外科常用手術(shù)器械識別與使用

1、輸血科知識培訓(xùn),1,一 復(fù)習(xí)：有關(guān)血型的簡單知識與概念血型是人體血液的一種遺傳性狀，各種血液成分包括紅細胞、白細胞、 血小板及某種血漿蛋白在個體之間均具有抗原成分的差異，受獨特的 遺傳基因控制。由若干個相互關(guān)聯(lián)的抗原抗體組成的血型體系，稱為血型系統(tǒng)。血型被認為是指各種血液成分的遺傳多態(tài)性標記。“免疫血液學(xué)”在臨床醫(yī)學(xué)、人類學(xué)、遺傳學(xué)、法醫(yī)學(xué)、考古學(xué)等方面的應(yīng)用日趨廣泛， 尤其是在

2、輸血、器官移植、骨髓移植等臨床實踐中發(fā)揮著重要作用。,2,人類最重要的幾個血型系統(tǒng)紅細胞血型系統(tǒng) ABO血型系統(tǒng) Rh血型系統(tǒng)其他血型系統(tǒng) 白細胞抗原系統(tǒng) 血小板抗原及抗體 血清蛋白成分的抗原特異性,3,血型抗原與抗體的幾個特性,A或B抗原在胚胎期及出生時便能檢出，但敏感性較低，到20歲左右時 才達高峰。抗原性終身

3、不變，但到老年敏感性有所下降。ABO血型系統(tǒng)抗體有免疫抗體和天然抗體之分。 抗體有抗A和抗B兩種。 人在出生前尚未產(chǎn)生抗體，出生后3-6個月才開始出現(xiàn)，至青春期達高 峰。產(chǎn)生抗體的功能可延續(xù)終身，但其效價隨著年齡增長而逐漸降低。 天然抗體可能是由一種無覺察的抗原刺激而產(chǎn)生。 血型抗體是免疫球蛋白，免疫性抗體主要是IgG，天然抗體主要是IgM。,4,5,ABO血型分型原則,6,血型鑒定前的準備,一、標本的采

4、集 1.紅細胞懸液標本 門診血型常用手指血做正定性。但現(xiàn)在已經(jīng)不提倡了。采集EDTA-K2抗凝的靜脈血離心，取紅細胞用生理鹽水洗滌配制紅細胞懸液：2％紅細胞懸液用于抗體效價的測定； 5 ％紅細胞懸液用于血型鑒定、交叉配血試驗， 2.血漿或血清標本,7,血型及配血標本的要求,護士根據(jù)送檢單的要求，雙人核對采集標本。采集后立即送檢。輸血科工作人員注意核對接收標本兩個小時內(nèi)要完成血型的檢驗。配血標本要三天內(nèi)的。

5、標本要保存七天。,8,ABO血型鑒定方法,血型鑒定抗原+抗體反應(yīng)正向定型（direct typing）: 已知特異性抗體（標準血清） 檢測紅細胞上的未知抗原 反向定型（indirect typing): 已知血型的標準紅細胞 檢測血清中的未知抗體,,,,9,ABO血型正、反向鑒定及結(jié)果判斷,10,鑒定ABO血型常用方法,1. 生理鹽水凝集法

6、 鹽水介質(zhì)原理：Ag+Ab AgAb,,,,11,用生理鹽水為介質(zhì)，檢測的是IgM性質(zhì)抗體 玻片法試管法,12,正定型血型鑒定操作程序圖（玻片法）,13,血型鑒定,14,試管法,1、每個被檢者準備小試管1支，貼好名簽，加入等滲鹽水1ml。從毛細血管采血配成5%的紅細胞懸液，注意血液不能凝結(jié)。2、每個被檢者準備小試管3支，分別貼上A、B標簽，并標上姓名，按標簽分別加抗A、

7、B抗體2滴。3、兩管各加被檢紅細胞懸液1滴混勻。4、放在離心機內(nèi)，用1000~3000轉(zhuǎn)/分，1分鐘，觀察現(xiàn)象。,15,加被檢紅細胞懸液,16,加試劑抗體血清,17,離心,18,相對應(yīng)的抗原抗體反應(yīng),19,觀察結(jié)果,20,鏡下的凝集與非凝集,21,反向定型,一、用途：當沒有合適的標準血清，或用標準血清鑒定出現(xiàn)可疑結(jié)果時，可用此法核對。二、標準紅細胞懸液的配置：分別取已知敏感性高的標準A、B、0、三型 人的紅細胞紅洗滌三次，配成5%

8、的紅細胞懸液（若無標準紅細胞，可用5個A型，2個B型，2個O型人紅細胞，分別按型混合，代作已知標準紅細胞）三、方法1、從被檢者靜脈，制成血清或血漿。2、試管的準備，同標準血清鑒定法3、在A管放標準A型紅細胞1滴，B管放標準B型紅細胞1滴，在O型管放標準o型紅細胞1滴。4、各加被檢血清2滴，分別混勻，離心后判斷結(jié)果同前。,22,ABO血型正、反向鑒定及結(jié)果判斷,23,在特殊環(huán)境，沒有標準血清和標準紅細胞，僅知一個A型（或B型）人

9、時，若用血液，怎么來鑒定人的血型？,問題,24,2.微柱凝膠技術(shù),微柱凝膠技術(shù)是液相技術(shù)與固相技術(shù)的巧妙組合，是凝膠過濾技術(shù)、離心技術(shù)、紅細胞凝集試驗技術(shù)（特異性抗體抗原反應(yīng)）的完美結(jié)合。通過對凝膠種類的選擇和凝膠濃度的調(diào)節(jié)來控制分子篩孔徑大小,使分子篩只允許游離紅細胞通過,從而達到分辯凝集紅細胞和非凝集紅細胞的目的。微柱凝膠技術(shù)是目前最易大規(guī)模推廣、最適于常規(guī)試驗的最好血型血清學(xué)試驗技術(shù)。,25,微柱凝膠技術(shù)原理,當抗原抗體反應(yīng)時紅細

10、胞發(fā)生凝集（包括已致敏的紅細胞通過抗人球蛋白的橋連作用發(fā)生的凝集），在一定的離心力作用下，凝集的紅細胞不能通過凝膠間隙而留在凝膠分離柱上層或分散在凝膠分離柱中，此為陽性反應(yīng)；而未凝集的紅細胞在離心力的作用下可通過凝膠間隙而沉積于凝膠分離柱的底部，此為陰性反應(yīng)。,26,微柱凝膠種類,（一）中性膠（又稱空白膠，僅含有葡聚糖凝膠）：用做檢測IgM抗體與相應(yīng)抗原紅細胞的反應(yīng)。如ABO反定型。（二）特異性膠（如加入過抗-A、抗-B、抗-D等特異

11、性抗體的凝膠）：利用包被的抗體檢測相應(yīng)抗原。（三）抗球蛋白膠（包被了單特異性或多特異性抗人球蛋白試劑的凝膠）。用于檢測IgG抗體與相應(yīng)抗原紅細胞的反應(yīng)。,27,28,微柱凝膠法做ABO、Rh血型實例,紅細胞抗原與相應(yīng)抗體在微柱凝膠介質(zhì)中發(fā)生凝集發(fā)應(yīng),29,ABO、Rh血型鑒定質(zhì)量控制,1、技術(shù)上的失誤假陰性①抗體試劑與紅細胞比例不對應(yīng)。②紅細胞懸液過淡。③離心速度、時間不夠。④忽略觀察溶血現(xiàn)象，因溶血也是陽性反應(yīng)。

12、,30,假陽性①離心速度過大或離心時間過長。②使用了受到細菌污染的抗體試劑和鹽水。③使用不干凈的試管等。,31,造成假陽性或假陰性的人為原因：①標本張冠李戴。②未加入或使用了失效的試劑。③操作者不能正確識別和解釋試驗結(jié)果。④人為的書寫錯誤。,32,2、被檢人血清標本的問題①嬰兒及老年人，4～6月嬰兒血清中ABO抗體很弱②疾病影響引起假凝集或弱凝集。③治療措施的影響,33,3、被檢者紅細胞的問題①紅細胞

13、上抗原位點過少或抗原性減弱如弱A、弱B亞型和白血癥或惡性腫瘤患者②紅細胞獲得性異常，如O型或A型病人因腸道細菌感染使紅細胞上獲得類B抗原③細菌污染,34,正反定型結(jié)果不一致的解決辦法,首先重復(fù)試驗，不符則繼續(xù)做下列試驗。（1）重新采集獻血員和受血者的新鮮血液標本（2）多次洗滌被測紅細胞和標準紅細胞（3）用抗A1、抗AB檢測紅細胞。（4）如懷疑血清中有抗A1，可用數(shù)份A2紅細胞標本進行檢驗。（5）如果試驗結(jié)果未見凝集，應(yīng)

14、將正向及反向試驗至少在室溫在40℃放置30min，用顯微鏡檢查核實。（6）若懷疑是由于抗原減弱造成的正反定型不符，可進一步做木瓜酶試驗、直接抗球蛋白試驗、吸收放散試驗等加以鑒別。,35,二、 Rh血型 （Rh －Rhesus monkey的縮寫）,2、主要類型,Rh陰性：RBC上無Rh（D）抗原,Rh陽性：RBC上有Rh（D）抗原,,1、系統(tǒng)組成： (1)抗原：RhD、RhC、Rhc、RhE、Rhe

15、 主要成分為多肽鏈 (2)抗體：抗-D、抗-C 、抗-c 、抗-E 、抗-e 性質(zhì)：IgG性質(zhì) (3)基因：RHD和RHCE基因,36,3、特點（1）絕大多數(shù)為IgG抗體 Rh陰性者接受Rh陽性血后通過免疫產(chǎn)生免疫性抗體。（2）抗體可通過胎盤 其抗原性強弱依次為D、E、C、c、e，以D抗原性最強。 我們稱含D抗原的紅細胞為Rh陽性，不含D抗原的為Rh陰性。我國人

16、中Rh陰性者甚為少見。 （3）天然抗體極少?？笵抗體最常見 Rh抗體有完全抗體和不完全抗體兩種。完全抗體在機體受抗原刺激初期出現(xiàn)，一般屬IgM型，分子量大，不能通過胎盤，存留時間短。機體繼續(xù)受抗原刺激，則出現(xiàn)不完全抗體，屬IgG型，分子量小，可通過胎盤，存留時間長，常在完全抗體出現(xiàn)后出現(xiàn)，引起新生兒溶血病。,37,4、Rh血型的鑒定僅用抗D血清進行鑒定，粗略地分為Rh陽性和陰性兩類。鑒定方法 完全抗體：生理鹽水凝

17、集試驗 不完全抗體：膠體介質(zhì)法、木瓜酶法、抗人球蛋白法等,38,5、Rh血型系統(tǒng)的臨床意義Rh血型系統(tǒng)所致的溶血性輸血反應(yīng)：第一次輸血不必考慮Rh血型，第二次輸血需考慮Rh血型是否相同。新生兒Rh溶血?。篟h-的母親 ①若輸過血，懷孕后其孕兒為Rh+者，孕婦的抗Rh的抗體，可通過胎盤導(dǎo)致胎兒溶血。②第一次孕兒為Rh+，胎兒的RBC因某種原因(如胎盤絨毛脫落)進入母體，或分娩時進行胎盤剝離過程中血液擠入母體,孕婦體內(nèi)產(chǎn)生抗Rh的

18、抗體。第二次妊娠時,孕婦體內(nèi)的抗Rh的抗體，通過胎盤導(dǎo)致胎兒溶血。,39,40,6、Rh血型鑒定方法：鹽水法：單克隆IgM抗D，化學(xué)結(jié)合抗D凝聚胺法：抗球蛋白法：經(jīng)典法，改良法酶法：菠蘿酶，木瓜酶。微柱凝膠法：,41,7、臨床意義（1）Rh陽性和Rh陰性輸血（2）Rh－HDN（3）中國人RH基因多態(tài)性,42,二、抗體篩查（卡式）,43,三、交叉配血試驗1.交叉配血實驗 分別將供血者的RBC與受血者的血清及供血者

19、的血清與受血者的RBC進行的配合試驗2.交叉配血實驗的意義（1）檢驗血型鑒定是否有誤。（2）檢驗血清中是否有不規(guī)則抗體。 （3） “交叉配血”是保證輸血安全的關(guān)鍵措施。,44,交叉配血試驗主要方法,根據(jù)性質(zhì)分：（1）鹽水配血試驗（2）凝聚胺配血試驗（3）抗人球配血試驗（4）特殊配血試驗等（酶法、特殊介質(zhì)配血等）根據(jù)方法分（1）試管法（2）卡式（3）全自動,45,,,紅細胞,紅細胞,血清,血清,（主側(cè)）,（次側(cè)）,（供血者）,（

20、受血者）,交叉配血試驗示意圖,兩側(cè)均無凝集反應(yīng)，可以輸血。主側(cè)有凝集反應(yīng)，絕對不能輸血。次側(cè)有凝集反應(yīng)，一般不宜輸血。,結(jié)果判讀,46,配血方法的選擇1、生理鹽水法：無輸血史及妊娠史2、間接抗人球蛋白法：有反復(fù)輸血史及妊娠史，尤其是有輸血反應(yīng)史、生育過新生兒溶血病嬰兒的婦女。大量輸血時須同時做供血者之間的交叉配血實驗。,47,交叉配血的方法,均不凝集：配血相合主側(cè)凝集：配血不合主側(cè)不凝，次側(cè)凝集：只在應(yīng)激情況下少量緩慢，或