基于電穿孔技術(shù)的活細(xì)胞表面增強(qiáng)拉曼光譜研究.pdf

1、本文概述了表面增強(qiáng)拉曼散射(SERS)在細(xì)胞生化研究中的應(yīng)用,針對(duì)現(xiàn)有孵育培養(yǎng)方法將SELLS探針導(dǎo)入活細(xì)胞內(nèi)存在的樣品準(zhǔn)備時(shí)間長(zhǎng)、無(wú)法實(shí)時(shí)檢測(cè)、不適用于懸浮細(xì)胞等不足,提出電穿孔-SERS方法,即利用電穿孔技術(shù)將金、銀納米粒子等SERS探針在1min內(nèi)快速導(dǎo)入活細(xì)胞內(nèi)作為SERS增強(qiáng)基底,進(jìn)而通過(guò)細(xì)胞SERS光譜及SERS成像對(duì)細(xì)胞生化進(jìn)行研究。主要研究工作如下:
　　 1.利用電穿孔技術(shù)將銀納米粒子快速導(dǎo)入鼻咽癌C666細(xì)胞

2、系、皮膚癌A431細(xì)胞系及白血病細(xì)胞CA46細(xì)胞系,通過(guò)透射電鏡圖片證實(shí)了通過(guò)電穿孔將銀納米粒子導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi),并檢測(cè)到信噪比很好的SERS信號(hào)。
　　 2.以電穿孔后的細(xì)胞存活率、細(xì)胞SERS信號(hào)、光譜強(qiáng)度積分值和SERS譜線重復(fù)性為指標(biāo),研究銀膠濃度對(duì)電穿孔獲取細(xì)胞內(nèi)SERS光譜的影響。
　　 3.在低銀膠濃度條件下,通過(guò)優(yōu)化電穿孔過(guò)程其他參數(shù)(電脈沖次數(shù)、脈沖持續(xù)時(shí)間、操作溫度及緩沖液中血清含量),在確保細(xì)胞活性的情況

3、下盡可能提高納米粒子導(dǎo)入效率從而獲取高質(zhì)量SERS光譜。
　　 4.針對(duì)難以采用常規(guī)孵育培養(yǎng)方法實(shí)施SERS檢測(cè)的懸浮細(xì)胞開展研究,提高了細(xì)胞SERS光譜重復(fù)性,并通過(guò)電穿孔獲取高質(zhì)量的細(xì)胞內(nèi)SERS譜線。
　　 研究表明,電穿孔-SERS方法具有簡(jiǎn)單、快速、易行等優(yōu)點(diǎn),利用電穿孔技術(shù)將細(xì)胞SERS測(cè)量前的樣品準(zhǔn)備時(shí)間由傳統(tǒng)孵育培養(yǎng)方法所需的24h(甚至更長(zhǎng))縮減為1min內(nèi),在保證細(xì)胞存活率的條件下大大提高細(xì)胞樣品準(zhǔn)備