海藻酸降解菌性質(zhì)及微生物對(duì)石油污染土壤生物修復(fù)影響的研究.pdf

1、褐藻膠是一種來源豐富、用途廣泛的酸性海洋活性多糖，是由α-L-古羅糖醛酸(G)及β-D-甘露糖醛酸(M)隨機(jī)組合形成的線性高分子量聚合物。褐藻多糖及其降解產(chǎn)物褐藻低聚糖已廣泛應(yīng)用于制藥、食品、化工等多個(gè)領(lǐng)域，成為人們關(guān)注和研究的重要內(nèi)容。褐藻酸裂解酶在新藥、新功能食品、新生化產(chǎn)品開發(fā)上發(fā)揮著重要作用，其研究和應(yīng)用是褐藻酸及其寡糖研究和應(yīng)用的基礎(chǔ)，是開發(fā)海洋活性物質(zhì)的重要手段之一。為此本課題對(duì)篩選出的一株產(chǎn)褐藻酸酶菌株作進(jìn)一步研究，以期為

2、海洋多糖資源的開發(fā)和利用提供更多的資源基礎(chǔ)。
　　 通過單因子實(shí)驗(yàn)確定了該菌株較優(yōu)的發(fā)酵產(chǎn)酶條件。優(yōu)化后的產(chǎn)酶培養(yǎng)基配方為：褐藻酸鈉0.5％、0.5％蛋白胨為主要氮源，并加0.1％酵母膏為輔助氮源，NaCl濃度0.5mol/L。優(yōu)化后的發(fā)酵產(chǎn)酶條件為：初始pH值9.5，裝液量為20％，30℃培養(yǎng)96h，優(yōu)化條件下最大酶活力可達(dá)12.79U/mL。
　　 菌株A7在優(yōu)化后的發(fā)酵培養(yǎng)基中30℃培養(yǎng)96h后，經(jīng)離心、80％飽和

3、度(0℃)(NH4)2SO4沉淀、將沉淀溶于pH值為7.0的磷酸鹽緩沖液中，得粗酶液。對(duì)粗酶液的酶學(xué)性質(zhì)研究表明：40℃為該酶反應(yīng)的最適溫度，其最適反應(yīng)pH值為8.0，最適底物濃度為0.3％，Mg2+和Na+均對(duì)酶活有促進(jìn)作用，但不明顯，而Cu2+，Zn+，F(xiàn)e3+等金屬離子對(duì)褐藻酸裂解酶的活性具有明顯的抑制作用。
　　 在玉米草修復(fù)石油污染土壤過程中施用不同濃度的海藻寡糖溶液，結(jié)果表明寡糖對(duì)石油去除率有積極的促進(jìn)作用，寡糖對(duì)土

4、壤中不同酶的活性影響不同。較高濃度的寡糖有利于多酚氧化酶和脫氫酶活性的提高，而較低濃度的寡糖對(duì)脲酶活性影響較為明顯。根據(jù)PCR-DGGE分子生物學(xué)方法研究土壤微生物多樣性，表明修復(fù)后土壤中微生物結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化，用稀釋20倍的寡糖溶液澆灌的玉米草土壤中DGGE條帶最亮。
　　 棉花不同處理對(duì)石油污染土壤的修復(fù)效果表明采用棉花-PGPR-降解菌聯(lián)合修復(fù)的效果最好，石油去除率達(dá)到29.76％，其次為棉花-降解菌、棉花-PGPR的聯(lián)合修