，此反應(yīng)過(guò)程稱(chēng)為變性。5.復(fù)性（復(fù)性（renaturation)renaturation)：指變性DNA在適當(dāng)條件下，二條互補(bǔ)鏈全

12、部或部分恢復(fù)到天然雙螺旋結(jié)構(gòu)的現(xiàn)象，它是變性的一種逆轉(zhuǎn)過(guò)程。6.解鏈溫度（融解溫度，TmTmmeltingtemperature)：DNA的變性從開(kāi)始解鏈到完全解鏈?zhǔn)窃谝粋€(gè)相當(dāng)窄的溫度內(nèi)完成的使50%的DNA發(fā)生變性時(shí)的環(huán)境溫度即稱(chēng)之Tm。7.增色效應(yīng)：DNA變性后對(duì)260nm紫外光吸收增加的現(xiàn)象。8.減色效應(yīng)：變性DNA復(fù)性后對(duì)260nm紫外光吸收減少的現(xiàn)象。9.9.退火退火（annealingannealing）：當(dāng)溫度由高溫緩慢下

13、降時(shí)，熱變性的DNA單鏈在堿基互補(bǔ)的基礎(chǔ)上重新形成氫鍵開(kāi)始復(fù)性的過(guò)程，稱(chēng)之為“退火”。由于反應(yīng)體系中引物濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于模板DNA濃度，且引物結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，這極大地限制了變性后模板DNA單鏈之間的互補(bǔ)結(jié)合。編碼序列稱(chēng)外顯子編碼序列稱(chēng)外顯子(exon)(exon)，非編碼序列稱(chēng)內(nèi)含子，非編碼序列稱(chēng)內(nèi)含子(intron)(intron)。有些真核病毒的部分序列，對(duì)某一個(gè)基因來(lái)說(shuō)是內(nèi)。有些真核病毒的部分序列，對(duì)某一個(gè)基因來(lái)說(shuō)是內(nèi)含子，而對(duì)另一個(gè)基因而

14、言卻是外顯子。含子，而對(duì)另一個(gè)基因而言卻是外顯子。20132013年作業(yè)涉及：年作業(yè)涉及：1基因診斷：基因診斷：即分子診斷，指通過(guò)分子生物學(xué)和分子遺傳學(xué)技術(shù)，直接檢測(cè)遺傳物質(zhì)結(jié)構(gòu)和表達(dá)是否異常，從而對(duì)疾病作出判斷的方法。2無(wú)義突變：無(wú)義突變：是編碼某一氨基酸的三聯(lián)體密碼經(jīng)堿基替換后，變成不編碼任何氨基酸的終止密碼UAA、UAG或UGA。雖然無(wú)義突變并不引起氨基酸編碼的錯(cuò)誤，但由于終止密碼出現(xiàn)在一條mRNA的中間部位，就使翻譯時(shí)多肽鏈的終

15、止就此終止，形成一條不完整的多肽鏈。3動(dòng)態(tài)突變：動(dòng)態(tài)突變：動(dòng)態(tài)突變也可稱(chēng)為基因組不穩(wěn)定性(genomicinstability)。在研究與人類(lèi)神經(jīng)系統(tǒng)遺傳性疾病相關(guān)的基因時(shí)，發(fā)現(xiàn)患者基因中某種三核苷酸的重復(fù)拷貝數(shù)急劇增加，這種突變導(dǎo)致了疾病的發(fā)生。這種三核苷酸重復(fù)拷貝數(shù)增加，不僅可發(fā)生在上代的生殖細(xì)胞中而遺傳給下一代，而且在當(dāng)代的體細(xì)胞中也可發(fā)生，并同樣具有表型效應(yīng)。除此之外，一個(gè)個(gè)體的不同類(lèi)型細(xì)胞或同一類(lèi)型的不同細(xì)胞中，三核苷酸重復(fù)拷

16、貝數(shù)也可以是不同的。重復(fù)拷貝數(shù)改變后的基因的可突變性，將不同于拷貝數(shù)改變前的基因。這不同于以往發(fā)現(xiàn)的基因突變，所以稱(chēng)之為動(dòng)態(tài)突變(dynamicmutation)。4表觀遺傳：表觀遺傳：表觀遺傳是指在基因的核苷酸序列不發(fā)生改變的情況下，基因表達(dá)可遺傳的變化的現(xiàn)象，例如DNA甲基化，基因組印記，母體效應(yīng)，基因沉默，核仁顯性，休眠轉(zhuǎn)座子激活和RNA編輯等。5miRNA：是由21~25個(gè)核苷酸組成的非編碼RNA；它通過(guò)與靶基因的3UTR的配對(duì)

17、，促進(jìn)mRNA的降解或抑制mRNA的翻譯從而抑制其靶基因的表達(dá)；它在生物體生長(zhǎng)發(fā)育、細(xì)胞增殖、分化、凋亡以及人類(lèi)各種疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。6C值悖論值悖論（Cvalueparadox）：生物體的進(jìn)化程度與基因組大小之間不完全成比例的現(xiàn)象稱(chēng)為C值矛盾7開(kāi)放閱讀框架開(kāi)放閱讀框架(open(openreadingreadingframeframe，F(xiàn))F)：在DNA鏈上，由蛋白質(zhì)合成的起始密碼開(kāi)始，到終止密碼為止的一個(gè)連續(xù)編