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1、從微藻中提取粗脂的方法綜 從微藻中提取粗脂的方法綜述摘要: 摘要:微藻是指那些只有在顯微鏡下才能辨別形態(tài)的微小藻類。部分微藻富含油脂。微藻油脂提取步驟大致包括破胞處理、分離提取。大致方法有超聲破碎處理、凍融破碎處理和石油醚—乙醚、異丙醇法、氯仿—甲醇法。本文大致敘述了這幾種方法的原理和操作。關(guān)鍵詞: 關(guān)鍵詞:微藻 油脂提取 反復(fù)凍融 石油醚乙醚一、引言 一、引言 微藻是指那些只有在顯微鏡下才能辨別形態(tài)的微小藻類,在陸地、海洋分布
2、廣泛,營養(yǎng)豐富、光合利用度高的自養(yǎng)植物。部分微藻中含有數(shù)量相當可觀的油脂類物質(zhì),可以直接提取得到微藻油。而微藻油可以用來生產(chǎn)生物柴油。例如,小球藻(Chlorella)為綠藻門小球藻屬普生性單細胞綠藻,是一種球形單細胞淡水藻類,直徑 3~8 微米,是地球上最早的生命之一,出現(xiàn)在 20 多億年前,基因始終沒有變化,是一種高效的光合植物,以光合自養(yǎng)生長繁殖,分布極廣。有數(shù)據(jù)表明:機械攪拌發(fā)酵罐中大規(guī)模異養(yǎng)培養(yǎng)小球藻,最高細胞十重濃度達到了
3、43.3g/L,總油脂含量也可高達 57.7%。 在世界能源危機和環(huán)境污染的雙重影響下,生物質(zhì)能源由于可再生、低污染等優(yōu)勢,被認為是在未來一個較短時期內(nèi)最有潛力緩解能源危機的石油替代品。而微藻由于具有生物量大、光合效率高、生長周期短、油脂含量高和環(huán)境友好等優(yōu)點,有望破解后石油時代的能源危機,藻類尤其是微藻類將會成為提供新能源和新資源的“明星”,微藻的能源化利用有望成為“后石油時代”破解能源危機的一把金鑰匙。在最近兩年,不管是國內(nèi)外有關(guān)利
4、用微藻生產(chǎn)生物燃料的基礎(chǔ)研究,還是應(yīng)用開發(fā)報道都呈現(xiàn)大幅增長的態(tài)勢。但是微藻油脂是胞內(nèi)產(chǎn)物,如何實現(xiàn)有效的破碎藻細胞以充分釋放并高效率地提取出來是急需解決的一個關(guān)鍵性問題。目前業(yè)內(nèi)關(guān)于微藻油脂破碎提取凍融法對藻細胞進行破碎,雖然處理的時間長,但處理量大,在整個處理過程中始終保持較低的溫度,特別適合于熱敏性的活性物質(zhì)的提取前預(yù)處理。3、油脂分離提取方法及操作 、油脂分離提取方法及操作油脂提取一般采用有機溶劑萃取的方法,利用油脂能溶于有機溶
5、劑的特點,然后根據(jù)不同的沸點可以把油脂蒸餾出來。一般來說,所用有機萃取劑的沸點沒有油脂的高。1> 改良的酸水解法:稱取濕藻體或干藻粉1 g,置于50 mL帶蓋離心管中,加入4 mL滅菌蒸餾水,混勻后加入5 mL鹽酸,將離心管置于70一80℃水浴中20 min,取出離心管,加入5 mL 95%的乙醇,混勻。冷卻后加入10 mL乙醚,加蓋振搖1min,小心開蓋,放出氣體。4 000 r/min離心2 min,吸取上清液于已恒
6、重的錐形瓶中,再加5 mL乙醚于離心管中,加蓋振搖1 min,4 000 r/min離心2 min,吸取上清液于原錐形瓶中。將錐形瓶置于水浴鍋上蒸干,再置于95—105℃ 烘箱中干燥2 h,取出冷卻后稱重,計算微藻中油脂得率。2> 石油醚—乙醚:乙醚-石油醚(1:2)體積比為1:3的比例向1份勻漿液中加入3份乙醚-石油醚(1:2) ,在混合器中,30min定時高強度攪拌,萃取時間5h。4 000 r/min離心5min,吸取
7、上清液于已恒重的錐形瓶中,將錐形瓶置于40℃水浴鍋上蒸干,再置于95~105 ℃烘箱中干燥2 h,取出冷卻后稱重,計算微藻中油脂得率。3> 異丙醇法:稱取濕藻體或干藻粉l g,置于10 mL離心管中,加入5 mL異丙醇(60℃預(yù)熱),室溫下萃取10 h,4 000 r/min離心2 min,吸取上清液于已恒重的錐形瓶中,再向離心管中加入5mL異丙醇,室溫萃取l h,離心吸取上清液于原錐形瓶中。將錐形瓶置于水浴鍋上蒸干,再置于95~
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