高毒力肺炎克雷伯菌分子特征、血流感染危險(xiǎn)因素及其延遲中性粒細(xì)胞凋亡的調(diào)控機(jī)制.pdf

1、目的：
　　1.研究高毒力肺炎克雷伯菌血流感染的流行特征及危險(xiǎn)因素分析，為臨床合理治療和防治高毒力肺炎克雷伯菌血流感染提供科學(xué)依據(jù)。
　　2.探究血流感染中高毒力肺炎克雷伯菌毒力、分子流行病學(xué)特征及其對(duì)中性粒細(xì)胞功能的影響。
　　3.初步探究高毒力肺炎克雷伯菌延遲中性粒細(xì)胞凋亡的調(diào)控機(jī)制。
　　方法：
　　1.收集南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院2014年1月-2016年12月住院患者血液標(biāo)本分離出的肺炎克雷伯菌178

2、株。采用腸桿菌科基因間重復(fù)一致序列聚合酶鏈反應(yīng)(ERIC-PCR)與多位點(diǎn)序列分析法(MLST)確定主要基因分型及其病區(qū)分布。
　　2.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)及測(cè)序技術(shù)確定其血清莢膜分型及毒力基因攜帶，本研究定義凡是符合以下任何一項(xiàng)：攜帶K1、K2、rmpA/rmpA2基因或者高黏液表型陽(yáng)性的菌株為高毒力菌株，否則為非高毒力菌株；查詢統(tǒng)計(jì)分析這178例患者的臨床資料，實(shí)驗(yàn)分為高毒力菌株組與非高毒力菌株組，運(yùn)用單因素分析和多因素l

3、ogistic回歸分析高毒力肺炎克雷伯菌血流感染的危險(xiǎn)因素。
　　3.收集南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院2016年6月-2016年12月住院患者血標(biāo)本分離出的肺炎克雷伯菌55株，PCR擴(kuò)增及測(cè)序確定其wzi分型，PCR擴(kuò)增確定其ompK36等位基因分群(A、B、C、D)，用血清抗性、抗中性粒細(xì)胞吞噬試驗(yàn)來(lái)研究肺炎克雷伯菌的體外毒力性；采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)患者外周血中性粒細(xì)胞表面分子表達(dá)的變化，采用ELISA檢測(cè)患者體內(nèi)炎癥因子的釋放量。

4、>　　4.建立體外中性粒細(xì)胞感染模型和體內(nèi)腹腔感染膿毒癥動(dòng)物模型，采用Western-Blot檢測(cè)中性粒細(xì)胞凋亡調(diào)控蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.178株血流感染肺炎克雷伯菌，主要基因分型是ST11型，其中HvKP菌株以ST23型為主。主要見(jiàn)于消化科、燒傷科、神經(jīng)外科、重癥醫(yī)學(xué)科，且呈現(xiàn)克隆性傳播。
　　2.伴有糖尿病基礎(chǔ)疾病、引流、血型（A型）、使用喹諾酮類及碳青霉烯類抗菌藥物是HvKP血流感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素

5、。
　　3.在55株血流感染KP中，有20株HvKP菌株，35株non-HvKP菌株。HvKP菌株的MLST分型以ST23和ST65為主，而non-HvKP菌株則以ST11型為主；HvKP菌株的ompK36等位基因以C群為主，而non-HvKP菌株則以A群和D群為主；HvKP菌株的莢膜血清分型以wzi2-K2和wzi1-K1為主，而non-HvKP菌株則以wzi64-K64分型為主。
　　4.在20株血流感染HvKP中，有1

6、6株表現(xiàn)出高水平的血清抗性能力，而在35株non-HvKP中，僅有4株表現(xiàn)出高水平的血清抗性能力；HvKP菌株攜帶毒力相關(guān)基因數(shù)多于non-HvKP菌株。
　　5.在抗中性粒細(xì)胞吞噬方面，大部分non-HvKP菌株的中性粒細(xì)吞噬率均在55-80％左右，而大部分HvKP菌株的中性粒細(xì)胞吞噬率在30%左右。
　　6.相比較non-HvKP組，HvKP組患者體內(nèi)PD-1、CD86表達(dá)明顯下調(diào)，而PD-L1、CD80明顯變化；HvK

7、P組患者體內(nèi)IL-2、IL-8、IL-1β釋放量明顯增多，而TNF-α釋放量明顯降低。
　　7.在 HvKP感染的早期，HvKP感染組NF-κB P65蛋白含量顯著高于non-HvKP感染組；HvKP感染組Bax/Bcl-2的比值顯著低于non-HvKP感染組；HvKP感染組Caspase-3，8，9蛋白含量顯著低于non-HvKP感染組。
　　結(jié)論：
　　1.在本院血流感染KP菌株的MLST分型以ST11為主，而血流

8、感染HvKP菌株以ST23、ST65型為主。
　　2.通過(guò)本文對(duì)HvKP血流感染的危險(xiǎn)因素分析，提示我們要特別重視合并有慢性內(nèi)科基礎(chǔ)疾病，特別是伴有糖尿病的血流感染KP患者；其次要注意引流操作的無(wú)菌意識(shí)及引流時(shí)間和碳青霉烯類、喹諾酮類抗菌藥物的合理使用。
　　3.HvKP菌株的ompK36等位基因以C群為主，莢膜血清分型以wzi2-K2和wzi1-K1為主。
　　4.相比較non-HvKP菌株，HvKP菌株攜帶毒力相關(guān)