實驗方法總結

1、1.1.葉片葉綠素含量的測定葉片葉綠素含量的測定葉片的葉綠素含量參照Arnon（1949）的方法進行測定。稱取去脈的水稻葉片0.1g，置于研缽中，加入預冷的80%丙酮、少許石英砂和CaCO3，研磨成漿，6000rpm冷凍離心10min，取上清。沉淀再用80%丙酮洗1次，再次6000rpm冷凍離心10min，將兩次離心得到的上清液合并。在上清液中加入80%丙酮定容至10ml，用紫外可見分光光度計GENESYS10UV（Thermo）測定其

2、在645nm和663nm處的光吸收值，根據下列公式計算葉片的葉綠素含量。葉綠素a含量（mgL）=12.7A6632.69A645葉綠素b含量（mgL）=22.9A6454.68A663總葉綠素含量（mgL）=8.02A66320.21A6452.2.土壤和葉片相對含水量的測定土壤和葉片相對含水量的測定土壤含水量采用稱重法測定，每組測定20盆。葉片組織的水分狀況用葉片相對含水量(RWC)表示:RWC=(FWDW)(SWDW)其中FW、DW

3、和SW分別表示葉片鮮重、干重和飽和質量方法：每次取葉片5片，從葉基部剪下，稱量鮮重，后迅速將葉片放入清水中浸泡3小時后取出（即葉片重量不再發(fā)生變化，完全飽和），擦掉表面水分，稱取飽和質量，經105℃30分鐘殺青后，在75℃下烘到恒重，記錄干重，并計算相對含水量。3.3.酶活性測定：酶活性測定：提取酶液，參照錢瓊秋等（Qianetal2006）的方法以緩沖液（0.05molLPBS，pH7.8）懸浮葉綠體，用于測定超氧化物歧化酶（SOD）

4、、和過氧化物酶（POD）、丙二醛（MDA）含量、蛋白質含量的測定、抗壞血酸（AsA）。分別取0.5g材料于預冷的研缽中，加入8ml預冷的50mmol1的磷酸緩沖液（PBS，ph7.8）(先加2ml，在冰浴下研磨成勻漿后，將勻漿倒入10ml的離心管，再用6ml沖洗)10000r分離心20分鐘，取上清液。(lactoflavin)葉綠體懸浮液(chloplastsuspension)0.052支對照管以PBS代替懸浮液(PBSinstead

5、ofchloplastsuspensionin2controltubes)蒸餾水(Distilledwater)0.25總體積(Totalvolume)3.03.1.33.1.3活性的計算活性的計算SOD總活性[ug(FW)]=式中：SOD總活性以酶單位每克鮮重表示。比活力單位以酶單位每毫克蛋白表示。ACK——照光對照管的吸光度。AE——樣品管的吸光度。VT——樣品液總體積，mL。V1——測定時樣品用量，mL。W——樣品鮮重，g。蛋白質

6、含量單位為mgg。3.23.2PODPOD酶活性的測定酶活性的測定參照Chance&Maehly(1955)的方法，愈創(chuàng)木酚法測定過氧化物酶（POD）活性3.2.13.2.1溶液的配制溶液的配制（1）0.05molLPH5.5的磷酸緩沖液：（2）2%雙氧水溶液：（3）0.05molL愈創(chuàng)木酚溶液：應該用愈創(chuàng)木酚的分子量乘以摩爾數得到所需愈創(chuàng)木酚的質量，然后溶于95%酒精中。如配制1L0.05molL的愈創(chuàng)木酚應稱取愈創(chuàng)木酚：124.13