人中心蛋白3與金屬離子結(jié)合的性質(zhì)研究.pdf

1、中心蛋白與微管組織中心(microtubule organization center，MTOC)的復(fù)制或分離、DNA切除修復(fù)以及乳腺癌的發(fā)展等許多生物功能有著緊密的關(guān)系，研究中心蛋白對(duì)于我們解決信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞分裂、基因修復(fù)及癌癥等方面的問題都具有重要的意義。
　　人體內(nèi)中心蛋白比低等真核生物及高等植物中心蛋白功能分工更明確，人中心蛋白主要包括人中心蛋白1-3(Human centrin1-3，HsCen1-3)三個(gè)亞型，研究最多

2、、最徹底的是HsCen2，例如在DNA切除修復(fù)、Ca2+結(jié)合及靶肽等方面，同源性較高的HsCen1最近也被表明與人體內(nèi)的癌癥較為相關(guān)。對(duì)于與HsCen1-2同源性相差較大的HsCen3而言，其具體的生物學(xué)功能等尚不明確，本文選用HsCen3研究其結(jié)合金屬離子的相關(guān)性質(zhì)。
　　通過檢測(cè)HsCen3及N、C-HsCen3與Tb3+結(jié)合后引起的金屬離子熒光敏化以及蛋白聚集證明，一個(gè)HsCen3分子可以結(jié)合四個(gè)稀土Tb3+，且Tb3+結(jié)合

3、在HsCen3的四個(gè)金屬結(jié)合位點(diǎn)的順序依次為：Ⅲ，Ⅳ>Ⅰ>Ⅱ；TNS為探針研究HsCen3構(gòu)象變化的實(shí)驗(yàn)表明：一個(gè)HsCen3可以結(jié)合四個(gè)TNS，且四個(gè)TNS與HsCen3的Trp93之間的能量轉(zhuǎn)移效率E=0.37，平均距離r=1.04nm，TNS與HsCen3的結(jié)合作用中疏水作用力占主導(dǎo)。HsCen3結(jié)合Tb3+后使得其疏水區(qū)域暴露，且所暴露的疏水區(qū)C端遠(yuǎn)小于N端。
　　HsCen3，HsCen2與Tb3+結(jié)合后引起金屬離子熒光

4、敏化對(duì)比證明，一個(gè)HsCen3分子可以結(jié)合四個(gè)Tb3+，而一個(gè)HsCen2僅結(jié)合兩個(gè)Tb3+；HsCen3與HsCen2結(jié)合Tb3+后都會(huì)引起Tb3+的敏化及蛋白聚集，但HsCen3對(duì)Tb3+的敏化程度遠(yuǎn)強(qiáng)于HsCen2， HsCen3的聚集程度強(qiáng)于HsCen2，且聚集后HsCen3的顆粒大于HsCen2；HsCen3及HsCen2結(jié)合Tb3+前后的熒光壽命測(cè)定結(jié)果表明，HsCen3在結(jié)合Tb3+后蛋白構(gòu)象改變并未對(duì)Trp93周圍的環(huán)境

5、產(chǎn)生影響，而對(duì)于HsCen2結(jié)合Tb3+后，構(gòu)象改變使得Tyr172周圍的環(huán)境變得更為疏水。
　　最后研究了HsCen3與血紅素(Hemin)的相互作用，首先采用電化學(xué)手段進(jìn)行表征，研究發(fā)現(xiàn)HsCen3與Hemin存在著相互作用，且Ca2+能促進(jìn)HsCen3與Hemin的相互作用；Hemin與HsCen3作用的紫外差光譜也表明，Hemin能與HsCen3結(jié)合；N、C-HsCen3與Hemin作用的紫外差光譜進(jìn)一步表明，HsCen3