基于電穿孔技術的活細胞表面增強拉曼光譜研究.pdf

1、本文概述了表面增強拉曼散射(SERS)在細胞生化研究中的應用,針對現(xiàn)有孵育培養(yǎng)方法將SELLS探針導入活細胞內存在的樣品準備時間長、無法實時檢測、不適用于懸浮細胞等不足,提出電穿孔-SERS方法,即利用電穿孔技術將金、銀納米粒子等SERS探針在1min內快速導入活細胞內作為SERS增強基底,進而通過細胞SERS光譜及SERS成像對細胞生化進行研究。主要研究工作如下:
　　 1.利用電穿孔技術將銀納米粒子快速導入鼻咽癌C666細胞

2、系、皮膚癌A431細胞系及白血病細胞CA46細胞系,通過透射電鏡圖片證實了通過電穿孔將銀納米粒子導入細胞內,并檢測到信噪比很好的SERS信號。
　　 2.以電穿孔后的細胞存活率、細胞SERS信號、光譜強度積分值和SERS譜線重復性為指標,研究銀膠濃度對電穿孔獲取細胞內SERS光譜的影響。
　　 3.在低銀膠濃度條件下,通過優(yōu)化電穿孔過程其他參數(shù)(電脈沖次數(shù)、脈沖持續(xù)時間、操作溫度及緩沖液中血清含量),在確保細胞活性的情況

3、下盡可能提高納米粒子導入效率從而獲取高質量SERS光譜。
　　 4.針對難以采用常規(guī)孵育培養(yǎng)方法實施SERS檢測的懸浮細胞開展研究,提高了細胞SERS光譜重復性,并通過電穿孔獲取高質量的細胞內SERS譜線。
　　 研究表明,電穿孔-SERS方法具有簡單、快速、易行等優(yōu)點,利用電穿孔技術將細胞SERS測量前的樣品準備時間由傳統(tǒng)孵育培養(yǎng)方法所需的24h(甚至更長)縮減為1min內,在保證細胞存活率的條件下大大提高細胞樣品準備