酶標(biāo)儀使用方法

1、酶標(biāo)儀的使用方法酶標(biāo)儀的使用方法點擊次數(shù)：2886發(fā)布時間：201071217:26:29作為微孔板比色計的酶標(biāo)儀，其基本功能不外乎一個比色測定，所不同的是在測定波長范圍、吸光度范圍、光學(xué)系統(tǒng)、檢測速度、震板功能、溫度控制、定性和定量測定軟件功能等方面的差異，當(dāng)然全自動酶免疫分析系統(tǒng)還具有自動洗板、溫育、加樣等功能。在臨床實驗室實際工作中，實驗人員在使用酶標(biāo)儀進(jìn)行測定操作時，有時難免會對酶標(biāo)儀的一些性能指標(biāo)產(chǎn)生迷惑，甚至對酶標(biāo)儀的應(yīng)用產(chǎn)

2、生錯誤的理解。如諸如使用酶標(biāo)儀較用肉眼觀察測定的陽性率明顯增加這樣的問題。一、一、測定波長測定波長目前國內(nèi)常見的ELISA試劑盒所使用的標(biāo)記用酶均為辣根過氧化物酶(HRP)，底物通常為四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD)，其在過氧化氫溶液的存在下，經(jīng)HRP作用，分別氧化為22二氨基偶氮苯(DAB)和聯(lián)苯醌。當(dāng)pH值為5.0左右時，DAB在450nm波長處有最大吸收，當(dāng)pH值降為L0時，最大吸收波長移至492nm同時摩爾消光系數(shù)變大

3、，顯色加深，因而常用強(qiáng)酸如硫酸或鹽酸終止反應(yīng)。TMB的氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌在波長450nm處有最大消光系數(shù)，如果HRP量少，H:O:和TMB過量時，則形成藍(lán)色的陽離子根。降低pH即可使藍(lán)色的陽離子根轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌，使用硫酸作為終止劑可使產(chǎn)物穩(wěn)定90min.因此，450nm和492nm兩個波長是目前ELISA測定最常用的。各種酶標(biāo)儀都配有放置濾光片的可自動轉(zhuǎn)換的部件，可以同時安裝6~8片濾光片，所配備的濾光片均應(yīng)包括上述兩個波長，有的酶標(biāo)儀

4、以490nm濾光片替代492nm濾光片，影響不大一般酶標(biāo)儀的測定波長在400~750nm或800nm之間，完全可以滿足ELISA的顯色測定。。除了這兩個基本濾光片外，考慮到雙波長比色的需要，還應(yīng)有620nm或630nm或650nm和405nm波長的濾光片，其他濾光片可根據(jù)自己的需要選擇。有時，有的實驗室希望用酶標(biāo)儀作微量生化測定，故酶標(biāo)儀生產(chǎn)廠家對其生產(chǎn)的酶標(biāo)儀擴(kuò)展了紫外檢測功能，此時需要一個340nm波長濾光片。此時，酶標(biāo)儀的測定波長

5、范圍就成為340750nm或800nm。酶標(biāo)儀有單波長和雙波長檢測功能有時使用者不知在什么情況下使用單或雙波長檢測。所謂的“單波長”就是使用一種對顯色具最大吸收的波長即450nm或492nm進(jìn)行比色測定；而“雙波長”則除了用對顯色具最大吸收的波長即450nm或492nm進(jìn)行比色測定六、溫育功能六、溫育功能溫育功能是指酶標(biāo)儀本身能按要求自動精確地控制儀器內(nèi)部的溫度，使得ELISA測定中微孔板條的溫育過程可在儀器內(nèi)部完成，而無需再外配溫箱。

6、目前，只有少部分酶標(biāo)儀具有此種功能。七、軟件功能七、軟件功能軟件功能是指酶標(biāo)儀所具有的對ELISA定性和定量測定及其他測定方式如酶標(biāo)動力學(xué)、紫外和凝集等數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析并報告結(jié)果的功能。軟件功能是中高檔酶標(biāo)儀的一個非常重要的功能。如果硬件方面區(qū)別不大，則軟件就成為判定酶標(biāo)儀優(yōu)劣的惟一指標(biāo)。對于用戶來說，好的軟件功能，對實際工作會有較大的幫助。ELISA定性測定，酶標(biāo)儀如具有陽性判斷值(cutoff)及其測定“灰區(qū)”(即指測定吸光度處于cu

7、toff周圍的一定區(qū)域，此區(qū)域內(nèi)結(jié)果應(yīng)為“可疑”)的統(tǒng)計計算功能，不但方便了實驗室工作人員，而且在某些特定的情況下，有很高的實用價值。如血站實驗室為篩檢獻(xiàn)血員血進(jìn)行HBsAg、抗HCV和抗HIV等的ELISA測定時，常會遇到測定吸光度處于cutoff附近但又低于cutoff的血，按照試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)，可判為陰性，血為合格血，可用于患者輸血，但直覺告訴我們，這樣的血如輸給患者，導(dǎo)致輸血后相應(yīng)疾病發(fā)生的可能性較大，這是由ELISA現(xiàn)有的測定技術(shù)

8、的不確定性所造成的，也就是ELISA測定的“灰區(qū)”的存在使得ELISA測定試劑盒cutoff的設(shè)定只是相對的準(zhǔn)確，此時的假陽性和假陰性出現(xiàn)的可能性較低。因此，在血站篩檢獻(xiàn)血員血時，如以測定“灰區(qū)”的下限作為判斷獻(xiàn)血員血篩檢不合格標(biāo)準(zhǔn)，就可以避免因“灰區(qū)”所致結(jié)果判斷錯誤而引起輸血后疾病發(fā)生的可能性。合適的軟件功能對于ELISA定量測定同樣很重要。有研究表明，四參數(shù)方程能較好地反映免疫測定的劑量反應(yīng)曲線，最為適合于定量酶免疫測定的曲線擬合

9、。因此，如目的是定量測定，則在酶標(biāo)儀的軟件功能中，最好要有這種曲線回歸方程計算分析功能。其他諸如連點、直線等回歸計算，則可根據(jù)酶標(biāo)儀的應(yīng)用目的而定，如兼用于微量生化測定，則此類回歸計算就很有必要。八、語言界面八、語言界面通常進(jìn)口的中高檔酶標(biāo)儀人機(jī)對話多采用英文。這對于某些基層實驗室可能會存在語言方面的困難，從而難以最大限度地發(fā)揮酶標(biāo)儀的作用。為解決這方面的問題，已有一些酶標(biāo)儀采用了中文界面，如Labsystems的MK3。這樣就大大方便