高效液相-電化學(xué)法測(cè)定大鼠血漿中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物

1、1高效液相高效液相電化學(xué)法測(cè)定大鼠血漿中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物電化學(xué)法測(cè)定大鼠血漿中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物崔翰明，白鴿，黃世敬，張春光，張秋燕（中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院，北京100053）[摘要摘要]目的目的：建立高效液相色譜庫(kù)侖陣列電化學(xué)法測(cè)定大鼠血漿中的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物含量的分析方法。方法方法：采用Agilent公司的1200型高效液相色譜儀和ESA公司庫(kù)侖2通道電化學(xué)檢測(cè)器，以3，4二羥基芐胺（DHBA）為內(nèi)標(biāo)，

2、測(cè)定大鼠血漿中的腎上腺素（E）、去甲腎上腺素（NE）、多巴胺（DA）、高香草酸（HVA）和5羥色胺（5HT）的含量。色譜柱：ZbaxEclipseXDBC18（4.6mm150mm5μm），加EasyGuard預(yù)柱；流動(dòng)相：含一水合檸檬酸80mmol?L1，檸檬酸三鈉73.4mmol?L1，1－辛烷磺酸鈉0.12mmol?L1，乙二胺四乙酸二鈉0.1mmol?L1，18％甲醇的混合溶液，pH4.3；流速：1.0mL?min1；柱溫：25

3、℃；進(jìn)樣量：10μL；測(cè)定電極電勢(shì)：150mv和400mv。結(jié)果：結(jié)果：NE、E、DA、HVA和5HT的最低檢測(cè)濃度分別為2.0，3.0，5.4，5.2，11.1ng?mL1；平均回收率分別為99.72％、85.33％、83.15％、120.43％、103.56％；日內(nèi)(n=6)和日間(n=3)精密度RSD小于9.12％。結(jié)論結(jié)論：本方法操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，快速，靈敏度高。可用于大鼠血漿中相關(guān)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的檢測(cè)和研究。[關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞]單胺

4、類神經(jīng)遞質(zhì)；高效液相色譜；庫(kù)侖陣列電化學(xué)檢測(cè)器；兒茶酚胺MeasurementofmonoaminesneurotransmittertheirmetabolitesinratplasmabyHPLCwithCoularrayDetactionCUIHanming，BAIGe，HUANGShijing，ZHANGChunguang，ZHANGQiuyan(Guang’anmenHospitalChinaAcademyofChineseM

5、edicalScienceBeijing100053China)[Abstract]ObjectiveToestablishameasurementmethodondeterminingthelevelofmonoaminesneurotransmittertheirmetabolitesinratplasmabyHPLCwithCoularrayDetect2.MethodsThelevelofNEEDAHVA5HTinratplas

6、maweredeterminedbyAgilent1200HPLCwithESACoularrayDetect2.Mobilephaseconsistedof80mmol?L1Citricacidmonohydrate73.4mmol?L1Citricacidtrisodiumsalt0.12mmol?L11Octanesulfonicacidsodiumsalt0.1mmol?L1EDTANa218%methanolmixtureso

7、lution(pH4.3).Flowratewas1.0mL?min1.TheColumnwasZbaxEclipseXDBC18（4.6mm150mm5μm）Easyguardguardcolumnat25℃.Thevoltageofelectrodewas150mv【收稿日期】2009070331.4標(biāo)準(zhǔn)液的配制標(biāo)準(zhǔn)液的配制1.4.1標(biāo)品母液的配制：精密稱取VMA、NE、E、DHBA、DA、HVA、5HT的標(biāo)準(zhǔn)品各約1mg，分別溶于

8、1mL蒸餾水中，得濃度約為1000μg?mL1的母液。80℃避光保存。母液濃度分別為：VMA：1.20mg?mL1，DHBA：1.24mg?mL1，E：1.13mg?mL1，NE：1.09mg?mL1，5HT：1.26mg?mL1，DA：1.04mg?mL1，HVA：1.34mg?mL1。1.4.2標(biāo)品儲(chǔ)備液和混合標(biāo)品儲(chǔ)備液的配制取標(biāo)品母液各10μL，分別加入990μL蒸餾水，即得濃度約為10μg?mL1的標(biāo)品儲(chǔ)備液。取標(biāo)品母液各10μ

9、L充分混合，加入930μL蒸餾水混勻，即得濃度約為10μg?mL1的混合標(biāo)品儲(chǔ)備液。20℃避光保存。兩周內(nèi)使用。1.4.3標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制精密量取適量標(biāo)品儲(chǔ)備液，分別用流動(dòng)相稀釋，配制成濃度分別約為1，5，10，50，100，500ng?mL1的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，置4℃避光保存。1.51.5血漿樣品的前處理血漿樣品的前處理：體重200~300g雄性SD大鼠，采用玻璃毛細(xì)管自眼眶采血或自股動(dòng)脈抽血，置于肝素抗凝的EP管中，迅速4℃條件下1200

10、0g低溫離心15min，吸取血漿80oC凍存?zhèn)溆?。取凍存血漿，室溫解凍，精密吸取100μL，加6.2ng?μL1的DHBA內(nèi)標(biāo)液2μL再加0.1M高氯酸100μL，混勻，再加濃高氯酸8μL，4℃條件下12000g低溫離心10min，上清液直接進(jìn)樣。2實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.12.1色譜行為色譜行為在上述色譜條件下標(biāo)品和血漿中的各峰型對(duì)稱，無內(nèi)源性雜質(zhì)干擾峰，各峰分離效果較好。整個(gè)色譜可在12min完成，VMA、NE、E、DHBA、DA、HV