halobacteriumsp.xz515來源細菌視紫質(zhì)基因的克隆及其表達

1、復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文Halobacterium sp.xz515來源細菌視紫質(zhì)基因的克隆及其表達姓名：王奕然申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：黃偉達20030501H a l o b a c t e r i u ms p x z 5 1 5 來源細菌視紫質(zhì)基因的克隆及其表達 第3 頁，共4 5 廷摘 要H a l o b a c t e r i u ms p e c i e sx z 5 1 5 是從中國西藏分離到的

2、嗜鹽菌，由于所含細菌視紫質(zhì)( 命名為A R 4 ) 與其它己知細菌視紫質(zhì)具有相反的質(zhì)子釋放和吸收的順序而引起重視( L i Q G e l a l ，2 0 0 0 ) 。所以，A R 4 基因序列的解密，對于細菌視紫質(zhì)家族的進化以及它自身質(zhì)子的釋放和吸收順序的研究具有重要的作用。本研究利用新穎的“酶切一連接- - P C R ”的組合( L P A 法) ，克隆了包括完整A R 4 基因開放閱讀框和O ．4 k b 上游調(diào)控區(qū)域的總長

3、度1 ．3 k b 的D N A 片斷。該D N A 片段克隆到表達載體p N o v —R - m i n i 上后轉(zhuǎn)化到細菌視紫質(zhì)b R 缺陷株H s a l a a mL 3 3 中進行了表達，所得表達產(chǎn)物經(jīng)分析確認與野生型A R 4 具有相同的分子量和相同的質(zhì)子泵功能。對5 種具有質(zhì)子泵功能的細菌視紫質(zhì)進行的氨基酸同源性分析發(fā)現(xiàn)，A R 2 與A R 4 在具有最高的同源性，在功能區(qū)僅有十個氨基酸殘基的差異，但兩者卻具有相反的質(zhì)

4、子釋放和吸收順序，提示這1 0 個氨基酸的差異很可能是導(dǎo)致A R 4 具有相反的質(zhì)子釋放和吸收機制的原因。L P A 法被證明是一種從部分已知D N A 序列出發(fā)快速獲得目的基因全序列以及基因兩側(cè)序列的簡便方法，并已經(jīng)在多項研究中得到應(yīng)用。關(guān)鍵詞：克隆：古細菌視紫質(zhì)：細菌視紫質(zhì)；接頭；連接反應(yīng)介導(dǎo)的聚合酶鏈式反應(yīng)擴增法；質(zhì)子泵縮寫：A R ，古細菌視紫質(zhì)；b R ，H a l o b a c t e r i u m a a l i n

5、a r u m 的細菌視紫質(zhì)；L P A ，連接反應(yīng)介導(dǎo)的聚合酶鏈式反應(yīng)擴增法；Hs a l i n a r u m L 3 3 ，H a l o b a c t e r i u ms a l i n a r u m L 3 3 ；／t s p ．x z 5 1 5 ．H a b o b a c t e r i “ms p e c i e s ．x z 5 1 5 ；R A C E ，快速克隆e D N A 末端。復(fù)旦大學(xué)撰寫科學(xué)報告和