ⅰ、用黃瓜papp2c啟動(dòng)子表達(dá)擬南芥廣譜抗病蛋白rpw8.1初探ⅱ、70％嘧菌脂烯酰嗎啉水分散粒劑防治黃瓜霜霉病農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)

1、⑧E 碩士學(xué)位論文I 、用黃瓜剛腳c 啟動(dòng)子表達(dá)擬南芥廣譜抗病’’：．，蛋白R(shí) P W 8 ．1 初探r、 ∥I I 、7 0 ％嘧菌脂·烯酰嗎啉水分散粒劑防治黃瓜一 j ‘霜霉病農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)。 、=指導(dǎo)教師 。一王塞盟題盔強(qiáng)導(dǎo)師組王塞盟奎茲楚晶校外導(dǎo)師 劃疊班寇雖學(xué)位類別 ． 童然堂位 ．．、’j領(lǐng)域名稱 植物埕坦研究方向?！?擅物垃瘟蛙及基剩田。}12 0 1 7 年6 月摘要黃瓜白粉病是黃瓜的主要病害之一，造成葉片變

2、黃、發(fā)脆、干枯，嚴(yán)重影響黃瓜葉片的光合作用，降低黃瓜產(chǎn)量，黃瓜白粉病具有潛育期短，再侵染頻繁、流行性強(qiáng)和周年發(fā)生等特點(diǎn)，并且一般在黃瓜生長中、后期病情發(fā)展傳播迅速，給生產(chǎn)帶來嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。目前，黃瓜白粉病的主要防治手段有四種：加強(qiáng)田間管理，藥劑防治，棚室消毒和選育抗病品種。四種方法有利有弊，基于傳統(tǒng)的抗病育種工作需要明確黃瓜白粉病抗性基因的定位，再通過雜交育種，回交育種，經(jīng)過多代的選育，工作難度大。擬南芥R P W 8 對(duì)白粉菌具有廣譜

3、抗病性，這一基因位點(diǎn)包含兩個(gè)基因，分別是R P W 8 ．』和R P W 8 ．2 。它不僅僅對(duì)擬南芥白粉菌有抗性作用，對(duì)擬南芥霜霉菌、煙草白粉菌和煙草花葉病毒等多種植物寄生性病原體都表現(xiàn)出較高的抗性。R P W 8 ．1 蛋白位于葉綠體周圍，它比起R P W 8 ．2 蛋白更有抗病潛力，在擬南芥中大部分( 8 0 ％) 轉(zhuǎn)基因株系抗霜霉病，小部分( 3 0 ％) 抗白粉病，1 0 ％左右的轉(zhuǎn)基因系既抗白粉病，又抗霜霉病。故擬采取轉(zhuǎn)基因

4、的方法將廣譜抗病基因R P W 8 ．1 轉(zhuǎn)入黃瓜中，期望獲得能抗白粉病和霜霉病的黃瓜。為達(dá)此目的，需要先篩選黃瓜中受白粉病菌侵染誘導(dǎo)表達(dá)的啟動(dòng)子，再將黃瓜啟動(dòng)子啟動(dòng)的R P W 8 ．1 在煙草中瞬時(shí)表達(dá)鑒定其能力，最后導(dǎo)入黃瓜構(gòu)建轉(zhuǎn)基因系。得到了如下結(jié)果：1 、將黃瓜接種黃瓜白粉菌，假單胞桿菌，通過q R T - P C R 分析黃瓜劇即2 C 基因的轉(zhuǎn)錄水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃瓜P A P P 2 C 基因是受黃瓜白粉病和假單胞桿菌誘導(dǎo)表

5、達(dá)的。接種黃瓜白粉病和假單胞桿菌2 4 h 后，俐即2 C 轉(zhuǎn)錄水平明顯升高，這說明P A P P 2 C是可以受病原菌誘導(dǎo)表達(dá)的，故選擇啟動(dòng)子朋即2 C 來啟動(dòng)R P W 8 ．1 的表達(dá)。2 、選擇了C s P P 2 C 1 0 P F l 和C s P P 2 C 1 0 P F 2 作為R P W 8 ．，的候選啟動(dòng)子片段。通過構(gòu)建p C s P P l 0 C Y l ．e Y F P 和p C s P P l 0 C Y

6、2 ．e Y F P 兩個(gè)啟動(dòng)子報(bào)告基因載體，并且在煙草中的瞬時(shí)表達(dá)，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)啟動(dòng)子片段C s P P 2 C I O P F l 和C s P P 2 C 1 0 P F 2 均能啟動(dòng)e Y F P 的表達(dá)，但從熒光看到C s P P 2 C 1 0 P F l 所啟動(dòng)的熒光比C s P P 2 C 1 0 P F 2 弱，故選擇了C s P P 2 C 1 0 P F 2 作為啟動(dòng)子來啟動(dòng)R P W 8 ．1 的表達(dá)。3 、發(fā)現(xiàn)C