大鯢遺傳多樣性及皮膚附屬物特性研究.pdf

1、大鯢作為中國特有瀕臨滅絕的二級保護動物,國家已經(jīng)建立16個專業(yè)大鯢保護區(qū)及一些自然保護區(qū)(大鯢列為保護名錄),對大鯢的適生環(huán)境和人工繁殖技術開展研究,逐步建立起大鯢人工繁育體系,有效地保護該物種。
　　目前大鯢保護存在一些不足:(1)大鯢種質(zhì)資源混亂,近親繁殖,導致大鯢種質(zhì)的退化,不利于物種的長期生存,有必要對人工養(yǎng)殖大鯢的親本進行遺傳多樣性及親緣關系分析,辨別其混亂的親本,提供合理的保護策略。(2)缺乏可持續(xù)保護方法,大鯢皮膚附

2、屬物分泌物和蛻皮是大鯢自然生理特征,可以多次產(chǎn)生,屬于可以利用的可再生物質(zhì),對這部分加以研究,利用好這部分物質(zhì),更適合大鯢資源的長遠保護。本課題以大鯢皮膚附屬物分泌物和蛻皮為研究對象,建立了非傷害取樣技術提取基因組DNA,篩選SSR標記位點,分析了大鯢親本的遺傳多樣性和親緣關系,為制定大鯢長遠保護策略提供依據(jù)。對其組成及理化性質(zhì)進行分析,并結合動物模型評價其具體功效,為充分合理利用大鯢皮膚附屬物提供支持:
　　(1)大鯢親本的遺傳

3、多樣性分析:建立了非損傷大鯢樣本組織替代技術,從大鯢分泌物和蛻皮中提取大鯢基因組DNA。通過擴增線粒體12S序列證實該方法獲得的DNA可以用于遺傳結構分析。從這種組織樣本獲得的基因組DNA擴增出34個微衛(wèi)星序列,其中10個微衛(wèi)星序列具有良好的多態(tài)性,用于大鯢資源遺傳多樣性分析。張家界大鯢核心保護區(qū)人工養(yǎng)殖大鯢親本具有豐富的遺傳多樣性,聚類分析屬于4個種群。
　　(2)分泌物的理化性質(zhì)及活性分析:為高度含水的凝膠樣物質(zhì),主要成分為蛋

4、白質(zhì)。僅溶于5％(V/V)醋酸溶液和蛋白酶溶液,具有很強的粘性,其平均分子量為3.61×106。分泌物可溶組分含有蛋白水解酶活性和磷脂酶A2活性。沒有明顯抗菌活性,僅在早期有微弱抑制微生物生長的活性。具有抗氧化特性,對DPPH和ABTS清除效果顯著,在0.6mg/ml其清除活性達到了90.83%和93.12%,熱變性制備的多肽在0.05mg/ml對ABTS的清除活性達到了70.90%。
　　(3)大鯢分泌物的毒性及抗腫瘤活性:大鯢

5、皮膚分泌物可溶組分對小鼠有致死活性,LD50(腹腔)值為32.95mg/kg,其活性組分為熱不穩(wěn)定蛋白質(zhì)。解剖死亡個體發(fā)現(xiàn)肺部組織發(fā)生明顯變化,有充血現(xiàn)象,抽搐可能會導致小鼠死亡。大鯢分泌物對小鼠產(chǎn)生一些局部影響,可誘導小鼠顯著的疼痛活動,促進血管通透性增加,導致持續(xù)性腫脹,沒有引起明顯的出血活性,可使肌肉組織腫脹壞死。體內(nèi)抑制腹水瘤細胞的生長,減少腹水瘤細胞的數(shù)量,延長存活期,分泌物水溶物能明顯改善小鼠血液指標,對肝臟結構沒有帶來明顯