簡(jiǎn)介：間充質(zhì)干細(xì)胞MESENCHYMALSTEMCELLS，MSCS存在于成人體內(nèi)許多組織中，可以治療許多損傷性疾病。盡管在細(xì)胞基礎(chǔ)上的研究已經(jīng)取得了很多進(jìn)展，但是在細(xì)胞的來(lái)源、擴(kuò)增和分化成受損組織細(xì)胞來(lái)修復(fù)損傷等方面，還是有很多需要進(jìn)一步研究的地方。間充質(zhì)干細(xì)胞有很強(qiáng)的克隆形成和擴(kuò)增能力，并且具有向成骨，脂肪，軟骨，神經(jīng)和內(nèi)皮等多向分化潛能。MSCS已經(jīng)應(yīng)用于很多疾病的I臨床治療，包括肝硬化，急性心梗，自身免疫，輔助骨髓移植，神經(jīng)系統(tǒng)損傷等。本研究的第一部分旨在研究胎兒骨髓源和胎兒脂肪源的間充質(zhì)干細(xì)胞的克隆率，基本的表型，分化能力。我們已成功的從胎兒體內(nèi)多種組織骨髓和脂肪分離得到單克隆來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞。從多組織中獲得的干細(xì)胞，形態(tài)上基本與骨髓源FLK1CD31CD34多能干細(xì)胞相似，它們經(jīng)過(guò)體外培養(yǎng)后，均呈成纖維樣；具有穩(wěn)定的表型特征，即FLK1、CD105、CD44、CD29為陽(yáng)性，內(nèi)皮細(xì)胞的特征性表型VONWILLEBRFACTVWF、CD31，造血細(xì)胞的表型CD34、CD45、CD11A、CD11B，以及HLADR均為陰性；具有能向三個(gè)胚層細(xì)胞分化的特性。在第二部分，我們研究了成體脂肪源的間充質(zhì)干細(xì)胞能否作為肝纖維化的一種治療手段，圍繞著間充質(zhì)干細(xì)胞能否抑制肝臟成纖維細(xì)胞的增殖和活化展開研究，初步探討了運(yùn)用成體脂肪源的間充質(zhì)干細(xì)胞治療肝纖維化的可能性及可行性。本論文的第三部分旨在研究人類胎盤組織中分布的干細(xì)胞的生物學(xué)特征。首先從胎盤中通過(guò)極限稀釋法分離得到FLK1CD31CD34干細(xì)胞，它們具有多系分化的潛能，在單細(xì)胞水平上能分化成上皮，內(nèi)皮和神經(jīng)樣細(xì)胞，分析其形態(tài)、生長(zhǎng)方式及主要的免疫表型，均與我們從成人骨髓組織分離得到的干細(xì)胞一致，并在單細(xì)胞水平上證實(shí)胎盤來(lái)源的FLKLCD31CD34細(xì)胞在適宜條件下能夠向三個(gè)胚層的細(xì)胞肝細(xì)胞；內(nèi)皮細(xì)胞；神經(jīng)細(xì)胞分化。

簡(jiǎn)介：重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文RNA干擾NPM基因表達(dá)對(duì)白血病細(xì)胞生物學(xué)特性的影響姓名何鵬申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)指導(dǎo)教師張伶20080501重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文HHOURLBLURIABERTALLICULTURE小時(shí)LB培養(yǎng)基IRF一1INTERFERONREGULATORYFACTORS，干擾素調(diào)節(jié)因子MINMINUTE分鐘MMLVMMLVREVERSETRANSCRIPTASE鼠白血病源逆轉(zhuǎn)錄酶MRNAMESSENGERRIBONUCLEICACIDNPMNUCLEOPHOSMIN信使核糖核酸核仁磷酸蛋白PBSPHOSPHATEBUFFEREDSOLUTION磷酸鹽緩沖液PCRPOLYMERASECHAINREACTIONRNARIBONUCLEICACIDRNAIRNAINTERFERENCERPMROTAIONPERMINUTE聚合酶鏈反應(yīng)核糖核酸I斟A干擾每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)RTPCRREVERSETRANSCRIPTIONPOLYMERASECHAIN逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)REACTIONSECONDSHRNASHORTHAIRPINRNATAQTBETRISTAQDNAPOLYMERASETRISBORICACIDEDTA秒短發(fā)夾RNA嗜熱DNA聚合酶三羥甲基氨基甲烷硼酸TRISHYDROXYLMETHYLAMINOMETHANE三羥甲基氨基甲烷2

簡(jiǎn)介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文激發(fā)型CD40單抗5C11對(duì)白血病來(lái)源樹突狀細(xì)胞的誘導(dǎo)作用及其細(xì)胞生物學(xué)特性研究姓名王正飛申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)免疫學(xué)指導(dǎo)教師張學(xué)光顧宗江20030501激發(fā)型CD40單抗5CII對(duì)白血病來(lái)誨樹突狀細(xì)胞的誘導(dǎo)作用及其細(xì)胞生物學(xué)特性研究中文摘要用。結(jié)論激發(fā)型CD40單抗5C11聯(lián)合細(xì)胞因子能誘導(dǎo)白血病細(xì)胞分化為功能性DC，這可能在白血病的過(guò)繼免疫療法中具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。關(guān)鍵詞DC白血病細(xì)胞誘導(dǎo)分化激發(fā)型CD40單抗II

簡(jiǎn)介：目的1觀察SONICHEDGEHOGSHH信號(hào)通路及其下游靶基因NMYC在人髓母細(xì)胞瘤MEDULLOBLASTOMA，MB中的表達(dá)情況；2分析白藜蘆醇RESVERATROL，RES對(duì)人MB細(xì)胞系UW2282和UW2283的SHH信號(hào)通路及其下游靶基因NMYC表達(dá)的影響，探討RES對(duì)人MB作用的分子機(jī)制，從而為臨床改善MB的治療現(xiàn)狀提供理論依據(jù)。方法從臨床收集18例人MB腦組織及11例大鼠腦組織的石蠟包埋標(biāo)本，利用自行研制的組織微陣列儀制成石蠟組織微陣列，進(jìn)行SHH和GLIL的免疫組織化學(xué)染色I(xiàn)HC，觀察這些因子在人MB及大鼠腦組織中的表達(dá)情況。UW2282、3細(xì)胞系培養(yǎng)于含有10％胎牛血清的DMEMDULBECCOSMODIFIEDEAGLE’SMEDIUM培養(yǎng)基中，用100ΜMRES處理細(xì)胞48H。為便于細(xì)胞形態(tài)觀察和免疫細(xì)胞化學(xué)染色I(xiàn)CC，將無(wú)菌細(xì)胞爬片預(yù)先置于培養(yǎng)皿中，取出時(shí)用冷丙酮固定。同時(shí)制備細(xì)胞懸液并離心沉淀用于RNA和蛋白質(zhì)的提取。采用RTPCR、WESTERNBLOTTING和ICC等方法分析RES處理前后UW2282，UW2283中SHH、GLIL和NMYC的表達(dá)改變情況。結(jié)果1SHH和GLIL在人MB組織中染色陽(yáng)性率分別為8889％和9444％，均強(qiáng)于對(duì)照組；2RES有效抑制UW2282、3生長(zhǎng)，誘導(dǎo)其分化和調(diào)亡，在MRNA和蛋白水平上，RES下調(diào)SHH、GLIL和NMYC的表達(dá)。結(jié)論1人MB組織中SHH、GLIL和NMYC的表達(dá)高于對(duì)照組。因此，SHH信號(hào)通路在大多數(shù)人MB中處于活化狀態(tài)2首次發(fā)現(xiàn)，RES在抑制人MB細(xì)胞系UW2282、3細(xì)胞增殖，促進(jìn)分化并誘導(dǎo)凋亡的同時(shí)，還在MRNA和蛋白水平抑制SHH、GLIL和NMYC的轉(zhuǎn)錄與產(chǎn)生。RES對(duì)人MB細(xì)胞SHH信號(hào)通路的抑制可能與其增殖抑制、促分化和凋亡功能有某種內(nèi)在聯(lián)系。

簡(jiǎn)介：目的肝細(xì)胞癌HEPATOCELLULARCARCINOMA，HCC是我國(guó)最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率有逐步上升的趨勢(shì)，嚴(yán)重危害人民的健康。腫瘤壞死因子TUMNECROSISFACT，TNF和相應(yīng)的腫瘤壞死因子受體TUMNECROSISFACTRECEPT，TNFR結(jié)合，轉(zhuǎn)導(dǎo)凋亡信號(hào)進(jìn)入靶細(xì)胞，使靶細(xì)胞發(fā)生凋亡，是機(jī)體免疫系統(tǒng)清除腫瘤細(xì)胞的常見方式，而腫瘤細(xì)胞表達(dá)死亡因子的誘捕受體是腫瘤逃避機(jī)體免疫殺傷的機(jī)制之一。近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的TNFR超家族成員DCR3通過(guò)影響FASL、LIGHT和TLLA的促凋亡作用和免疫調(diào)節(jié)作用而抑制機(jī)體的抗腫瘤免疫，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。研究表明HCC組織存在DCR3的過(guò)表達(dá)，影響TCC細(xì)胞的凋亡，且HCC患者DCR3的表達(dá)水平與腫瘤的TNM分期、浸潤(rùn)或轉(zhuǎn)移有關(guān)。這些研究結(jié)果提示，若能抑制DCR3的表達(dá)則有助于阻抑腫瘤的發(fā)展與浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。RNA干擾RNAINTERFERENCE，RNAI是由與靶基因序列同源的雙鏈RNADOTLBLESTREDRNA，DSRNA啟動(dòng)的一種序列特異性的轉(zhuǎn)錄后基因沉默機(jī)制，其介導(dǎo)子是2125NT的小干擾RNASHTINTERFERINGRNA，SIRNA，由細(xì)胞內(nèi)的DSRNA特異性核酸內(nèi)切酶DSRNASPECIFICERADONUCLEASE，DICER酶切產(chǎn)生。由于SIRNA具有特異性高、抑制作用強(qiáng)、穩(wěn)定性高、細(xì)胞攝取相對(duì)容易等優(yōu)點(diǎn)，因此，RNAI技術(shù)目前已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于基因功能研究和基因治療方面。本研究擬通過(guò)RNA干擾技術(shù)抑制HCC細(xì)胞系HEPG2中DCR3的表達(dá)，檢測(cè)DCR3干擾后HEP62細(xì)胞增殖、凋亡、遷移等生物學(xué)特性的改變，從而探討DCR3在HCC發(fā)生發(fā)展與浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中的作用。材料與方法1應(yīng)用RTPCR方法檢測(cè)人HCC細(xì)胞系HEPG2、癌旁肝細(xì)胞系QSG7701及正常肝細(xì)胞系HL7702中DCR3的表達(dá)情況。2設(shè)計(jì)并合成針對(duì)DCR3基因的特異性SIRNA，采用陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑LIPOFECTAMIM2000將SIRNA轉(zhuǎn)染至高表達(dá)DCR3的HCC細(xì)胞系HEPG2，通過(guò)熒光顯微鏡下觀察和應(yīng)用流式細(xì)胞儀鑒定和檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率。3應(yīng)用半定量RTPCR方法篩選有效的靶序列，將篩選出的有效靶序列轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)其對(duì)HEPG2細(xì)胞DCR3蛋白表達(dá)的影響。4應(yīng)用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力的改變。5應(yīng)用流式細(xì)胞儀測(cè)細(xì)胞周期的變化。6應(yīng)用流式細(xì)胞儀、DNALADDER方法檢測(cè)細(xì)胞的凋亡情況。7通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞體外遷移能力的變化。結(jié)果1人HCC細(xì)胞系HEPG2細(xì)胞中DCR3MRNA呈現(xiàn)高表達(dá)，而癌旁肝細(xì)胞系QSG7701和正常肝細(xì)胞系HL7702細(xì)胞中無(wú)DCR3MRNA表達(dá)。2LIPOFECTAMIM2000能有效地將SIRNA轉(zhuǎn)染至細(xì)胞內(nèi)，轉(zhuǎn)染效率約為85％。3各特異性DCR3SIRNA均有抑制DCR3MRNA表達(dá)的作用，其中以SIRNA4的作用更明顯，干擾作用達(dá)629％，SIRNA1、SIRNA2、SIRNA3的干擾作用分別為607％、321％、23O％轉(zhuǎn)染SIRNA1、SIRNA2、SIRNA3、SIRNA4組的DCR3MRNA表達(dá)與空白對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005。選擇抑制作用最明顯的SIRNA4轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞作為特異性組進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示，空白對(duì)照組、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染組及非特異性SIRNA轉(zhuǎn)染組細(xì)胞DCR3蛋白呈陽(yáng)性表達(dá)，特異性DCR3SIRNA4轉(zhuǎn)染組細(xì)胞蛋白呈陰性或弱陽(yáng)性表達(dá)，特異性DCR3SIRNA4轉(zhuǎn)染組與前三組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005。結(jié)論特異性DCR3SIRNA能有效抑制肝癌細(xì)胞系HEPG2的DCR3表達(dá)，使細(xì)胞周期阻滯于G1S期，能有效地誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并能抑制HEPG2的增殖和細(xì)胞的遷移能力。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多胰腺癌的蛋白質(zhì)組學(xué)分析及annexin II siRNA對(duì)胰腺癌細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：山東醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文BFGF和FN對(duì)牙周組織三種細(xì)胞生物學(xué)活性的影響姓名葛少華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)口腔內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師楊丕山20000401L、牙齦成纖維細(xì)胞的增殖速度明顯’陜于牙周韌帶細(xì)胞和牙槽骨細(xì)胞。BFGF和FN對(duì)三種細(xì)胞均有促增殖作用，但對(duì)于不同的細(xì)胞，BFGF和FN各自作用的最佳效應(yīng)濃度不同。2、牙槽骨細(xì)胞的堿性磷酸酶活性顯著高于牙周韌帶細(xì)胞和牙齦成纖維細(xì)胞，而牙周韌帶細(xì)胞的蛋白合成量又顯著高于其它兩種細(xì)胞。BFGF對(duì)牙周韌帶細(xì)胞和牙槽骨細(xì)胞的堿性磷酸酶水平及蛋白合成有抑制作用，而FN對(duì)這兩種細(xì)胞的作用正好與BFGF相反。兩種因子對(duì)牙齦成纖維細(xì)胞的堿性磷酸酶水平及蛋白合成均無(wú)顯著影響。3、牙槽骨細(xì)胞的礦化率商于牙周韌帶細(xì)胞，而牙齦成纖維細(xì)胞則無(wú)礦化結(jié)節(jié)形成。BFGF對(duì)牙槽骨細(xì)胞和牙周韌帶細(xì)胞的礦化結(jié)節(jié)蝴；成有抑制作用，而FN對(duì)礦化結(jié)節(jié)形成的促進(jìn)作用不顯著Y7結(jié)論BFGF能促進(jìn)細(xì)胞的增殖，但卻抑制細(xì)胞的分化成熟；而FN亦能促進(jìn)細(xì)胞的增殖及蛋白合成，但其促進(jìn)細(xì)胞分化的能力有限，尚需其它生長(zhǎng)因子的協(xié)助以促進(jìn)組織再生。關(guān)鍵詞堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子纖維結(jié)合蛋白牙周韌帶細(xì)胞增殖分化，J7|＼

簡(jiǎn)介：南方醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文腫瘤翻譯調(diào)控蛋白（TCTP）對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞LOVO的生物學(xué)特性影響及安全型慢病毒載體構(gòu)建探索姓名馬強(qiáng)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)免疫學(xué)指導(dǎo)教師李明20090410中文摘要安全性沒有很好解決，如對(duì)導(dǎo)入基因的控制、外緣基因及基因載體本身整合到宿主染色體帶來(lái)的一系列問題等；②用于大腸癌理想載體的選擇應(yīng)具有安全性、高效性、靶向性、大容量性和可控性等特點(diǎn)，目前還難以找到可運(yùn)用到理想的臨床要求載體③缺乏足夠的基因治療靶序列，大腸癌的發(fā)生是一種多基因水平調(diào)控的失控所致單獨(dú)基因治療效果差。由此進(jìn)一步深入研究大腸癌的發(fā)病機(jī)制，尋找確定更多更有效的治療靶基因，制備安全高效的基因治療載體是大腸癌基因治療中迫切需要解決的問題。本文第一部分著重研究腫瘤翻譯調(diào)控蛋白TCTP對(duì)高轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌細(xì)胞株的細(xì)胞生物學(xué)影響以及相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)通路的研究。第二部分著重研究新型基因治療用慢病毒載體生產(chǎn)體系的改進(jìn)和優(yōu)化。第一部分通過(guò)構(gòu)建靶向TCTP基因的SHRNA質(zhì)粒表達(dá)載體，下調(diào)TCTP在LOVO細(xì)胞中的表達(dá)。通過(guò)CCK一8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LOVO細(xì)胞的增殖速度，粘附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LOVO細(xì)胞對(duì)ECM的粘附能力，趨化實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LOVO細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力，侵襲實(shí)驗(yàn)檢澳LJLOVO細(xì)胞對(duì)于ECM的分解穿透能力，EMSA以及熒光素酶實(shí)驗(yàn)檢I貝OTCTP下調(diào)后對(duì)于NFRB活性的影響。通過(guò)成瘤實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TCTP下調(diào)對(duì)于LOVO細(xì)胞成瘤能力的影響，轉(zhuǎn)移模型實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LOVO細(xì)胞體內(nèi)肝轉(zhuǎn)移能力的影響，通過(guò)2D電泳和質(zhì)譜分析鑒定與TCTP相關(guān)蛋白，并初步評(píng)價(jià)TCTP在正常人以及病人血清中的含量。構(gòu)建SHRNA質(zhì)粒表達(dá)載體，質(zhì)粒酶切以及測(cè)序鑒定表明質(zhì)粒構(gòu)建成功。下調(diào)TCTP在LOVO細(xì)胞中的表達(dá)，經(jīng)熒光顯微鏡觀察各組LOVO細(xì)胞均出現(xiàn)綠色報(bào)告熒光，RT。PCR，WESTERNBLOTTING，QRTPCR分析鑒定TCTP的表達(dá)下調(diào)分別達(dá)至T82％、89％、73％。TCTP下調(diào)能夠體外減慢LOVO細(xì)胞的增殖速度，SHRNATCTP，SHRNATCTPLOVOPARENTAL組分別鋪96孔板，每孔細(xì)胞數(shù)2000個(gè)。每株細(xì)胞5個(gè)復(fù)孔，鋪7塊板，連續(xù)測(cè)量7天。從第4天開始，SHRNATCTP組生長(zhǎng)速度明顯慢于SHNCRNATCTP組和NC組，經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后，SL刪ATCTP組在測(cè)量第1F1773P005、2F0048，P005、3F7865P005天時(shí)，11

簡(jiǎn)介：輻射致癌過(guò)程大致可以分為啟動(dòng)、促進(jìn)及惡性進(jìn)展三個(gè)階段為了在體外完整地建立起可以模擬輻射致癌各階段的細(xì)胞模型該研究以該室已建立的Α粒子輻射誘發(fā)的人支氣管上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化株BERP35T4為基礎(chǔ)將該細(xì)胞接種于裸鼠皮下在裸鼠體內(nèi)連續(xù)傳代三次后觀察到該細(xì)胞獲得轉(zhuǎn)移潛能將該腫瘤組織進(jìn)行體外分離腫瘤細(xì)胞并培養(yǎng)建系獲得了具有轉(zhuǎn)移潛能的惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞系BERP35T4TA該研究還以三種細(xì)胞系BEP2D、BERP35T4及BERP35T4TA為材料分別從免疫組化、增殖速度、錨著獨(dú)立生長(zhǎng)能力、血清抗性及染色體數(shù)日等方面對(duì)這三種細(xì)胞系的特性進(jìn)行了研究還利用TRANSWELL技術(shù)分析了BERP35T4TA的遷移能力并進(jìn)一步分離出轉(zhuǎn)移細(xì)胞最后利用微衛(wèi)星不穩(wěn)定性分析技術(shù)對(duì)腫瘤細(xì)胞系中抑癌基因的雜合性缺失情況進(jìn)行了檢測(cè)該研究所獲得的主要結(jié)果如下1BERP35T4IMMTALIZEDHUMANBRONCHIALEPITHELIALCELLTRANSFMEDBYΑPARTICLES成瘤性實(shí)驗(yàn)以永生化人支氣管上皮細(xì)胞BEP2D為對(duì)照將BERP35T4細(xì)胞接種于56周齡裸鼠皮下每組接種9只雌雄兼半16周后對(duì)照組無(wú)一長(zhǎng)出腫瘤09BERP35T4組相繼有4只長(zhǎng)出腫瘤49其中1只裸鼠在其胸部及后肢出現(xiàn)肉眼可見的轉(zhuǎn)移瘤經(jīng)解剖發(fā)現(xiàn)肺部也出現(xiàn)轉(zhuǎn)移灶2BEP2D、BERP35T4和BERP35T4TA的細(xì)胞生物學(xué)特性研究①細(xì)胞增殖能力②錨著獨(dú)立生長(zhǎng)能力③血清抗性④染色體眾數(shù)⑤細(xì)胞的遷移能力綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果該文認(rèn)為BERP35T4TA細(xì)胞具有較為典型的惡性腫瘤細(xì)胞的表型并且還具有較高的轉(zhuǎn)移能力3微衛(wèi)星不穩(wěn)定性分析技術(shù)檢測(cè)抑癌基因的雜合性缺失針對(duì)位于肺癌高缺失染色體區(qū)域的9個(gè)已知基因FHIT、APC、PRLTS、P16、PTEN、P57、ATM、BRCA1、P53選擇了16個(gè)位于基因內(nèi)或與基因緊密連鎖的微衛(wèi)星多態(tài)性位點(diǎn)對(duì)上述三種細(xì)胞系BEP2D、BERP35T4及BERP35T4TA進(jìn)行了微衛(wèi)星不穩(wěn)定性分析

簡(jiǎn)介：第一軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文小鼠腫瘤細(xì)胞TLR2的表達(dá)及其生物學(xué)意義姓名羅冰申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)免疫學(xué)指導(dǎo)教師富寧劉艷君20060608摘要其他細(xì)胞株均擴(kuò)增出約310BP的特異性擴(kuò)增帶。PCR產(chǎn)物經(jīng)測(cè)序鑒定后，在線運(yùn)行BLAST2，與MTLR2CDNA序列AFL24741作比較，其同源性均98％。以PE標(biāo)記的TLR2單抗T25，采用流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)各種小鼠腫瘤細(xì)胞表面TLR2的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)除YAC一1以外其他所有的細(xì)胞株表面都不同程度的表達(dá)TLR2，其中上皮細(xì)胞癌EMT6和RM一1可表達(dá)TLR2蛋白系本課題組首次報(bào)道。構(gòu)建反義MTLR2的重組體PCDNA31MTLR2一。PCDNA31和PCDNA31這兩個(gè)質(zhì)粒均為54KBP，結(jié)構(gòu)相似，均含有CMV、SV40、T7啟動(dòng)子，AMP、NEO抗性基因和相同的多克隆酶切位點(diǎn)，但二者的多克隆酶切位點(diǎn)排列方向剛好相反，我們正是利用這一點(diǎn)，以真核表達(dá)重組體PCDNA31F_卜MTLR2為模板，擴(kuò)增出兩端分別加有NOTI和XBAI酶切位點(diǎn)的MTLR2DNA片段，然后與PCDNA31進(jìn)行連接，剛好使其反向插入，就構(gòu)建成PCDNA31MTLR2反義重組體。經(jīng)測(cè)序鑒定，插入T7啟動(dòng)子下游的目的片段與MTLR2的序列反向互補(bǔ)；NOTI和XBAI雙酶切構(gòu)建的反義重組體，得到約5400BP的載體片段和2350BP的目的片段，表明成功構(gòu)建了反義MTLR2的重組體。將PCDNA31一MTLR2反義重組體在250V電壓和900UF電容的條件下電轉(zhuǎn)進(jìn)入NS1細(xì)胞株，經(jīng)含600MG／LG418的RPMLL640完全培養(yǎng)基篩選培養(yǎng)3周，獲得陽(yáng)性克隆NS一1MTLR2。同時(shí)以PCDNA31一空載體電轉(zhuǎn)NSL細(xì)胞株作為陰性對(duì)照，所得陽(yáng)性克隆命名為NS1一PCDNA311。二、TLR2激動(dòng)劑對(duì)腫瘤形成及腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)影響的初步觀察卡介苗BCG是TLR2的激動(dòng)劑之一，這里采用包含有BCG的弗氏完全佐劑來(lái)處理小鼠腫瘤模型。SWISS小鼠各10只，分別腹腔注射02ML的弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑，10天后，各組小鼠再追加注射02ML的弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑。之后第15天，以小鼠骨肉瘤S180細(xì)胞株接種小鼠背部皮下，10103個(gè)／只；對(duì)照組僅接種相同數(shù)量的腫瘤細(xì)胞。觀察成瘤時(shí)問平瘤體大小。結(jié)果顯示注射弗氏完全佐劑的小鼠形成腫瘤的潛伏期較長(zhǎng)，并且生存時(shí)問也較長(zhǎng)，與弗氏不完全佐劑組相比較，具有顯著性差異P0023，但與空白對(duì)照組沒有顯著性差異P0147；弗氏完全佐劑組形成較大實(shí)體瘤的數(shù)量為3只30％，與空白對(duì)照組8只，80％相比較具有顯著性差異P0032，但是與刁I完全佐劑組7只，70％相比較，則沒有顯著性差異P0078。以SWISS小鼠骨肉瘤S180細(xì)胞株1010’個(gè)／只接種小鼠背部皮下，其中實(shí)II

簡(jiǎn)介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文HSP90抑制劑17AAG對(duì)人腎癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的體外研究姓名晏湘山申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)泌尿外科學(xué)指導(dǎo)教師嚴(yán)春寅20090501HSP90抑制劑17．AAG對(duì)人腎癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的體外研究中文摘要指標(biāo)DO、SF2、DQ均呈現(xiàn)不同程度的下降，DO增敏比達(dá)到1．3169。結(jié)論在缺氧狀態(tài)下，HSP90抑制劑17．AAG對(duì)人腎癌細(xì)胞株CAKI．1具有明顯的增殖抑制作用，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。其誘導(dǎo)人腎癌細(xì)胞株CAKI．1細(xì)胞凋亡的機(jī)制與其下調(diào)HIF．2A的表達(dá)有關(guān)。在缺氧狀態(tài)下，17．AAG可以提高人腎癌細(xì)胞株CAKI一1細(xì)胞的放射敏感性。關(guān)鍵詞腎細(xì)胞癌；缺氧誘導(dǎo)因子．2A；熱休克蛋白90；17一AAG；CAKI1；II作者晏湘山指導(dǎo)教師嚴(yán)春寅

簡(jiǎn)介：遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞的生物學(xué)特性和重組人血管內(nèi)皮抑制素對(duì)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究姓名曹江申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)小兒外科指導(dǎo)教師俞松20090501遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞的生物學(xué)特性和重組人血管內(nèi)皮抑制素對(duì)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)論1用組織塊法培養(yǎng)人血管瘤增殖期內(nèi)皮細(xì)胞易成活。分離的細(xì)胞能貼壁生長(zhǎng)，生長(zhǎng)曲線的停滯期、穩(wěn)定期長(zhǎng)，于三周后才達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。2重組人血管內(nèi)皮抑制素不僅對(duì)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞增殖有抑制作用，而且能促進(jìn)其早期凋亡。關(guān)鍵詞血管瘤；血管內(nèi)皮細(xì)胞；細(xì)胞培養(yǎng)；重組人血管內(nèi)皮抑制素；增殖凋亡

簡(jiǎn)介：山東大學(xué)博士學(xué)位論文EGF、雌二醇和生長(zhǎng)抑素對(duì)人肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究姓名王文奇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)內(nèi)科學(xué)（消化系?。┲笇?dǎo)教師劉倩20060417山東大學(xué)博士學(xué)位論文EGF、雌二醇和生長(zhǎng)抑素對(duì)人肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究博士研究生王文奇導(dǎo)師劉倩摘要目的原發(fā)性肝癌是我國(guó)、也是世界上最常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重危害人類的健康。自20世紀(jì)90年代以來(lái)，我國(guó)肝癌的死亡率已上升到腫瘤死亡率的第二位。近年我國(guó)肝癌治療效果得到明顯提高，但由于肝癌發(fā)生機(jī)制尚未闡明，治療效果仍不滿意。肝癌發(fā)生是一個(gè)多因素、多步驟的復(fù)雜生物學(xué)過(guò)程。HBV、HCV、表皮生長(zhǎng)因子EGF、性激素、細(xì)胞因子、癌基因及抑癌基因等多種因素參與并促進(jìn)了腫瘤的發(fā)生。EGF促進(jìn)肝癌細(xì)胞DNA的合成，促進(jìn)肝癌的發(fā)生與發(fā)展。EGFR廣泛分布于肝細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞，與細(xì)胞增殖、分化調(diào)節(jié)、腫瘤轉(zhuǎn)化密切相關(guān)。EGF和EGFR在肝癌存在過(guò)表達(dá)，與肝癌的形成關(guān)系密切。雌二醇E2主要在肝臟代謝和滅活，可以誘導(dǎo)肝原癌基因活化。雌激素受體ER調(diào)控基因表達(dá)，與肝癌發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后有關(guān)。生長(zhǎng)抑素SST和生長(zhǎng)抑素受體SSTR在體內(nèi)分布廣泛，SST及其類似物SSTA在體外可以抑制多種人肝癌細(xì)胞株生長(zhǎng)，可以分別對(duì)EGF、EGFR、E2、ER產(chǎn)生抑制作用，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。在EGF、E2、SST及其受體的信號(hào)傳導(dǎo)途徑中，有絲分裂原活化蛋白激酶MAPK發(fā)揮了重要作用，成為它們之I司相互作用的基礎(chǔ)。EGF、E2、SST及其受體與人肝癌細(xì)胞增殖的關(guān)系及其相互作用機(jī)制尚未闡明，且缺少系統(tǒng)研究的報(bào)道。本課題試圖通過(guò)研究人重組表皮生長(zhǎng)因子RHEGF、人B一雌二醇13一E2和人生長(zhǎng)抑素HSST對(duì)人肝癌HEPG2細(xì)胞增殖的影響和HEPG2細(xì)胞EGF、EGFR、E2、ER、SST和SSTR的變化，探討上述諸因素在肝癌發(fā)生中的相互作用及其機(jī)制，為應(yīng)用生長(zhǎng)抑素治療肝癌提供實(shí)驗(yàn)及理論基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多4種納米顆粒對(duì)人胃癌BGC-823細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng).pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：目的樹突狀細(xì)胞DENDRITICCELLS，DCS是一種最具潛能的抗原提呈細(xì)胞，其對(duì)抗原進(jìn)行捕獲、加工，處理后提呈給組織相容性復(fù)合物MAJHISTOCOMPABILITYCOMPLEX，MHCⅠ、Ⅱ類分子，誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞的增殖，在增強(qiáng)或調(diào)節(jié)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)中起著決定性作用。乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUS，HBV感染者DCS的相關(guān)研究目前愈來(lái)愈受到眾多學(xué)者的關(guān)注。本課題擬研究慢性乙型肝炎不同感染階段外周血來(lái)源DCS的功能特點(diǎn)，比較DCS中HBV不同滴度時(shí)DCS的功能差異，并研究CPGODN能否促進(jìn)DCS成熟，增強(qiáng)DCS功能，從而進(jìn)一步揭示HBV感染不同狀態(tài)下DCS的免疫功能。方法本研究對(duì)10例慢性乙型肝炎患者、10例HBV攜帶者及10例健康對(duì)照者外周血來(lái)源DCS進(jìn)行體外培養(yǎng)，應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)DCS的表面分子HLADR、CD80、CD86的表達(dá)，ELISA檢測(cè)DCS培養(yǎng)上清IL12水平，以比較DCS在慢性乙型肝炎不同感染階段的功能特點(diǎn)；同時(shí)運(yùn)用熒光定量PCR的方法，對(duì)12例慢性乙型肝炎血清HBVDNA陽(yáng)性患者及10例血清HBVDNA陰性患者外周血來(lái)源DCS內(nèi)的HBVDNA進(jìn)行了檢測(cè)，并比較DCS中HBV不同滴度時(shí)DCS的功能差異；通過(guò)予以含非甲基化CPG基序的寡脫氧核苷酸鏈UNMETHYLATEDCPGMOTIFCONTAININGOLIGODEOXYNUCLEOTIDES，CPGODN干預(yù)，研究CPGODN能否有效促進(jìn)DCS成熟，增強(qiáng)DCS功能。結(jié)果1實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，體外用含10％胎牛血清FBS的RPMI1640完全培養(yǎng)基加GMCSF和IL一4誘導(dǎo)人的外周血單個(gè)核細(xì)胞PERIPHERALBLOODMONONUCLEARCELLS，PBMCS來(lái)培養(yǎng)DCS，24小時(shí)后可見貼壁單核細(xì)胞聚集成大小不等葡萄串狀，粘附于培養(yǎng)板底，第3天可見這部分細(xì)胞體積增大，第4天可見部分細(xì)胞懸浮于細(xì)胞培養(yǎng)液，第5天可見這部分細(xì)胞數(shù)目增多，部分細(xì)胞出現(xiàn)許多毛刺。第7天培養(yǎng)液中飄浮著大量有明顯樹突狀的大個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)。將培養(yǎng)7天的DCS收集在透射電鏡下觀察，每個(gè)視野充滿DCS，可見細(xì)胞體積較大，細(xì)胞表面突起比較豐富，胞漿內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)豐富，線粒體結(jié)構(gòu)較清楚，溶酶體豐富，核大而圓，核膜清晰，染色質(zhì)分布較均勻。慢性乙型肝炎患者及HBV攜帶者HLADR、CD80和CD86的表達(dá)率較正常對(duì)照組普遍降低，但HLADR、CD80和CD86的表達(dá)水平在慢性乙型肝炎患者及HBV攜帶者之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ELISA檢測(cè)培養(yǎng)第7天DCS上清IL12水平，發(fā)現(xiàn)在DCS培養(yǎng)上清液中，IL12的表達(dá)水平在慢性乙型肝炎患者及攜帶者明顯低于正常人，而慢性乙型肝炎患者與攜帶者之間則無(wú)明顯差異。2對(duì)12例慢性乙型肝炎血清HBVDNA陽(yáng)性患者及10例血清HBVDNA陰性患者外周血來(lái)源DCS內(nèi)的HBVDNA進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)12例血清HBVDNA陽(yáng)性患者，其中有7例其DCS內(nèi)可檢測(cè)到HBVDNA，5例DCS內(nèi)未檢出HBVDNA，DCS內(nèi)HBVDNA檢出率為583％。流式細(xì)胞儀分析顯示，正常人的HLADR、CD80和CD86的表達(dá)陽(yáng)性率均在58％以上，而慢性乙型肝炎血清HBVDNA陽(yáng)性組及血清HBVDNA陰性組HLADR、CD80和CD86的表達(dá)率較正常人組普遍降低，尤以血清HBVDNA陽(yáng)性組下降更為明顯。7例DCSHBVDNA陽(yáng)性組及15例DCSHBVDNA陰性組HLADR、CD80和CD86的表達(dá)率亦較正常人組普遍降低，尤以DCSHBVDNA陽(yáng)性組下降更為明顯。DCS培養(yǎng)上清IL12水平在血清HBVDNA陽(yáng)性組明顯低于血清HBVDNA陰性組及正常人組，血清HBVDNA陽(yáng)性組又低于血清HBVDNA陰性組。而IL12的表達(dá)水平在DCSHBVDNA陽(yáng)性組明顯低于DCSHBVDNA陰性組及正常人組，DCSHBVDNA陰性組又低于正常人組。相關(guān)分析顯示，DCS表面分子的表達(dá)及DCS分泌IL12水平與血清及DCSHBV載量均呈顯著負(fù)相關(guān)。3將培養(yǎng)第6天的DCS，加入CPGODN繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)后，透射電鏡觀察CPGODN刺激后DCS與完全培養(yǎng)基對(duì)照組DCS相比，其表面的突起豐富、增粗，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增多，空泡減少甚至消失。用流式細(xì)胞儀分析顯示，CPGODN刺激組CD80、CD86及HLADR的表達(dá)陽(yáng)性率在慢性乙型肝炎組、HBV攜帶者組及正常人組均完全培養(yǎng)基對(duì)照組明顯升高。完全培養(yǎng)基對(duì)照組HLADR、CD86、CD80的表達(dá)陽(yáng)性率在慢性乙型肝炎組、攜帶者組及正常人組之間比較發(fā)現(xiàn)慢性乙型肝炎組及攜帶者組HLADR、CD86、CD80的表達(dá)陽(yáng)性率較正常人組明顯下降，但慢性乙型肝炎組和攜帶者組之間比較卻無(wú)顯著性差異。CPGODN刺激組HLADR、CD86、CD80的表達(dá)陽(yáng)性率在慢性乙型肝炎組、攜帶者組及正常人組之間比較發(fā)現(xiàn)慢性乙型肝炎組HLADR、CD86的表達(dá)陽(yáng)性率較攜帶者組及正常人組明顯下降，但攜帶者組和正常人組之間比較卻無(wú)顯著性差異；慢性乙型肝炎組及攜帶者組CD80的表達(dá)陽(yáng)性率正常人組明顯下降，但慢性乙型肝炎組和攜帶者組之間比較卻無(wú)顯著性差異。ELISA檢測(cè)CPGODN刺激組及完全培養(yǎng)基對(duì)照組IL12的水平，發(fā)現(xiàn)CPGODN刺激組DCS分泌IL12的水平無(wú)論在慢性肝炎組、攜帶者組及正常人組均較完全培養(yǎng)基對(duì)照組明顯升高。完全培養(yǎng)基對(duì)照組及CPGODN刺激組DCS分泌IL12水平在慢性乙型肝炎組、攜帶者組及正常人組之間比較發(fā)現(xiàn)慢性乙型肝炎組及攜帶者組DCS分泌IL12水平較正常人組明顯下降，但慢性乙型肝炎組和攜帶者組之間比較卻無(wú)顯著性差異。結(jié)論1慢性乙型肝炎患者及無(wú)癥狀攜帶者均存在著DCS表型和功能的缺失。2慢性乙肝患者外周血DCS亦能受到HBV的感染，而且DCS的表型以及分泌IL12能力與血清及DCS內(nèi)HBV載量均呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系。3CPGODN能夠明顯促進(jìn)慢性乙型肝炎患者外周血DCS成熟，為CPGODN成為治療慢性乙型肝炎的一種新方法提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。