十二烷基苯磺酸鈉降解菌的分離鑒定與特性研究.pdf

1、目前，表面活性劑對(duì)生態(tài)環(huán)境的影響已成為國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)。由于表面活性劑對(duì)水生植物、水生動(dòng)物及微生物的損害比較大，影響水體自凈能力并加速水體富營養(yǎng)化進(jìn)程。隨著合成洗滌劑的大量使用，陰離子表面活性劑十二烷基苯磺酸鈉(sodium dodecyl benzene sulfonate，SDBS)在世界各地各種水體中都有發(fā)現(xiàn)。因此，對(duì)十二烷基苯磺酸鈉污染的治理具有非常重要的意義。為了探索出簡(jiǎn)便、有效的處理環(huán)境中陰離子表面活性劑十二烷基苯磺酸鈉

2、的生物修復(fù)方法，本研究從受污染的河水中篩選出能高效降解陰離子表面活性劑十二烷基苯磺酸鈉的菌株WZR—A，并對(duì)篩選出的降解菌進(jìn)行了形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察、分子生物學(xué)鑒定、生長(zhǎng)和降解特性、相關(guān)降解酶的特性、降解底物廣譜性和相關(guān)降解基因定位等研究。 主要得到以下幾個(gè)結(jié)果： 1．篩選出了一株高效降解十二烷基苯磺酸鈉的菌株WZR—A。運(yùn)用透射電鏡(TEM)觀察了降解菌WZR—A的形態(tài)結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明：降解菌WZR—A的個(gè)體形態(tài)均為長(zhǎng)桿菌有2根

3、亞極生鞭毛。革蘭氏染色為陰性，接觸酶、氧化酶陽性。經(jīng)Biolog細(xì)菌鑒定系統(tǒng)分析降解菌WZR—A的代謝指數(shù)與人蒼白桿菌(Ochrobactrum anthropi)的相似性為100％。，應(yīng)用16S rDNA PCR擴(kuò)增和克隆測(cè)序的方法對(duì)降解菌WZR—A進(jìn)行了分子生物學(xué)鑒定，降解菌WZR—A屬于蒼白桿菌屬(Ochrobactrum sp．)，與人蒼白桿菌(Ochrobactrum anthropi)最為相似，同源性為99％。結(jié)合上述的形態(tài)

4、、生理鑒定，Biolog測(cè)試結(jié)果與16srDNA分析結(jié)果將降解菌WZR—A初步鑒定為人蒼白桿菌(Ochrobactrumanthropi)。 2．菌株的生長(zhǎng)和降解特性試驗(yàn)表明降解菌WZR—A能以十二烷基苯磺酸鈉為唯一碳源和能源進(jìn)行生長(zhǎng)，并能適應(yīng)高濃度的十二烷基苯磺酸鈉。底物濃度、起始pH值、溫度等因素對(duì)降解菌WZR—A生長(zhǎng)特性及其對(duì)十二烷基苯磺酸鈉降解影響的研究表明底物濃度在200mg/L生長(zhǎng)和降解效率較高。在30℃，pH7.0

5、時(shí)生長(zhǎng)較好。SDBS濃度低于400mg/L時(shí)菌株的SDBS降解率可在80％以上。 3．菌株細(xì)胞蛋白SDS—PAGE電泳結(jié)果顯示，菌株在SDBS誘導(dǎo)前后的細(xì)胞蛋白組成有明顯差異。相關(guān)實(shí)驗(yàn)表明降解菌WZRA中的SDBS相關(guān)的降解酶為誘導(dǎo)酶。酶的定域試驗(yàn)表明，該菌的相關(guān)降解酶為胞內(nèi)酶。相關(guān)降解酶活性的測(cè)定及降解底物測(cè)試結(jié)果顯示，該菌株可能通過鄰位開環(huán)途徑裂解芳環(huán)且能降解多種芳香族化合物。此外，利用質(zhì)粒檢測(cè)和消除試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)菌株WZR—A中