簡介：第三軍醫(yī)大學碩士學位論文人肝素酶RNA干擾對HEPG2肝癌細胞生物學行為的影響姓名熊震申請學位級別碩士專業(yè)內(nèi)科學（消化系?。┲笇Ы處煑钍嗣?0071101第三軍醫(yī)大學碩士學位論文列，經(jīng)BLAST設計一組無關序列為陰性對照序列；設計包含干擾序列及無關序列的DSDNA并進行生物合成；雙酶切PGENESIL1質(zhì)粒；將合成的DSDNA克隆至酶切質(zhì)粒；測序鑒定后進行質(zhì)粒抽提及純化。2培養(yǎng)HEPG2細胞，采用脂質(zhì)體法將各重組干擾質(zhì)粒穩(wěn)定轉染至HEPG2細胞；G418抗性篩選3周；從各組細胞中挑取單克隆擴大培養(yǎng)。3采用REALTIMERTPCR和WESTEMBLOT分別檢測干擾及未干擾的HEPG2細胞肝素酶的表達，篩選有效的干擾序列。4采用不同的實驗技術檢測肝素酶RNA干擾后HEPG2細胞增殖能力、細胞周期、克隆形成能力、侵襲能力及體內(nèi)成瘤能力的變化。實驗結果1通過WWWGENSCRIPTCOM網(wǎng)站的0NLINET001S找到三條肝素酶干擾序列，分別為NO1121412325’一GGETATCTCTTCTGTTCAA一3’，NO216718557TCCTGTCCGTCACCATTGA3’，NO36116295’一CTCAGTTGCTCCTGGACTA3’，及陰性對照序列5’一ACTACCGTTGTATAGGTGT一37；并成功將包含各干擾序列及陰性對照序列的DSDNA克隆至質(zhì)粒PGENESIL1，經(jīng)測序鑒定后，證實所連入的序列與設計序列一致，分別命名為PGENESIL一1／HPA／SIRNA一1、PGENESIL1／HPA／SIRNA一2、PGENESILL／HPA／SIRNA一3、PGENESIL1／HP“SIRNAN。2采用脂質(zhì)體法將上述各組干擾質(zhì)粒成功轉染至HEPG2肝癌細胞當中，經(jīng)G418抗性篩選后，得到陽性克?。粩U大培養(yǎng)后各細胞株分別命名為HEPG2／RNAI／11、HEPG2／RNAI／22、HEPG2／RNAI／3一L、HEPG2／RNAI／33、HEPG2／RNAI／N。3REALTIMERTPCR結果表明，干擾組HEPG2瓜NAI／11、HEPG2依NAI／22及HEPG2瓜NAI／33中HPA在MRNA表達水平明顯下調(diào)，而HEPG2瓜NAI／3一L中的HPA表達與陰性對照組和HEPG2組無差別；WESTERNBLOT檢測結果表明HEPG2瓜NAI／11與HEPG2瓜NAI／33兩組中HPA蛋白表達水平較HEPG2組和HEPG2瓜NAI／N組顯著下調(diào)，抑制效率分別達到57％、71％。4采用WESTEMBLOT檢測不同代數(shù)干擾細胞肝素酶的表達，結果表明，在10代以前，HPA／SIRNA1和HP眺IRNA3可以有效抑制HEPG2肝癌細胞肝素酶蛋白的表達。5MTT實驗表明HEPG2瓜NAI／11與HEPG2／RNAI／33組細胞增殖能力明顯低于HEPG2組和HEPG狐NA淵組；平皿克隆形成實驗表明HEPG2瓜NAI／11與HEPG2／ITNAI／33組單個細胞形成克隆的能力與HEPG2組和HEPG2瓜NAI／N組相比顯著降低344，265VJ1387，12322，PO05；流式細胞生長周期實驗表明，與HEPG2和R

簡介：目的通過光鏡電鏡觀察豬心竇房結組織形態(tài)學特點，原代培養(yǎng)成熟豬竇房結起搏細胞并進行生物學特性檢測和自體移植。方法電生理標測等方法初步確定豬竇房結位置，取材后連續(xù)切片，HE染色，觀測豬心竇房結形態(tài)和組織結構，準確定位豬竇房結后用電鏡觀察其超微結構。取成熟豬竇房結組織進行原代細胞培養(yǎng)，對培養(yǎng)細胞行形態(tài)學觀察，并用膜片鉗記錄細胞的電生理特性。將培養(yǎng)細胞進行自體移植并建立房室傳導阻滯動物模型以明確培養(yǎng)細胞的功能。結果豬心臟竇房結位于上腔靜脈和右心房交界處的界溝上端，P細胞、T細胞等都有其特有的形態(tài)和分布。根據(jù)培養(yǎng)細胞形態(tài)結構觀察與電生理檢測，長梭形細胞符合竇房結起搏細胞的特點。進行細胞移植后建立的房室傳導阻滯動物模型可證實竇房結起搏細胞有一定的作用。結論豬心臟竇房結有著不同于其他心肌組織的形態(tài)和結構，其細胞組成和功能與竇房結本身功能相一致。成熟豬竇房結起搏細胞的分離和培養(yǎng)需要一套全新可靠的細胞培養(yǎng)技術。培養(yǎng)竇房結細胞中的長梭形細胞即為竇房結的起搏細胞。原代培養(yǎng)細胞進行自體移植后能發(fā)揮一定的作用。

簡介：分類號UDC博士學位論文密級MIR4905P在膀胱癌中表達的臨床意義及對膀胱癌細胞生物學特性影響的實驗研究CLINICALSIGNIFICANCEANDEXPERIMENTALRESEARCHOFMIR4905一ANDITSINFLUENCEONTHECELLULARBIOLOGICALCHARACTERISTICSINBLADDERCANCER作者姓名藍恭斌學科專業(yè)臨床醫(yī)學外科學1學院系、所湘雅二醫(yī)院指導教師楊羅艷教授論文答辯日期三三鄉(xiāng)僦黜，趕中南大學O一二年五月原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中南大學或其他單位的學位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻均已在論文中作了明確的說明。作者簽名II塹日期≯三一年二一月日學位論文版權使用授權書本人了解中南大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即學校有權保留學位論文并根據(jù)國家或湖南省有關部門規(guī)定送交學位論文，允許學位論文被查閱和借閱；學校可以公布學位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復印、縮FP或其它手段保存學位論文。同時授權中國科學技術信息研究所將本學位論文收錄到中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫，并通過網(wǎng)絡向社會公眾提供信息服務。作者簽名越銣黧象絲由野導師簽名日期，W2年’月乃7口

簡介：目的該研究采用建立糖尿病大鼠二度燙傷模型和建立不同濃度的高葡萄糖體外培養(yǎng)體系研究高糖對血管內(nèi)皮細胞的生物學行為影響及其變化規(guī)律探討糖尿病創(chuàng)面愈合中新生血管形成延遲或者障礙的機制以期豐富創(chuàng)面愈合理論結論1成功建立糖尿病合并燙傷創(chuàng)面難愈動物模型該模型可用于研究糖尿病狀態(tài)下難愈創(chuàng)面發(fā)生機制2糖尿病大鼠局部創(chuàng)面組織糖含量增加與血管變化密切相關而創(chuàng)面局部糖含量的增加與創(chuàng)面愈合延遲存在著不可分割的聯(lián)系3作為內(nèi)皮細胞專一的有絲分裂刺激因子和趨化因子的VEGF和FGF2在糖尿病大鼠燙傷模型創(chuàng)面表達并不低于正常大鼠燙傷模型而微血管密度顯著低于正常組存在著促血管化生長因子高表達與血管內(nèi)皮細胞低反應性的分離現(xiàn)象4高糖環(huán)境所致體外血管內(nèi)皮細胞增殖受抑、內(nèi)皮細胞間接觸減弱、表達生長因子水平的降低和凋亡增加可能是糖尿病患者創(chuàng)面新生血管形成延遲和創(chuàng)面難愈的機制之一

簡介：Y961738孝卞斜技大茅博士學位論文膽管癌表遺傳學研究去甲基化修飾對RASSFLA基因的表達調(diào)控及對人膽管癌細胞的生物學效應申請人姓名指導教師學科專業(yè)研究方向論文起止時間左石。鄒聲泉教授外科學普外專業(yè)膽道腫瘤表遺傳學2004年3月至2006年3月華中科技大學同濟醫(yī)學院研究生部OO六年三月華中科技大學同濟醫(yī)學院博士學位論文MTTORFPBSPCRPOGRNASEMETHYLTHAZOYTERAZOLIUM四甲基偶氮唑鹽OPENREADINGFRAME開放閱讀框PHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸鹽緩沖液POLYMERASECHMNREACTION聚合酶鏈反應PROTOONCOGENE原癌基因RIBONUCLEASE核糖核酸酶RTPCRREVERSETRANSCRIPTIONPCR逆轉錄PCRTUMORSUPPRESSORGENE腫瘤抑制基因5一AZACDR5AZA2一DEOXYCYTIDINE5氮2一脫氧胞苷

簡介：浙江大學博士學位論文慢性粒細胞性白血病患者骨髓源腫瘤干細胞生物學特性的研究姓名宋永平申請學位級別博士專業(yè)腫瘤學指導教師鄭樹20050201浙江大學博士研究生學位論文MSCSMESENCHYMALSTEMCELLS間充質(zhì)干細胞NOD／SCIDODPBSPAGEPCRP喀PSPNONOBESEDIABETIC／SEVERECOMBINED非肥胖型耱尿病及嚴重聯(lián)合免疫缺IMMUNODEFICIENTOPTICALDENSITY陷小鼠光密度PHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸鹽緩沖液POLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESIS聚丙烯酰胺凝膠電泳POLYMERASECHAINREACTION聚合酶鏈反應PGLYCOPROTEINSIDEPOPULATIONP一糖蛋白邊緣細胞群

簡介：點擊查看更多大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞PKH26標記后生物學性狀及其向血管內(nèi)皮細胞分化研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：蘇州大學碩士學位論文1、2型星型膠質(zhì)細胞的分離純化培養(yǎng)及其生物學特性研究姓名朱猛申請學位級別碩士專業(yè)人體解剖學指導教師夏春林2001412型星形膠質(zhì)細胞的分離純化培養(yǎng)及其生物學特性研究中英文摘要結果1采用振蕩培養(yǎng)法可分離’IA和。一2A祖細胞，獲得較純的T1A；2差速貼壁法進一步純化02A祖細胞，A285抗體標記附陛；3O2A祖細胞在1020％高濃度血清誘導下分化為T2A；4T1A和T2A彤態(tài)學存在差異；5T1A表達B～APP，T2A不表達DAF6RL、IA條件培養(yǎng)液作用組和’F2A條件培養(yǎng)液作用組PCL2細抱突起生長明顯，0D值分別由0278提高到0512PO001和0566PO001，而對照組PCI2細胞則突起生長不明結論1采用振蕩培養(yǎng)法，結合差速貼壁法，建立了適合本實驗室條件的分離純化T1A，T2A的方法。2T1A，T2A形態(tài)學上存在舞異。31、1A表達PAPP，T2A不表達BAPP，提示了T1A可能與AD發(fā)生發(fā)展過程中13AP的沉積密切相關。4TLA，T2A條件培養(yǎng)液對PCL2細胞有刺激生長作用，說明T1A，’R2A對中樞神經(jīng)再生具有積極的促進作用。5O2A祖細胞及T1A、T2A的研究對神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病的治療可能具有重要的應用價值。關鍵詞星形細胞、細胞譜系、細胞培養(yǎng)、13一淀粉樣蛋白前體、PCI2細胞礦

簡介：第一部分骨橋蛋白在母胎界面的表達及與UNK細胞選擇性聚集關系的研究目的研究骨橋蛋白OSTEOPONTIN，OPN在人正常妊娠早期和不明原因的反復自然流產(chǎn)UNEXPLMNEDRECURRENTSPONTANEOUSABTION，URSA患者母胎界面組織中的表達及蛻膜組織中CD56NK細胞的聚集情況；分析蛻膜組織中OPN的表達與CD56NK細胞募集之間的相關性；并觀察人妊娠早期蛻膜基質(zhì)細胞中OPN的表達及孕酮對其表達的調(diào)節(jié)作用；探討OPN表達在URSA發(fā)病中可能的作用。方法1選擇2005年1月2006年10月來齊魯醫(yī)院計劃生育科就診的妊娠410周的正常妊娠人工流產(chǎn)婦女及不明原因的反復自然流產(chǎn)患者各45例，分別按妊娠周數(shù)分為3組組14567W組26767W；組3810W；N15每組，無菌條件下分離其絨毛及蛻膜組織。2RTPCR、免疫組織化學法檢測不同孕周正常妊娠早期和不明原因反復自然流產(chǎn)患者蛻膜及絨毛組織中OPN的表達情況。3免疫組織化學法檢測不同孕周正常妊娠早期和不明原因反復自然流產(chǎn)患者蛻膜組織中CD56NK細胞的動態(tài)變化情況。4SPEARMAN等級相關法分析蛻膜組織中OPN表達與CD56NK細胞募集之間的相關性。5選擇正常妊娠410周行人工流產(chǎn)術的婦女5例，無菌收集蛻膜組織，采用酶消化法對新鮮蛻膜基質(zhì)細胞進行分離及培養(yǎng)，倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)，免疫組化檢測波形蛋白的表達。6傳代后的細胞分別接種在放有蓋玻片的6孔培養(yǎng)板和培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，對傳代后的蛻膜基質(zhì)細胞進行分組，用5107MOLL的黃體酮作用48、72、96小時，采用RTPCR和免疫組織化學法檢測黃體酮對蛻膜基質(zhì)細胞中OPN表達的影響。結果1RTPCR結果顯示正常妊娠早期和不明原因反復自然流產(chǎn)患者的蛻膜及絨毛組織中都能檢測到OPN的表達但是OPN在URSA患者蛻膜及絨毛組織中的表達水平顯著低于正常妊娠組P＜005；在正常妊娠早期隨著孕周的增加，OPN在蛻膜及絨毛組織中的表達呈升高趨勢P＜005。2免疫組化染色結果顯示在蛻膜及絨毛組織中，OPN主要表達于細胞胞漿內(nèi)胞核周圍，陽性細胞呈局灶或彌漫性分布；在子宮蛻膜組織中的上皮細胞、蛻膜基質(zhì)細胞都有表達，尤以蛻膜基質(zhì)細胞OPN蛋白表達最強；在絨毛組織的細胞滋養(yǎng)層細胞中呈強表達、合體滋養(yǎng)細胞層弱表達或不表達；但是在URSA患者蛻膜及絨毛組織中OPN蛋白的表達均低于正常妊娠組P＜005。3蛻膜組織中CD56NK細胞的免疫組化染色結果顯示CD56NK細胞局灶性或彌漫性的分布在蛻膜基質(zhì)細胞中間；與相同孕周的正常妊娠組相比，CD56NK細胞在URSA組患者蛻膜組織中的表達明顯減弱P＜005；正常早孕期間，隨著妊娠周數(shù)的增加，CD56NK細胞的數(shù)量呈增加趨勢P＜005。4SPEARMAN等級相關分析結果顯示蛻膜組織中OPN的表達與CD56NK細胞的聚集呈正相關RS087，P＜005。5消化后的蛻膜基質(zhì)細胞在接種過夜后大部分已貼壁；貼壁生長的細胞為纖維母細胞狀，呈較細長的梭形或不規(guī)則的星形，核呈卵圓形，一般培養(yǎng)57天后細胞融合成單層。波形蛋白免疫組化結果顯示體外培養(yǎng)傳代后的細胞95％以上為蛻膜基質(zhì)細胞。65107MOLL的黃體酮對蛻膜基質(zhì)細胞中OPN表達的刺激作用存在作用時間依賴性，藥物作用時間越長，OPN表達越強；對照組基質(zhì)細胞中OPN的表達不隨作用時間延長而增強。結論1OPN與正常妊娠維持中的胚胎植入、胎盤形成有關，人妊娠早期母胎界面OPN的表達異常與URSA的發(fā)生有關。2蛻膜組織中OPN的表達對組織中CD56NK細胞的募集起調(diào)控作用，與正常妊娠的維持密切相關。3黃體酮調(diào)控蛻膜基質(zhì)細胞中OPN的表達，提示孕激素參與妊娠早期母胎界面OPN表達的調(diào)控及UNK細胞的聚集。第二部分B細胞刺激因子在母胎界面的表達及其生物學意義研究目的研究B細胞刺激因子BCELLACTIVATINGFACTOFTNFFAMILYBAFF在正常早孕人工流產(chǎn)婦女和不明原因的反復自然流產(chǎn)UNEXPLAINEDRECURRENTSPONTANEOUSABTION，URSA患者母胎界面組織中的表達，探討B(tài)AFF在URSA發(fā)病中的生物學意義。方法1選擇2005年1月2006年10月來齊魯醫(yī)院計劃生育科就診的妊娠410周的正常早孕人工流產(chǎn)婦女及不明原因的反復自然流產(chǎn)患者各45例，分別按妊娠周數(shù)分為3組組14567W；組26767W；組3810W；N15每組，無菌條件下分離其絨毛及蛻膜組織。2分別提取不同孕周正常妊娠早期和不明原因的反復自然流產(chǎn)患者蛻膜及絨毛組織中的總RNA和蛋白，采用RTPCR和WESTERNBLOTTING技術分別從MRNA水平和蛋白水平檢測絨毛組織及蛻膜組織中BAFF及BAFF受體BAFFR的表達。3將獲取的新鮮絨毛和蛻膜組織用10％福爾馬林固定，石蠟包埋，免疫組織化學染色的方法檢測BAFF蛋白在早孕人工流產(chǎn)婦女及不明原因的反復自然流產(chǎn)患者絨毛及蛻膜組織中的表達分布。結果1RTPCR和WESTERNBLOTTING結果顯示正常早孕人工流產(chǎn)婦女及不明原因的反復自然流產(chǎn)患者的蛻膜及絨毛組織中都有BAFF的表達；但是在相同孕周的情況下，BAFF在URSA患者蛻膜及絨毛組織中的表達水平均弱于正常妊娠組P＜005。2在正常早孕人工流產(chǎn)婦女及不明原因的反復自然流產(chǎn)患者的標本中皆未檢測到BAFFR的表達。3免疫組化染色結果顯示BAFF蛋白在全部標本絨毛組織中的細胞滋養(yǎng)層細胞和合體滋養(yǎng)細胞層均表達；但在URSA患者絨毛組織中的表達弱于正常妊娠組。BAFF蛋白在正常早孕人工流產(chǎn)婦女蛻膜組織的基質(zhì)細胞、血管內(nèi)皮細胞中表達，在URSA患者蛻膜組織中基質(zhì)細胞中亦有表達，但表達水平明顯低于正常早孕人工流產(chǎn)婦女，在血管內(nèi)皮細胞中則未見其表達。結論BAFF作為一種非凋亡誘導的、胎盤起源的TNF超家族細胞因子，在胚泡植入和早期妊娠的維持中起重要作用，其表達水平的降低與URSA的發(fā)生有關。

簡介：第二軍醫(yī)大學碩士學位論文ATPASEF1Α在人類非小細胞肺癌中的表達及其生物學新功能的初步研究姓名朱海沫申請學位級別碩士專業(yè)腫瘤學指導教師樓國良20070501

簡介：目的觀察體外培養(yǎng)的ESC在壓力作用下的表型變化與增殖情況為臨床皮膚擴張器的應用提供理論依據(jù)。方法對體外培養(yǎng)的大鼠表皮干細胞進行間歇加壓4、8、12KPA每天4次每次2H共1周培養(yǎng)采用免疫組化染色、免疫熒光雙染、細胞克隆形成率等技術與方法檢測所培養(yǎng)細胞Β1整合素、角蛋白19K19、角蛋白14K14、角蛋白10K10、角蛋白5K5、Α6整合素、CD71的表達特征。結果8KPA、12KPA的壓應力作用1周后體外培養(yǎng)的表皮干細胞細胞克隆形成率分別為4867％、4936％明顯高于4KPA組2317％與對照組2300％8KPA、12KPA組可見K10陽性細胞表達。結論表皮干細胞具有壓應力敏感性適當?shù)膲簯烧T導表皮干細胞增殖與分化。

簡介：第三軍醫(yī)大學碩士學位論文CO人工氣腹對人子宮內(nèi)膜癌細胞生物學行為影響的實驗研究姓名徐春陽申請學位級別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科指導教師梁志清20030501第三車醫(yī)人學順F。牛業(yè)論文J，I占比例分級。結果171。腹組裸鼠體重下降顯著高于人氣腹組，分別為242士2309和030士L72G，』，O05。2人工氣腹組沿穿刺點腫痛轉移率顯著大于丌腹組，分別為8667％和3846％，PO05。3平均腹壁最大轉移腫瘤的直徑、重量在人工氣腹組顯著大于開腹組，分別為493士322MMJF口177士239MM、4229土2880RAGLH1922士2717RAG，，001平UPO05。4人工氣腹組臟器的平均播散得分值顯著高于玎腹組分別為980士562和33L士312，PO01，其QJ肝臟、腸管的腫瘤種植、播散得分顯著高于_丌腹組，分別為407士423和015士O55、540士292羊【I285士2，61，P001P005。5人工氣腹組的肝轉移發(fā)生率顯著高于丌腹紐6667％和1538％1，O01。肝膿腫、壞死的發(fā)生率丌腹組顯著高于人工氣腹組L6923％和20，00％，PO05。6PCNA和INOS蛋白在氣腹組比J【腹組TP的表達均晁著增高P001，P001。7氣腹組INOS蛋白陽性率顯著高于71‘腹組尸O05。8氣腹組的INOS蛋白表達與PCNA蛋白之間呈顯著JIFTL關關系RO665，PO05。9電鏡結果1氣腹組細胞核形不規(guī)則，有的呈雙核，細胞器豐富，出現(xiàn)微腺腔，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增多，高爾基器發(fā)達游離核糖體增多以及小線粒體。2丌腹組細胞核呈固縮，異染色質(zhì)邊集、成塊，細胞核膜不完整，部分出現(xiàn)核成碎片、初級／次級溶酶體或自噬溶酶體，細胞漿致密線粒體腫脹、空泡化。結論1與，瑚復組比較，C02人工氣腹FLIH于人了寓IZJ膜癌細胞裸鼠腹壁穿刺點轉移率商，轉移瘤體積大，腹腔內(nèi)臟器腫瘤種植、播散情況更，RZ重。2上述結果與PCNA和INOS蛋向過度表達有關。C02人工氣腹對人子宮內(nèi)膜癌細胞促增殖機制可能有INOS基因的激活，F(xiàn)參與了子宮內(nèi)膜癌細胞生物學特性變化過程。關鍵詞人工氣腹C02壓力JLI，瘤細胞增賄轉移播敞增殖細胞核抗原誘導型一氧化氮合酶免疫組化透射電鏡V

簡介：本文分為三部分研究了前列腺移行帶和外周帶生物學差異。第一部分前列腺移行帶和外周帶不同帶性細胞超微結構等形態(tài)差異的研究目的前列腺TZ和PZ基質(zhì)中最活躍成分基質(zhì)細胞超微結構等形態(tài)的差異。方法①正常前列腺標本收集尸供體，MCNEAL解剖定位分離前列腺TZ和PZ組織，應用HE染色和透射電鏡鑒定并觀察TZ和PZ組織形態(tài)和超微結構，剪切、Ⅰ型膠原酶消化后，梯度離心法原代培養(yǎng)PZ和TZ不同帶性基質(zhì)細胞和上皮細胞。②倒置顯微鏡、透射電鏡和免疫組化分別進行前列腺TZ和PZ基質(zhì)細胞形態(tài)和超微結構的鑒定和觀察。結果①前列腺TZ間質(zhì)組織致密整齊，而PZ組織較為疏松。TZ組織中腺上皮為假覆層，未見固縮現(xiàn)象，線粒體有腫脹出現(xiàn)。基質(zhì)平滑肌細胞分泌型較多，核幼稚，長圓型，核膜鋸齒少，肌絲量少。細胞器較多，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體和核糖體可見。成纖維細細胞長梭形，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較多。細胞外膠原成分多；PZ組織中腺上皮為假覆層，腺腔內(nèi)較多分泌顆粒，部分存在固縮的腺上皮，可見空泡變性，線粒體量多?；|(zhì)平滑肌細胞成熟型較多，核鈍園，核膜鋸齒樣，肌絲排列整齊，有密斑，細胞器少，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體可見。成纖維細胞細長形，核呈梭形且窄，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)少許。②TZ和PZ基質(zhì)細胞和上皮細胞分別原代培養(yǎng)成功。③原代培養(yǎng)TZ和PZ基質(zhì)細胞，細胞成長梭形。透射電鏡鑒定TZ和PZ基質(zhì)細胞為成纖維細胞，觀察TZ基質(zhì)成纖維細胞，胞漿內(nèi)富含較多高爾基復合體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，少量線粒體PZ基質(zhì)細胞比TZ細胞狹長，胞漿內(nèi)可見大量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，還有少量線粒體和高爾基復合體。不同帶基質(zhì)細胞的超微結構存在差異，提示TZ和PZ基質(zhì)細胞間存在合成代謝差異。結論前列腺TZ和PZ不同帶性基質(zhì)細胞存在超微結構等形態(tài)上差異，提示基質(zhì)細胞生長過程中分泌、合成代謝等功能具有差別；前列腺基質(zhì)細胞動態(tài)的肌性化改變與年齡相關；不同帶性基質(zhì)細胞超微結構等形態(tài)的差異，是前列腺TZ和PZ不同帶性生物學差異的表現(xiàn)之一，可能是前列腺疾病發(fā)生帶性差異的原因。第二部分前列腺移行帶和外周帶不同帶性基質(zhì)細胞對梯度雄激素和梯度轉化生長因子應答的研究。目的研究前列腺TZ和PZ不同帶性基質(zhì)細胞分別對梯度雄激素和梯度轉化生長因子Β應答的反應。方法①不同比例的前列腺PZ和TZ基質(zhì)細胞培養(yǎng)，培養(yǎng)2D、4D、6D、8D后MTT法檢測觀察不同帶性基質(zhì)細胞生長特性。②不同濃度雙氫睪酮DHT或轉化生長因子TGFΒ各自刺激TZ和PZ基質(zhì)細胞，MTT法檢測不同基質(zhì)細胞生長特性，應用流式細胞技術FCM測定不同基質(zhì)細胞凋亡率和細胞周期的變化，WESTERNBLOT檢測不同基質(zhì)細胞增殖PCNA和凋亡BCL2基因表達的變化。結果①對2D、4D、6D和8D不同基質(zhì)細胞生長曲線MTT檢測比較，PZ基質(zhì)細胞生長速度明顯快于TZ基質(zhì)細胞，TZ基質(zhì)細胞生長速度明顯快于TZ基質(zhì)細胞，與前列腺不同快速增長期相吻合。②不同DHT濃度梯度25～1000ΜM變化，隨著濃度的降低TZ基質(zhì)細胞呈較明顯生長增強趨勢，而PZ基質(zhì)細胞隨DHT濃度降低呈逐漸緩慢生長增高趨勢。不同帶基質(zhì)細胞生長對DHT的反應性存在差異。③不同TGFΒ濃度梯度10～80PM變化，隨著濃度的降低TZ基質(zhì)細胞呈緩慢生長，20PM后生長增強趨勢明顯，而PZ基質(zhì)細胞隨TGFΒ濃度降低呈明顯生長增高趨勢，20PM后生長呈減弱趨勢。不同帶基質(zhì)細胞生長對TGFΒ的反應性存在差異。④利用FCM檢測，隨著加入DHT濃度遞增10NM～1000NM，TZ基質(zhì)細胞凋亡率增高，PZ基質(zhì)細胞凋亡率則降低，兩組比較P和PZ基質(zhì)細胞存在凋亡率的差異。不同濃度組間凋亡率雖有增高和降低趨勢，但組間比較P005，差異沒有統(tǒng)計學意義。不同濃度DHT的變化，TZ和PZ基質(zhì)細胞的細胞周期各組間比較P005，差異沒有統(tǒng)計學意義。TZ和PZ兩組間比較P005，差異沒有統(tǒng)計學意義。結果顯示DHT不影響TZ和PZ基質(zhì)細胞的細胞周期。結論前列腺TZ和PZ不同帶性基質(zhì)細胞對梯度雄激素DHT和梯度TGFΒ均存在不同的應答反應，表現(xiàn)不同的生長特性、細胞凋亡率和凋亡抑制基因BCL2的差異表達，這種對雄激素DHT和TGFΒ的不同應答反應，顯現(xiàn)細胞凋亡率和凋亡基因表達的差異，可能是前列腺疾病發(fā)生不同帶性差異的分子基礎；前列腺TZ和PZ基質(zhì)細胞的生長、細胞凋亡和凋亡基因表達等變化具有DHT和TGFΒ相關性。第三部分前列腺移行帶和外周帶不同帶性基質(zhì)細胞基因表達差異及其對前列腺癌上皮細胞成瘤影響的實驗研究。目的高通量研究前列腺TZ和PZ不同帶性基質(zhì)細胞差異基因表達，以及TZ和PZ不同帶性基質(zhì)細胞對前列腺癌上皮細胞成瘤的影響。方法①利用SBCHUMANCDNA基因芯片技術篩選前列腺TZ和PZ基質(zhì)細胞基因表達的差異，并進行相關功能分類及差異基因顯著性分析。②利用3ΜMPET膜細胞插片，TZ和PZ不同帶性基質(zhì)細胞一前列腺癌上皮細胞雙層共培養(yǎng)細胞模型建立，倒置顯微鏡下細胞形態(tài)觀察，DHT或TGFΒ刺激后，WESTERNBLOT檢測不同組前列腺癌上皮細胞增殖PCNA和凋亡BCL2基因表達的變化。結果①通過基因芯片分析比較TZ和PZ基質(zhì)細胞，差異基因篩選上調(diào)基因1387個，下調(diào)基因1319個，進一步GOANALYSIS分析對差異基因予以最顯著、最集中的基因功能歸類，上調(diào)功能歸類38類，下調(diào)有28類；DIFPATH分析TZ和PZ差異基因PATHWAY最具有顯著性功能上調(diào)15個，下調(diào)2個P、PZ和TZ基質(zhì)細胞，予一定濃度DHT、TGFΒ刺激后，WESTERNBLOT測定PC3細胞BCL2表達，TGFΒ組DHT組未加干預組，TZ組PZ組TZ組。任何共培養(yǎng)模型組PC3細胞BCL2表達均弱于單培養(yǎng)PC3。各共培養(yǎng)組PC3細胞PCNA表達無明顯差別。③不同帶性基質(zhì)細胞前列腺癌上皮共培養(yǎng)荷瘤鼠模型成功建立，30D后觀察PC3組、PC3PZ、PC3PZTGFΒ、PC3TZ、PC3TZTGFΒ荷瘤鼠，存在大小不等腫瘤結節(jié)，形狀不規(guī)則，表面不光滑，質(zhì)韌硬不均，較固定。裸鼠瘦弱，精神狀態(tài)、飲食差。PC3PZ和PC3PZTGFΒ兩組瘤重比較P基質(zhì)細胞在TGFΒ作用后對PC3細胞成瘤具有一定影響，PZ和TZ基質(zhì)細胞對TGFΒ作用的反應性不同。PC3、PC3PZTGFΒ、PC3TZTGFΒ組瘤重兩兩比較P均和TZ細胞在TGFΒ作用后對PC3細胞成瘤存在差異，說明PZ和TZ基質(zhì)細胞間存在生物學特性和功能的差異，且TGFΒ作用共培養(yǎng)細胞對PC3細胞的成瘤具有重要影響。PC3、PC3PZ、PC3TZ組瘤重兩兩比較P均005，差異沒有統(tǒng)計學意義。結論前列腺TZ和PZ不同帶性基質(zhì)細胞間存在不同功能基因的差異表達，并具有不同功能分類，不同組別基質(zhì)細胞前列腺癌上皮細胞共培養(yǎng)PC3細胞凋亡抑制基因BCL2表達的差異，以及不同帶性基質(zhì)細胞對前列腺癌上皮細胞成瘤具有差異，更加證明前列腺TZ和PZ基質(zhì)細胞間存在差異基因的表達，導致TZ和PZ基質(zhì)細胞具有不同的功能特性；TGFΒ作用TZ和PZ基質(zhì)細胞后引起各帶細胞不同的效應，出現(xiàn)基質(zhì)細胞形態(tài)和功能的變化，特別是肌性轉化，是前列腺癌“活性基質(zhì)”的細胞表現(xiàn)，TGFΒ在前列腺癌發(fā)生過程中具有重要作用。同時共培養(yǎng)前列腺癌上皮細胞成瘤的差異，進一步提示TZ和PZ基質(zhì)細胞具有不同生物學功能。基質(zhì)細胞生物學特性的差異必然導致TZ和PZ不同帶性基質(zhì)微環(huán)境的差異，從而引起不同帶上皮生物學特性的不同變化，最終導致前列腺TZ和PZ疾病發(fā)生。前列腺TZ和PZ基質(zhì)細胞特性和功能的差異可能是前列腺癌和良性前列腺增生的發(fā)生存在帶性差異的重要原因。

簡介：背景心房顫動（簡稱房顫）是一類臨床常見的心律失常性疾病，影響了至少420萬中國人的健康。由于人口老齡化及醫(yī)療水平的提高，房顫的患病率在未來的20年預期會增加一倍。房顫帶來的巨大醫(yī)療財政負擔、增高的人群死亡率以及以腦卒中、心力衰竭為主的致死性臨床事件要求我們進一步完善對其發(fā)病機制的認識。然而房顫模型建立所需的設備和技術要求使得相關研究的廣泛開展受到限制，因而我們對房顫病理過程中相關分子生物學機制的認識相對滯后。既往的臨床研究表明房顫患者心房肌出現(xiàn)加劇的細胞凋亡和組織纖維化，且其嚴重程度和房顫的發(fā)展、轉歸成正相關，提示細胞凋亡和纖維化是房顫藥物治療的潛在靶點，與抗心律失常藥物聯(lián)用可以增強療效、減輕毒副作用。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激ENDOPLASMICRETICULUMSTRESS，ERSTRESS是一種進化保守的細胞適應性反應。在炎癥、缺氧等不良環(huán)境下，ERSTRESS可以通過啟動未折疊蛋白反應UNFOLDEDPROTEINRESPONSE，UPR促進細胞生存當刺激因子持續(xù)存在，ERSTRESS過度激活，ERSTRESS相關的凋亡通路將會啟動以清除功能受損的細胞，同時造成組織損傷。ERSTRESS凋亡通路涉及的調(diào)控因子眾多，如鈣離子、蛋白酶、激酶、轉錄因子、自噬等，它們彼此間的調(diào)控關系被充分認識的卻很少。尤其是針對房顫病程中ERSTRESS對細胞凋亡的生物學作用及具體機制的研究還鮮有報道。除了對蛋白質(zhì)轉錄翻譯及細胞凋亡的調(diào)控外，近年來科研人員還發(fā)現(xiàn)ERSTRESS似與膠原沉積、纖維化形成也有著一定關聯(lián)。BAEKHA報道轉化生長因子Β2TRANSFMINGGROWTHFACTBETA2，TGFΒ2可以誘導ERSTRESS發(fā)生，同時伴成纖維細胞Α平滑肌肌動蛋白表達增多，預示著成纖維細胞向肌成纖維細胞的表型轉換。而在同時給予ERSTRESS抑制劑4PBA后，TGFΒ2對成纖維細胞表型轉換的誘導作用被抑制。其中成纖維細胞向肌成纖維細胞的演變是組織纖維化形成的早期改變。綜上所述，ERSTRESS很可能是房顫患者心房肌細胞凋亡和心房組織纖維化的重要調(diào)控因子，是延緩心房器質(zhì)性病變的潛在靶點，然而其具體的生物學作用及相關調(diào)控機制，還需要我們進一步深入研究。目的⑴高頻電刺激小鼠心房來源的HL1細胞系建立房顫的體外模型，驗證其是否具有與房顫患者心房肌一致的電學和結構重構，為房顫的研究提供確實可靠的研究載體。⑵驗證高頻電刺激后HL細胞是否發(fā)生細胞凋亡和膠原代謝異常。⑶探索ERSTRESS對高頻電刺激后HL1細胞凋亡及膠原代謝的生物學作用及調(diào)控機制，以期從分子生物學角度完善對房顫病理生理機制的認識。方法①將5MS脈寬，10VCM電壓，且同時選擇4HZ與8HZ兩種頻率的高頻電刺激作用于HL1細胞24H。以膜片鉗技術檢測對照組、4HZ組及8HZ組的動作電位時程，調(diào)定后續(xù)的刺激頻率參數(shù)。②利用膜片鉗、透射電鏡、激光共聚焦顯微鏡及WESTERNBLOT分別檢測HL1細胞動作電位時程ACTIONPOTENTIALDURATION，APD、形態(tài)學、細胞內(nèi)游離鈣、離子通道和膠原等的蛋白表達，驗證其是否具有與房顫時心房肌一致的電學和組織學改變。③HL1細胞接受不同的藥物預處理，包括ERSTRESS的抑制劑、線粒體凋亡通路MITOCHONDRIAAPOPTOTICPATHWAY，MAP的抑制劑和絲裂原活化的蛋白激酶家族MITOGENACTIVATEDPROTEINKINASES，MAPKS的抑制劑。利用CELLCOUNTINGKIT、HOECHST和ANNEXINⅤPI染色、JC1染色和WESTERNBLOT分別檢測細胞活力、細胞凋亡、線粒體膜電位和信號通路蛋白表達，以探索ERSTRESS、MAP和MAPKS在高頻電刺激所致細胞凋亡中的生物學作用及三者間的交互調(diào)控機制。④HL1細胞接受不同的藥物預處理，包括ERSTRESS的抑制劑或激動劑及鈣蛋白酶CALPAIN抑制劑，利用WESTERNBLOT檢測信號通路蛋白表達，以探索ERSTRESS、CALPAIN和TGFΒ2通路在高頻電刺激所致的膠原代謝異常中生物學作用和相互調(diào)控機制。結果⑴對照組、4HZ組和8HZ組的APD90分別是1593±4910MS、1297±4631MS和7400±3606MS。8HZ刺激頻率為房顫時的心房的顫動頻率350600，且造成更明顯的APD90下降，被選用做后續(xù)實驗的頻率參數(shù)。⑵高頻電刺激24H引發(fā)HL1細胞出現(xiàn)APD縮短，形態(tài)學改變（細胞膜完整性破壞，偽足形成、細胞核固縮變形及細胞器腫脹），細胞內(nèi)鈣離子超載，快速激活的延遲性整流鉀通道、L型鈣通道和縫隙連接蛋白43蛋白表達下調(diào)，Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白表達上調(diào)。⑶高頻電刺激24H誘導4423±269％的細胞發(fā)生凋亡，而對照組凋亡率僅為184±025％。在高頻電刺激2H前預先給予ERSTRESS抑制劑降低細胞凋亡率至2370±291％預先給予MAP抑制劑降低細胞凋亡率至1859±658％預先給予MAPKS各成分的抑制劑，可以將凋亡率降至20％25％不等。⑷高頻電刺激24H破壞線粒體功能，降低線粒體膜電位，在高頻電刺激2H前預先給予ERSTRESS和MAPKS的抑制劑可以不同程度緩解高頻電刺激引發(fā)的線粒體膜電位降低。⑸高頻電刺激24H上調(diào)ERSTRESS、MAP和MAPKS的蛋白表達，在高頻電刺激2H前預先給予ERSTRESS抑制劑可以一定程度的緩解高頻電刺激造成的MAP和MAPKS激活。⑹高頻電刺激24H上調(diào)膠原、基質(zhì)金屬蛋白酶、TGFΒ2通路和CALPAIN的蛋白表達。在高頻電刺激2H前預先給予ERSTRESS或CALPAIN抑制劑可以一定程度的緩解高頻電刺激導致的膠原代謝異常。⑺ERSTRESS的激動劑可以上調(diào)CALPAIN、膠原、基質(zhì)金屬蛋白酶和TGFΒ2通路的蛋白表達。而抑制CALPAIN功能后，ERSTRESS激動劑造成的膠原代謝紊亂被糾正。結論①高頻電刺激后的HL1細胞是房顫確實可靠的體外模型。②高頻電刺激誘導HL1細胞發(fā)生細胞凋亡和膠原代謝紊亂。③ERSTRESS、MAP和MAPKS正向調(diào)控高頻電刺激后的細胞凋亡，且ERSTRESS是MAP及MAPKS的上游啟動因子之一。④ERSTRESS通過ERSTRESSCALPAINTGFΒ2通路介導高頻電刺激后的膠原代謝紊亂。

簡介：第二軍醫(yī)大學博士學位論文SUMO化修飾WNT／D．CATENIN通路對多發(fā)性骨髓瘤細胞的生物學效應及其機制研究THEEFFECTSANDMECHANISMSOFSUMOYLATIONONTHEWNT／13一CATENINPATHWAYINMYELOMACELLS研究生黃禾菁導師侯健教授專業(yè)名稱內(nèi)科學血液病學培養(yǎng)單位第二軍醫(yī)大學長征醫(yī)院血液科二。一五年五月目錄摘要???????????????????????LABSTRACT．????????????????????????????????????．4縮略詞表???????????????????????????7J￡一JL一刖焉????????????????????????????．9第一部分抑制SUMO化修飾對WNT／13一CATENINN_INN性及其下游分子的影響????????????????????????13一、材料與方法??????????????????????．．13二、實驗結果???????????????????????．．19三、討論?????????????????????????一23GN劣,抑制SUMO化修飾對WNT／T3．CATENIN通路關鍵效應分子13CATENIN的作用機制及其生物學效應??????????26一、材料與方法??????????????????????．．26二、實驗結果???????????????????????．．30三、討論?????????????????????????一41小結????????????????????????????45參考文獻??????????????????????????．46綜述一???????????????????????????．54綜述二???????????????????????????．70讀研期間發(fā)表論文情況????????????????????．82致謝??????????????????????．83