脫氮菌群的分離培養(yǎng)及其性能和熒光標記研究.pdf

1、氮素是導致水體和大氣污染的一類重要污染物，可引起多種危害。生物脫氮是目前脫氮污染處理中最常用、最經濟有效和最有發(fā)展前途的方法。本文主要進行了脫氮相關細菌的分離培養(yǎng)、性能和熒光標記研究，為進一步進行脫氮菌群的構效研究打下了基礎。 首先，從廢水處理廠獲取污泥樣品，進行硝化細菌的富集，采用硝化細菌分離培養(yǎng)基分離篩選。通過極限稀釋法及平板劃線分離法獲得了10株具硝化能力的細菌，通過比較選出8[＃]為最佳菌株，通過對該優(yōu)勢硝化細菌進行菌體

2、形態(tài)觀察和生理生化特性的考察，初步鑒定其為硝化桿菌屬的維氏硝化桿菌(Nitrobacterwinogradskyi)。通過單因素實驗考察了培養(yǎng)基組分(包括氮源、碳源、微量元素)以及培養(yǎng)條件(包括溶氧、pH、溫度)對維氏硝化桿菌的生長和硝化能力的影響，確定了Nitrobacterwinogradskyi的最佳脫氮條件。在原始硝化分離培養(yǎng)基基礎上添加0.1％醋酸鈉，40mg/LCu2+作為最佳培養(yǎng)基配方，該菌的最佳培養(yǎng)條件為：pH8.0-8

3、.5，溫度28-30℃，250ml搖瓶裝液量為50ml，搖床轉速為180r/min。通過上述培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基的優(yōu)化，該菌的硝化能力從70％左右提高到95％左右。 為了研究同步硝化反硝化脫氮工藝需要，同時從該污泥樣品細菌中分離獲得了好氧和厭氧兩類反硝化細菌。對厭氧反硝化菌做了初步鑒定，并直接用于生物轉鼓的掛膜和NO的反硝化，結果NO去除率達94％。同時考察了好氧反硝化細菌的反硝化能力，硝酸鹽去除率也達到了63.32％。 脫

4、氮菌群構效研究的關鍵之一是其中某一特定菌種的專一可檢測標記，如熒光蛋白的標記。為此，同時采用氯化鈣法、改良氯化鈣法1、改良氯化鈣法2和電穿孔法對Nitrobacterwinogradskyi進行pEGFP質粒轉化標記，采用瓊脂糖凝膠電泳、SDS-PAGE等手段對轉化效果和轉化子進行了鑒定，表明GFP在維氏硝化桿菌中成功表達，最終獲得了維氏硝化桿菌的綠色熒光蛋白(GFP)轉化子。同時考察了不同氨芐濃度對GFP轉化子生長的影響。 脫