簡介：點擊查看更多核苷類藥物抗乙肝病毒的早期病毒學應答研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：葡萄糖6磷酸脫氫酶缺乏癥GLUCOSE6PHOSPHATEDEHYDROGENASEDEFICIENCY，G6PDDEFICIENCY是一種常見的X染色體連鎖不完全顯性遺傳病，在全球范圍內(nèi)G6PD缺乏癥的患者有近4億人，約49％的人受累?，F(xiàn)普遍認為此病與瘧疾的自然選擇有關，主要分布在瘧疾曾一度流行的赤道附近熱帶和亞熱帶地區(qū)。在我國，這一遺傳性疾病主要分布在我國長江以南地區(qū)，呈“南高北低”的趨勢，男性發(fā)病率高于女性。廣東省是G6PD缺乏癥的高發(fā)區(qū)，全省發(fā)病率約為31％～161％。上世紀的研究發(fā)現(xiàn)G6PD缺乏癥是由基因突變所致。全球至今共報道186種G6PD基因突變類型，在中國人群中發(fā)現(xiàn)28種，其中1376G＞T、1388G＞A和95A＞G是我國常見的三種突變，且僅在華人中存在。作為G6PD缺乏癥的高發(fā)區(qū)，我市至今尚未見G6PD缺乏癥基因頻率、基因突變譜及突變基因構成比等遺傳學資料的研究。G6PD廣泛存在于人類體細胞內(nèi)，是磷酸戊糖途徑的關鍵酶，通過提供還原型輔酶ⅡNITRATEREDUCTASE，NADPH，使氧化型谷胱甘肽GLUTATHIONEDISULFIDE，GSSG轉化為還原型谷胱甘肽（GLUTATHIONE，GSH），保護細胞免受氧化損害。G6PD缺乏可造成NADPH生成不足，細胞中GSH含量降低，導致機體抗氧化能力不足。病毒感染可誘導宿主細胞出現(xiàn)氧化應激（OXIDATIVESTRESS），導致細胞結構損傷和功能障礙26。研究發(fā)現(xiàn)，有限的抗氧化能力使G6PD缺陷細胞對病毒的易感性增高，病毒感染G6PD缺陷細胞后會引起明顯的氧化應激，該作用導致病毒毒力增強，宿主細胞發(fā)生明顯的病理改變79。腸道病毒71型ENTEROVIRUS71，EV71是引起嬰幼兒手足口病H，F(xiàn)OOTMOUTHDISEASE，HFMD的主要病原體之一，與手足口病患兒嚴重的神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥密切相關。從以上研究出發(fā)，我們推測G6PD缺乏癥可能與EV71型手足口病有著密切關系，并可能通過氧化應激途徑影響EV71的易感性及致病性。本研究分為兩個部分第一部分中山地區(qū)G6PD缺乏癥的分子流行病學調查。目的G6PD缺乏癥是廣東省出生缺陷干預工程的五大病種之一，G6PD缺乏癥是中山市新生兒疾病篩查的病種之一，于1998年在我市開展，隨著篩查技術及篩查網(wǎng)絡的不斷完善，每年會檢出數(shù)千名G6PD缺乏癥患兒，作為G6PD缺乏癥的高發(fā)區(qū)，我市至今尚未見G6PD缺乏癥基因頻率、基因突變譜及突變基因構成比等遺傳學資料的研究，本課題的開展將填補中山地區(qū)在這方面的空白，揭示G6PD缺乏癥在本地區(qū)的分子流行病學特征。方法在上世紀80年代，杜傳書進行了大規(guī)模的G6PD缺乏癥流行病學調查，結果顯示全國G6PD缺乏癥基因頻率為0～4483％，其中廣東漢族為789％，廣東省總發(fā)病率為54％。通過以下公式NUΑ2ARCSINΔ√P1P2，P0054，允許誤差Δ001，Α005，進行樣本量估計，至少需要1961例。根據(jù)中山市政府2009年公布的中山市24個行政區(qū)（18個鎮(zhèn)區(qū)和6個街道）的人口比例，在2009年6月至2010年2月到我院接受婚前檢查的5940例中山市戶籍育齡人員中，按行政區(qū)人口比例進行分層隨機抽樣，共抽取樣本4105例，其中男性2119例，女性1986例，被檢者就診時均無貧血表現(xiàn)，所有研究對象均在我院的婚檢篩查系統(tǒng)建立個人檔案，課題全程采用電子化信息管理。本研究建立了從表型到基因型的分子鑒定流程，用VICT21420型多標記分析儀定量檢測樣品中G6PD活性，成人G6PD活性＜1300UL則為陽性，對陽性樣品用酚氯仿法提取基因組DNA，經(jīng)PCR擴增后利用變性高效液相色譜DENATURINGHIGHPERFMANCELIQUIDCHROMATOGRAPHY，DHPLC技術進行分析，經(jīng)DHPLC技術未檢測出已知基因突變且表型陽性的樣品被送去上海英駿生物技術有限公司進行G6PD基因測序。結果本次流行病學調查共檢出G6PD缺乏者195例，其中男性134例，男性檢出率為632％，女性61例，女性檢出率為307％，總檢出率為475％，男性和女性的G6PD缺乏癥檢出率有顯著差異X22397，P＜0001，男性高于女性，根據(jù)HARDYWEINBENG定律，X連鎖疾病人群發(fā)病率等于男性患者頻率，中山市G6PD缺乏癥基因頻率為632％。我們從以上195例樣品中鑒定出191例有基因突變，4例表型陽性樣品未檢出突變，其中173例通過DHPLC分析，18例通過基因測序，共檢出10種變異類型，分別為1388G＞A、1376G＞T、95A＞G、871G＞A、1311C＞T、1024C＞T、517C＞T、592C＞T、392G＞T、196T＞A，其中1376G＞T1388G＞A以及95A＞G共占7692％，本次在中山地區(qū)發(fā)現(xiàn)的517C＞T、196T＞A均為廣東地區(qū)首次報道。從本次調查中我們還發(fā)現(xiàn)，1388G＞A、1376G＞T和95A＞G這三種基因突變對應G6PD酶的活性水平無顯著差異，但半合子的G6PD酶活性明顯低于雜合子。結論通過本次流行病學調查，闡明了中山戶籍人群G6PD缺乏癥的發(fā)病率、基因突變譜及表型與基因型的關系，為制訂該地區(qū)G6PD缺乏癥的防控計劃提供科學的參考依據(jù)，對優(yōu)生優(yōu)育、提高人口素質有重要意義。第二部分G6PD缺乏癥與腸道病毒71型手足口病的相關性研究。目的腸道病毒71型ENTEROVIRUS71，EV71是引起嬰幼兒手足口病的主要病原體之一，與重癥手足口病密切相關。病毒感染機體后可誘導宿主細胞氧化應激并進一步加重感染。G6PD缺乏可造成NADPH生成不足，細胞中GSH含量降低，機體抗氧化能力不足。近年來已有研究發(fā)現(xiàn)G6PD缺陷細胞對EV71易感，我們推測G6PD缺乏癥可能與EV71感染所致手足口病有著密切關系。目前G6PD缺陷與EV71型手足口病關系的研究報道尚少，本次研究旨在探討G6PD缺陷對手足口病患兒EV71病毒易感性、感染后病情嚴重程度的影響，闡明G6PD缺乏癥與EV71型手足口病之間的關系。方法鑒于目前常見的G6PD活性檢測方法對男性缺乏者敏感，對女性缺乏者存在明顯的漏檢，故本次研究以男性兒童為研究對象。選取2011年6月至2012年10月我院收治的手足口病男性患兒220例為研究對象，其中145例為普通手足口?。ㄆ胀ńM），75例為重癥手足口病（重癥組）。手足口病診斷標準參照我國衛(wèi)生部2010年4月21日發(fā)布的手足口病診療指南（2010年版）。本研究的納入標準為同時滿足以下3個條件①符合手足口病的診斷標準②經(jīng)我院實驗室檢測大便病原學診斷為EV71感染③病程少于5天。排除標準為以下任一項者①近3個月內(nèi)曾輸血、溶血②家長拒絕行G6PD活性、谷胱甘肽GSH及丙二醛MALONDIALDEHYDE，MDA檢測。對照組同期在我院體檢的132例健康男性兒童。所有研究對象在收住院后24小時內(nèi)及手足口病恢復期分別采集靜脈血用于檢測血液中G6PD、GSH及MDA水平。根據(jù)急性期G6PD活性測定結果，普通組與重癥組分別分為普通（G6PD正常）組、普通（G6PD缺乏）組、重癥（G6PD正常）組與重癥（G6PD缺乏）組。220例患兒均按照指南給予治療，觀察記錄重癥組患兒的總熱程、精神異常時間、肢體抖動持續(xù)時間、病理征持續(xù)時間及住院天數(shù)。結果⑴對照組、普通組、重癥組中G6PD缺陷者分別為4例、15例、17例，所占比例分別為30％、1034％、2267％，普通組、重癥組G6PD缺陷率均較對照組高（均P＜005）。⑵重癥（G6PD缺乏）組患兒總熱程為635±215天，精神異常天數(shù)為265±093天，肢體抖動持續(xù)天數(shù)為309±103天，病理征持續(xù)時間為118±053天，住院天數(shù)為1059±232天，G6PD活性為52426±45061UL重癥（G6PD正常）組患兒總熱程為537±136天，精神異常天數(shù)為181±162天，肢體抖動持續(xù)天數(shù)為241±119天，病理征持續(xù)時間為066±086天，住院天數(shù)為874±304天，G6PD活性為284267±66564UL。G6PD缺陷患兒總熱程、精神異常天數(shù)、肢體抖動持續(xù)天數(shù)、病理征持續(xù)天數(shù)及住院天數(shù)均顯著長于G6PD正常者P＜005，G6PD缺乏癥患兒G6PD活性較G6PD活性正常者顯著降低P＜0001。⑶普通組急性期全血GSH含量為270±098MGGHB，血清MDA為380±110UMOLL，G6PD活性為296306±98836UL重癥組急性期全血GSH含量為228±151MGGHB，血清MDA為419±108UMOLL，G6PD活性為231716±115763UL對照組全血GSH含量為363±065MGGHB，血清MDA為341±052UMOLL，G6PD活性為326026±70183UL。急性期普通組和重癥組的GSH、G6PD水平均顯著低于對照組，MDA水平均顯著高于對照組P＜005重癥組的GSH、G6PD水平均顯著低于普通組，MDA水平顯著高于普通組P＜005。普通組恢復期全血GSH含量為263±083MGGHB，血清MDA為376±109UMOLL，G6PD活性為298411±97282UL重癥組恢復期全血GSH含量為241±091MGGHB，血清MDA為399±091UMOLL，G6PD活性為232477±114804UL。恢復期普通組與重癥組GSH、G6PD水平均比對照組低P＜005，MDA水平均較對照組高P＜005普通組與重癥組恢復期GSH、MDA水平比較均無顯著差異P＞005，普通組G6PD水平仍顯著高于重癥組P＜005。⑷普通G6PD正常組急性期的全血GSH為292±076MGGHB，血清MDA為362±101UMOLL，G6PD活性為324285±54926UL普通G6PD正常組恢復期的全血GSH為281±048MGGHB，血清MDA為371±157UMOLL，G6PD活性為326518±57445UL普通G6PD缺乏組急性期的全血GSH為077±012MGGHB，血清MDA為537±041UMOLL，G6PD活性為53822±49094UL普通G6PD缺乏組恢復期的全血GSH為108±020MGGHB，血清MDA為414±119UMOLL，G6PD活性為54818±48410UL重癥G6PD正常組急性期的全血GSH為275±084MGGHB，血清MDA為380±084UMOLL，G6PD活性為284267±66564UL重癥G6PD正常組恢復期的全血GSH為278±078MGGHB，血清MDA為392±114UMOLL，G6PD活性為284958±66591UL重癥G6PD缺乏組急性期的全血GSH為067±013MGGHB，血清MDA為553±067UMOLL，G6PD活性為52426±45061UL重癥G6PD缺乏組恢復期的全血GSH為116±026MGGHB，血清MDA為424±100UMOLL，G6PD活性為53426±44035UL。急性期及恢復期普通（G6PD正常）組GSH水平均較普通（G6PD缺乏）組高P＜001，重癥（G6PD正常）組GSH水平均較重癥（G6PD缺乏）組高P＜001。急性期普通（G6PD正常）組MDA水平較普通（G6PD缺乏）組低P＜001，重癥（G6PD正常）組MDA水平較重癥（G6PD缺乏）組低P＜001。在恢復期，普通（G6PD正常）組與普通G6PD缺乏組、重癥（G6PD正常）組與重癥（G6PD缺乏）組MDA水平比較差異均無統(tǒng)計學意義P＞005。普通（G6PD正常）組、重癥（G6PD正常）組急性期與恢復期GSH、MDA水平比較差異均無統(tǒng)計學意義（P＞005），普通G6PD缺乏、重癥（G6PD缺乏）組恢復期GSH水平均較急性期高P＜001，恢復期MDA水平均較急性期低P＜001。以上四組急性期與恢復期G6PD水平比較差異均無統(tǒng)計學意義P＞005。⑸急性期普通組GSH水平與G6PD活性呈正相關（R063，P＜0001），MDA與G6PD活性呈負相關R051，P＜0001。急性期重癥組GSH水平與G6PD活性呈正相關（R053，P＜0001），MDA與G6PD活性呈負相關（R057，P＜0001）?；謴推谄胀ńMGSH水平與G6PD活性呈正相關（R065，P＜0001），重癥組GSH水平與G6PD活性呈正相關（R048，P＜0001），普通組和重癥組MDA與G6PD活性均無相關性P＞005。結論從研究結果可知普通組、重癥組G6PD缺陷者所占比例均高于對照組，提示G6PD缺乏可能增加機體對EV71的易感性。本研究中，急性期普通組與重癥組GSH、G6PD水平比對照組低，MDA水平較對照組高，提示在EV71感染急性期，機體確實存在氧化應激。進一步分析發(fā)現(xiàn)，手足口病患兒GSH、MDA水平均受G6PD活性影響，GSH水平與G6PD活性呈正相關，MDA水平與G6PD活性呈負相關，以上結果提示G6PD缺陷者在EV71感染急性期，由于抗氧化能力不足，可能會出現(xiàn)高水平氧化應激，加重氧化應激損傷。本研究還發(fā)現(xiàn)重癥組中G6PD缺陷者病情好轉需時及住院時間均較G6PD活性正常者長，提示機體氧化應激的程度與患兒病情相符。本研究中，G6PD缺陷患兒恢復期GSH水平較急性期增高，MDA水平較急性期降低，且恢復期GSH水平與G6PD活性呈正相關，MDA水平與G6PD活性無相關性，以上結果提示G6PD缺陷患兒進入手足口病恢復期后，隨著氧化應激損傷的減輕，患兒的病情可能隨之好轉。手足口病患兒急性期與恢復期G6PD水平比較均無顯著差異，說明說明G6PD缺陷不因EV71感染而改變，G6PD活性不受EV71感染影響。EV71感染引起重癥手足口病的致病機制十分復雜，目前尚未清楚，本次研究結果在臨床上提示機體氧化應激反應可能是機制之一。廣東省于1989年開始在新生兒中逐步開展G6PD缺乏癥篩查，2003年廣東省衛(wèi)生廳制定了廣東省新生兒疾病篩查管理辦法（試行），明確指出G6PD缺乏癥為廣東省新生兒疾病篩查的病種之一。鑒于本次研究結果，對確診為G6PD缺乏癥的患兒，除了告知避免接觸誘發(fā)溶血的物質，還需告知其對病毒易感，在手足口病流行季節(jié)注意加強防護。檢測手足口病患兒G6PD活性，確定其是否存在G6PD缺陷，有助于評估患兒病情轉歸，警惕發(fā)展為重癥病例，對指導臨床診療、觀察病情和判斷預后具有重要臨床意義。

簡介：研究目的諾如病毒是常見的腹瀉病毒廣泛存在于環(huán)境中是引起非細菌性急性腸胃炎的主要病原之一。諾如病毒流行范圍廣傳播方式多樣遺傳信息變化大。本研究將20102011年收集的腹瀉樣品進行檢測并結合前期的資料從諾如病毒的感染情況及分子流行病學兩方面進行判斷分析為諾如病毒的檢測及預防提供基礎資料。研究方法將20102011年收集的樣品經(jīng)過前處理后提取核酸。一部分核酸用作REALTIMEPCR的模板并結合調查的資料從時間月份、年齡和性別等方面對這兩年諾如病毒的感染情況進行分析。另一部分采用RTPCR的方法分別用NVG1和NVGⅡ特異性引物對其進行擴增從分子水平分析近兩年諾如GⅠ和諾如GⅡ基因組的流行趨勢并著重分析GⅡ4型的流行狀況。研究結果1、2010年收集的925份標本中有506份標本來自男性419份標本來自女性三歲及三歲以下的有480份所占比例達52％。經(jīng)過REALTIMEPCR檢測共鑒定出陽性標本186份陽性率為2010其中有96份來自男性90份標本來自女性三歲及三歲以下兒童感染諾如病毒的陽性數(shù)為104份所占比例高達561041862011年收集的983份樣品中有573份標本來自男性410份標本來自女性其中571名患者的年齡小于3歲所占比例達58。經(jīng)REALTIMEPCR檢測共鑒定出陽性標本210份陽性率為2136其中有121份來自男性89份來自女性三歲及三歲以下兒童的陽性數(shù)為130份所占比例高達62130210。2、經(jīng)過RTPCR擴增后將有陽性條帶的樣品測序后進行比對分型。2010年共有85份樣品成功測序其中有78份樣品屬于NVGⅡ型分屬4種不同的基因型別7份樣品屬于NVGⅠ型分屬3種不同的基因型別。在GⅡ基因組中比例最高的是GⅡ42006B共檢測55份標本占所有成功測序標本的6455585其次是GⅡ42006VARIANT共檢測出17份陽性樣品占所有型別比的2011年共有60份樣品成功測序其中有55份屬于NVGⅡ型分屬7種不同的基因型5份屬于NVG1型分屬4種不同的基因型。在所測的GⅡ基因組中比例最高是GⅡ42006B共檢測出28份占所有基因型別比的467。其次是GⅡ42006BVARIANT共有10份陽性標本占所有基因型別比的167。研究結論1從這兩年的數(shù)據(jù)來看諾如病毒引起的腹瀉在任何時節(jié)均可發(fā)生。但檢出率較高的月份主要集中在37月份。在所有的腹瀉人群中以三歲以下兒童居多。將這兩年諾如病毒在性別感染上的差異通過SPSS軟件分析得到2010年卡方檢驗的P值03440052011年卡方檢驗的P值0824005這兩年的檢測結果均無統(tǒng)計學差異。2無論2010年還是2011年NVGⅡ基因組所占比例都非常高分別達到9177885和9165560。相對于2010年2011年諾如病毒的基因型別更趨向多元化。2010年GⅡ42010開始出現(xiàn)在所有檢測出的基因型別中比值高達2001785。GⅡ42006BVARIANT基因型是2011年新發(fā)現(xiàn)的基因亞型。2011年檢測出的基因型別中有10份屬于GⅡ42006BVARIANT比例高達1671060。從這兩年的流行趨勢看NVGⅡ4基因型的遺傳信息較易發(fā)生變化一旦出現(xiàn)新的基因亞型便具有很強的流行能力。

簡介：目的了解2009年邯鄲市1～15歲健康人群EV71IGG和COXA16IGG攜帶狀況，分析其流行病學特征，探討抗體水平與手足口病發(fā)病率的關系，了解手足口病主要病原的流行規(guī)律，為手足口病的綜合防控提供科學依據(jù)。方法1對邯鄲市2009年手足口病按地區(qū)進行統(tǒng)計，按照報告發(fā)病率分為高中低三個層次。2根據(jù)文獻報道和邯鄲市2009年手足口病報告發(fā)病率，預測人群腸道病毒感染率，確定樣本量。3采用橫斷面調查方法，按照分層多階段隨機抽樣的原則，抽取發(fā)病率高中低三層1～15歲人群，采取集中調查和入戶調查相結合的方式，現(xiàn)場填寫登記表，采集調查對象靜脈血，分離血清。4采用酶聯(lián)免疫吸附試驗ELISA，檢測EV71IGG和COXA16IGG。5采用EPIDATA31軟件進行數(shù)據(jù)錄入，采用SPSS130統(tǒng)計軟件，利用卡方檢驗、相關分析及線性回歸分析方法，分析EV71IGG和COXA16IGG攜帶情況，分析其與手足口病發(fā)病率之間的關系。結果12009年邯鄲市手足口病發(fā)病率地區(qū)差異大，最高為4822110萬，最低為277710萬。病例男女性別比例為1671，散居兒童占8836％，5歲以下占病例總數(shù)的9215％。2實際調查856人，其中男性450人，女性406人，男女性別比為11∶1。各年齡組性別比在09～13之間，符合邯鄲市人口學特征。3EV71IGG陽性率6379％男性陽性率6200％；女性陽性率6576％，男女性別之間無統(tǒng)計學差異。4COXA16IGG陽性率6764％，男性COXA16IGG陽性率6356％，女性陽性率7217％。女性兒童高于男性兒童X27232，P0003＜001，其中1歲和14歲男、女COXA16IGG陽性率差異存在統(tǒng)計學意義，女性高于男性（P＜005）。5EV71IGG和COXA16IGG陽性率高低趨勢不一致，在1歲、5歲和10歲峰值存在此高彼低的反向分布趨勢。62009年各縣區(qū)手足口病發(fā)病率與2009年6歲以下兒童血清COXA16IGG陽性率負相關（Y689X72572，F(xiàn)843，P0044＜005），而與EV71IGG陽性率正相關（Y554X8837，F(xiàn)1063，P003＜005）。2008年和2010年手足口病發(fā)病率與兒童抗體陽性率無關。7同一地區(qū)調查對象的血清EV71IGG和COXA16IGG陽性率負相關（Y115X14114，F(xiàn)1650，P0015＜005），兩者存在此高彼低的互補現(xiàn)象。結論12009年邯鄲市人群EV71IGG和COXA16IGG陽性率均在60％以上，處于較高水平。21～5歲兒童血清EV71IGG陽性率和COXA16IGG陽性率均有遞增趨勢，6～10歲相對平穩(wěn)，11歲后逐漸下降。COXA16IGG維持時間相對較長。3同一個體可以感染EV71和COXA16兩種病原，產(chǎn)生兩種抗體，二者不存在交叉保護作用。4EV71IGG和COXA16IGG陽性率呈負相關，二者陽性率變化呈現(xiàn)互補性，存在此消彼長的趨勢。5各縣區(qū)COXA16IGG陽性率與2009年手足口病報告發(fā)病率呈負相關，EV71IGG陽性率與2009年手足口病報告發(fā)病率呈正相關。

簡介：點擊查看更多hIL-24慢病毒載體的構建及其對瘢痕疙瘩成纖維細胞生物學特性的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：把感染柞蠶腎的APNPV進行分離純化提取較純凈的APNPV抽提APNPV基因組DNA并對APNPV構建了HINDⅢ、SALⅠ兩種限制性內(nèi)切酶的DNA片段文庫進行了部分基因的序列分析為該病毒的全基因組序列的進行打下了基礎對APHPV、WBMNPV野桑蠶、BMNPV進行RAPD分析研究結果表明APNPV與CFNPV的進化關系最近與WBMNPV的親緣關系較遠與BMNPV的親緣關系最遠為了便于檢測核型多角體病毒對昆蟲的感染情況將熒光標記分子GFP克隆到昆蟲桿狀病毒轉移載體PBACPAK8中與經(jīng)BSU36I酶切線型化的ACBACPAK6共轉染SF21細胞經(jīng)空斑純化獲得重組病毒ACBACPAK6GFP可以檢測病毒在不同細胞中的增殖和在蟲體的不同組織中的增殖把單一的病毒粒子分別感染BMN和SF21細胞作為對照同時把不同的病毒粒子混合再分別感染BMN和SF21細胞研究結果表明APNPV病毒不能感染BMN和SF21細胞當其DNA單獨轉染到細胞時細胞在不同程度上表現(xiàn)出凋亡癥狀這是病毒與細胞之間不親和的表現(xiàn)ACMNPV和BMNPV在親和的病毒的協(xié)同下分別能在BMN和SF21細胞中復制BMNPV在單獨感染SF21細胞時表現(xiàn)出的個別細胞有類似多角體的顆粒的現(xiàn)象有待構建重組GFP的BMNPV以進一步證實ACMNPV和BMNPV的病毒粒子可以進入BMN及SF21細胞并能釋放出DNA這是以前試驗并沒有注意到的APNPV的部分序列的同源性分析表明與CFNPV的親緣關系較近而與BMNPV及ACMNPV的親緣關系較遠從感染性來分析可能親緣關系近的病毒之間更容易引起原本不具備侵染性的病毒產(chǎn)生侵染特性這可能為宿主域拓展的研究提供有價值的信息

簡介：2009年青島市腸道病毒71型手足口病臨床特征及病原學研究摘要目的探討2009年5月2009．10月青島市腸道病毒7L型EV71所斂小兒手足口病的流行特點、臨床特征及病原學特點。方法1收集2009年5月2009年10月青島大學醫(yī)學院附屬醫(yī)院和青島市兒童醫(yī)院EV71檢測為陽性的手足口病患兒158例完整的臨床資料，根據(jù)病情輕重分成輕癥組、腦炎組、肺水腫組；2比較各組的癥狀、體征、臨床特點、實驗室檢測指標；3隨機在各組抽取10例標本用EV71的型特異引物進行RTPCR擴增，擴增產(chǎn)物對其VPL部分序列進行測序，結果與GENBANK的相關序列進行對比，同時用NCBI上的BLAST軟件，分析測序結果。結果1臨床資料①發(fā)病高峰在1～3歲，男女發(fā)病基本相同，農(nóng)村患兒占大多數(shù)②腦炎組和肺水腫組患兒年齡較輕癥組小PO．05；③多數(shù)患兒以皮疹、發(fā)熱為首發(fā)癥狀，部分也可表現(xiàn)為咳嗽、流涕等④輕癥組大多無熱或低熱，腦炎組以RII、R活熱為土，帥水腫組以。巧熱為主，肌水腫紕叮吸頻率與心率明顯高于另外兩組PO．05；⑤肺水腫組患兒的血象、血糖、轉氨酶、心肌酶明顯高于另兩組PO．05。2病原學分析堇EV71VPL部分基因序列與GENBANK中相關序列的同源性在96％以上；②氨基酸序列與GENBANK中相關序列的同源性在96％以上；③此次青島流行EV71毒株與安徽阜陽株有高度同源性，屬于C4型。結論1此次流行的EV71手足口病，3歲為發(fā)病高峰。男女發(fā)病約1．71農(nóng)村患兒占多數(shù)2病情輕重與年齡相關，年齡越小，病情越重；3重癥病人呼吸、心率、外周血象、血糖等明顯升‘高4EV71VPL部分序列經(jīng)過測序、與GENBANK相關序列比對后，發(fā)現(xiàn)同源性都在96％以上，沒有發(fā)生基因及氨基酸的改變；5患兒病情的輕重與基囚變異問沒有對應關系；6推測病情輕重與患兒自身免疫狀態(tài)，生活環(huán)境有關。碩士研究生錢娜．，．指導教師陳宗波教授關鍵詞腸道病毒71型；手足口病；腦炎肺水腫YOUNGERTHEMORESEVERECONDITION；3ELEVATEDOFBREATHINGHEARTRATE，PERIPHERALBLOODGLUCOSETRANSAMINASE．ANDMYOCARDIALENZYMESARETHEEARLYWARMINGFACTORSOFPROGRESSION；4NOVARIATIONOFGENESANDAMINOACID；5THEREISNOCORRESPONDINGRELATIONSHIPBETWEENSEVERITYANDGENETICVARIATION；6PROBABLYSEVERITYINCHILDRENISRELATEDTOAUTOIMMUNECONDITIONANDLIVINGENVIRONMENT．POSTGRADUATESTUDENTNAQIANPEDIATRICSDIRECTEDBYPROF．ZONGBOCHENKEYWORDSENTEROVIRUS71；HANDFOOTMOUTHDISEASE；ENCEPHALITIS；PULMONARYEDEMA

簡介：第一部分妊娠期婦女巨細胞病毒感染流行病學調查目的通過隊列研究分析妊娠期婦女巨細胞病毒（CYTOMEGALOVIRUS，CMV）感染的流行病學資料，探討我院妊娠期婦女CMV感染的危險因素，為CMV感染防治提供科學依據(jù)。方法選取2011年5月至2012年5月在我院進行妊娠期體檢并有意向在我院分娩的孕婦共3731例，對上述孕婦進行問卷調查，并分別在妊娠早期和妊娠中期進行CMV特異性IGG和IGM篩查。IGM陽性孕婦所生新生兒生后檢測抗體明確是否發(fā)生宮內(nèi)感染，IGM陰性孕婦所生新生兒通過電話、門診及主動反饋以隨訪是否發(fā)生感染。多因素LOGISTIC逐步回歸分析CMV感染的危險因素。結果本研究共有1915名孕婦有完整血清學和問卷資料。我院產(chǎn)科門診調查妊娠期婦女CMVIGG陽性率為9583％，妊娠期活動性感染共6例，占029?；顒有愿腥驹袐D所生子代均未發(fā)生先天性CMV感染。多因素LOGISTIC逐步回歸分析得出妊娠期婦女CMV感染與年齡≥28歲，居住地在農(nóng)村，受教育程度低，家中有兒童和居住環(huán)境差有關，（95CI）分別為247（119，512），4040（527，30968），431（200，931），485（122，1928），284（126，628）。結論本研究得出孕婦CMVIGG陽性率為9583，活動性感染率029。孕婦年齡≥28歲，居住地在農(nóng)村，受教育程度低，家中有兒童和居住環(huán)境差是孕婦CMV感染的危險因素。第二部分宿主MIRNA與巨細胞病毒相關嬰兒肝炎綜合征預后相關性研究目的探討HCMV感染嬰兒肝炎綜合征治療前后外周血MIRNA水平變化及與生化免疫指標相關性。方法收集HCMV感染所致嬰兒肝炎綜合征患兒44例，分為更昔洛韋（GANCICLOVIR，GCV）不敏感組和敏感組，對照組15例。病例組分別在GCV治療前2日和停藥后（或用藥第4周末），采集外周靜脈血1ML，抽提MIRNA，RTPCR方法檢測HSAMIR92A，HSAMIR96，HSAMIR433和HSAMIR183的表達水平，結果用相對表達量表示，并與臨床指標進行相關性分析。組間比較選用T檢驗，相關性分析選用線性回歸和SPEARMAN等級回歸，P結果病例組HSAMIR92A，HSAMIR96，HSAMIR433和HSAMIR183表達水平均高于對照組；治療前不敏感組HSAMIR96表達水平為124±062低于敏感組患兒543±111，T241，P結論HSAMIR96和HSAMIR183在GCV療效不同的兩組間存在差異，具有預測病程的價值，HSAMIR92A和HSAMIR433與ALT和淋巴細胞計數(shù)等指標具有一定相關性，可以協(xié)助判斷病程及預后。

簡介：目的探索影響貴陽市乙型病毒性肝炎傳播的影響因素，并針對這些因素提出相應的預防措施，從而降低該市乙肝的發(fā)病率，減少對家庭及社會帶來的經(jīng)濟損失。方法回顧性分析根據(jù)貴陽市疾病預防控制中心傳染病監(jiān)測管理數(shù)據(jù)庫分析貴陽市2005年2013年乙肝的發(fā)病情況；現(xiàn)況調查采用整群抽樣和典型調查相結合的方法，選擇2014年1月2014年6月期間，在貴陽市12家醫(yī)院就診的乙肝患者317例為病例組研究對象，每一調查對象由臨床專業(yè)醫(yī)生依據(jù)乙型病毒性肝炎診斷標準WS2992008進行確診；按照病例對照配對原則選擇同期在同家醫(yī)院住院的內(nèi)科或外科就診的非乙肝患者317例為對照組，對照組與病例組性別一致，年齡相差不超過兩歲。采用統(tǒng)一問卷對病例及對照進行一對一的問卷調查，調查內(nèi)容包括一般情況、乙肝知曉情況、免疫史、危險因素暴露史和乙肝現(xiàn)病史，以乙肝傳播途徑的認知水平和乙肝疫苗的認知水平為主要評價指標，對乙肝傳播相關影響因素進行單因素及后退法LOGISTIC多因素分析。結果（1）2005年2013年，貴陽市的乙肝發(fā)病率變化情況2005年2007年貴陽市乙肝發(fā)病率從616310萬上升至1006810萬，高于我國和貴州省同期的乙肝發(fā)病率；2007年2009年則維持在較高的水平（年均發(fā)病率983510萬）；2009年以后乙肝的發(fā)病率呈現(xiàn)下降趨勢，至2011年降至357510萬；2012年以后又呈上升趨勢。（2）貴陽市乙型病毒性肝炎傳播因素分析單因素分析與LOGISTIC回歸分析結果顯示一致的乙肝傳播的危險因素是“有過針灸治療史”、“有過意外刺傷史”、“母親患過乙肝”、“父親患過乙肝”以及“與他人共用浴巾”等5個因素，其中多因素分析中，值最高的是“母親患過乙肝”（12598），而“接受過乙肝相關知識宣傳教育”、“接種過乙肝疫苗”、“有過獻血史”以及“性生活使用避孕套”等4個因素為乙肝傳播的保護因素。（3）調查對象乙肝傳播途徑的認知水平分析病例組能夠正確認識乙肝三大傳播途徑（血液傳播、性傳播、母嬰垂直傳播）的占032％，仍有3281的人對乙肝的傳播途徑?jīng)]有認知；而對照組能夠正確認識乙肝三大傳播途徑（血液傳播、性傳播、母嬰垂直傳播）的僅占158，仍有3438的人對乙肝的傳播途徑?jīng)]有認知；病例組與對照組在是否知道血液傳播途徑以及性接觸傳播途徑兩個方面差異有統(tǒng)計學意義（P結論（1）貴陽市近年乙肝的發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢；（2）貴陽市人群乙肝傳播的主要危險因素為“有過針灸治療史”、“有過意外刺傷史”、“母親患過乙肝”、“父親患過乙肝”以及“與他人共用浴巾”；保護因素有“接受過乙肝相關知識宣傳教育”、“接種過乙肝疫苗”、“有過獻血史”以及“性生活使用避孕套”。（3）干預措施建議加強對人群乙肝相關知識的宣傳教育，尤其是對健康人群開展乙肝的預防宣傳，提高人群對乙肝的認知水平；盡量減少針灸針等重復使用并嚴格做好消毒措施；做好對廢棄針頭及醫(yī)療器械的存放銷毀工作，防止對人群造成意外刺傷；浴巾做到個人專用；推薦性生活時使用避孕套；進一步加強在人群中推廣乙肝疫苗接種，提高人群的疫苗接種率，尤其是在疫苗接種后及時進行乙肝抗體的檢測并在抗體滴度降低的情況下及時補種；提高新生兒首針及時接種率及全程接種率，最大經(jīng)濟程度地降低人群中乙肝的發(fā)病率。

簡介：生殖器皰疹GENITALHERPES，GH主要由單純皰疹病毒Ⅱ型HERPESSIMPLEXVIRUSⅡ，HSV2感染所致。GH近年來發(fā)病率明顯上升，是當前全球范圍內(nèi)對人類健康危害較嚴重的性傳播疾病。HSV2初發(fā)感染后，感染者易終生攜帶病原體，并以潛伏感染的形式局限在感覺神經(jīng)后根。該病易復發(fā)，目前尚無徹底治愈的方法，且發(fā)病率逐年上升。研制有效的生殖器皰疹病毒疫苗，是預防和治療單純皰疹病毒Ⅱ型HSV2感染的關鍵。近年來，新型的DNA疫苗由于能誘導出較好的細胞免疫和體液免疫而日益受到重視。為研制有效安全，免疫原性好的疫苗，各國學者一直不斷地探討，本研究針對Ⅱ型單純皰疹病毒HSV2包膜糖蛋白GD以及包膜糖蛋白GB的細胞毒性T淋巴細胞CYTOTOXICTLYMPHOCYTE，CTL表位，構建重組真核表達質粒PVAXGDCTL。研究重組質粒PVAXGDCTL在COS7細胞中的表達，評價其激發(fā)動物產(chǎn)生免疫反應，特別是細胞免疫反應的應答。首先根據(jù)GENEBANK提供的HSV2333株糖蛋白D基因GD序列設計PCR引物，以已構建好的PCGD為模板，特異性擴增HSV2GD片段，將其克隆于PVAX1載體中構建質粒PVAXGD，再將其雙酶切后引入CTL片段，構建重組質粒PVAXGDCTL，轉化大腸桿菌后篩選陽性克隆進行酶切及測序鑒定。將重組真核表達質粒PVAXGDCTL轉染哺乳動物細胞COS7，免疫組化、蛋白電泳及免疫印跡方法鑒定重組質粒的表達情況。重組真核表達質粒PVAXGDCTL肌注免疫BALBC小鼠，發(fā)現(xiàn)PVAXGDCTL可誘導小鼠產(chǎn)生高滴度GDIGG。ELISA法檢測Γ干擾素INTERFERON，IFNΓ結果表明該重組質粒免疫小鼠后對機體刺激產(chǎn)生INFΓ，提示能刺激病毒感染細胞表達MHCI類分子，對細胞免疫具有明顯促進作用。ELISA法檢測白細胞介素4INTERLEUKIN，IL4結果表明該重組質粒對體液免疫的促進作用與陽性對照PVAXGD質粒相比差異不顯著。MTT法檢測脾淋巴細胞增殖結果顯示PVAXGDCTL具有一定的刺激脾淋巴細胞增殖能力。CD4、CD8T細胞亞群分析結果顯示，該重組質粒刺激小鼠機體產(chǎn)生CD4T與CD8T細胞數(shù)量均有升高，但CD4TCD8T細胞比值結果顯示PVAXGDCTL組較陽性對照PVAXGD組相比差異無顯著意義，提示重組質粒PVAXGDCTL與陽性對照PVAXGD質粒對刺激機體CD4T、CD8T細胞數(shù)量升高程度相當。本研究中所選的真核表達質粒PVAX1是目前唯一符合FDA標準的DNA疫苗專用載體，選擇HSV2糖蛋白GD基因片段和糖蛋白GB的CTL表位作為構建重組DNA疫苗的保護性抗原編碼基因。HSV包膜糖蛋白GD是抗HSV感染中最重要的保護性抗原，含有GD目的基因的疫苗在細胞內(nèi)表達抗原，模擬自然感染狀態(tài)，對CD4輔助性T細胞及CD8殺傷性T細胞均有激活作用，能誘導細胞免疫及體液免疫，引起高滴度的中和抗體，激發(fā)遲發(fā)超敏反應及細胞增殖反應，保護動物免受HSV的攻擊，抑制隱性感染的發(fā)生。CTL表位是內(nèi)源性抗原經(jīng)APC加工及MHC提呈給TCR的短肽，是介導細胞免疫應答的關鍵部位。可誘導MHCI限制的CD8T細胞的CTL反應和MHCⅡ限制的CD4T細胞的TH1反應，并能激活B細胞產(chǎn)生中和抗體。本研究將GD目的基因的抗原優(yōu)勢片斷與CTL表位聯(lián)合構建到PVAX1載體上，實驗結果表明該重組DNA疫苗可誘導產(chǎn)生高滴度中和抗體，刺激高水平INFΓ產(chǎn)生，從而促進MHCI類分子的表達和抗原提呈，促進CTL殺傷病毒感染細胞，對體液免疫和細胞免疫均有增強作用，尤其是對細胞免疫應答的增強作用，較之前構建的PVAXGD質粒有顯著提高，可誘發(fā)更特異的針對HSV2的CTL反應。因此，我們構建的HSV2重組DNA疫苗是一種很有希望的人用生殖器皰疹DNA疫苗，具有良好的臨床應用開發(fā)前景。

簡介：碩士專業(yè)學位論文論文題目人鼻病毒及鼻病毒C組在蘇州地區(qū)呼吸道感染住院兒童中的流行病學研究研究生姓名李莉指導教師姓名嚴永東專業(yè)名稱兒科學研究方向呼吸論文提交日期2015年4月人鼻病毒及鼻病毒C組在蘇州地區(qū)呼吸道感染住院兒童中的流行病學研究中文摘要I

簡介：點擊查看更多山羊BMSCs的體外分離培養(yǎng)和生物學特性的研究及腺病毒擴增的實驗研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：發(fā)熱伴血小板減少綜合征SEVEREFEVERWITHTHROMBOCYTOPENIASYNDROME，SFTS，是一種新發(fā)出血熱性傳染病，由一種新的布尼亞病毒，簡稱SFTSV引起。SFTS每年的發(fā)病率大約是每10萬農(nóng)村人口中有5人發(fā)病，主要感染中老年人，病死率平均是12％。自2009年在中國發(fā)現(xiàn)以來，SFTSV已在韓國和日本報道，相似病毒在美國報道。SFTSV是布尼亞病毒科白蛉病毒屬的單股負鏈RNA病毒，包含L、M、S三個片段，分別編碼RNA聚合酶、糖蛋白GN、GC前體、核蛋白NP和非結構蛋白NSS。其中GN、GC最可能誘導中和抗體的產(chǎn)生，目前已有研究發(fā)現(xiàn)能結合M片段的單克隆抗體MAB45可以中和SFTSV而S片段最為保守，NP最易表達，常被用來做免疫檢測用。本研究旨在構建NP、GN、GC及M片段分段蛋白的真核表達載體，表達相應蛋白，從抗原性和免疫原性方面檢測NP的生物學活性，為進一步研究中和抗體做好鋪墊。目的1、構建核蛋白NP，糖蛋白GN、GC真核表達載體。2、構建M片段（編碼糖蛋白）分段真核表達載體。3、表達核蛋白，研究重組核蛋白NP的生物學活性。方法1、設計引物擴增NP、GN和GC。2、設計引物分20段擴增M片段M1M20，每段重疊30個堿基。3、設計引物分別擴增NP、GN和M1，建立與GFP的融合蛋白序列，監(jiān)測蛋白表達情況。3、將目的基因與克隆載體19TSIMPLE連接擴增后，再與表達載體PVAX1連接。4、將目的基因PVAX1構建的表達載體用陽性脂質體法轉染至VERO細胞，在VERO細胞內(nèi)表達，用WESTERNBLOT、間接免疫熒光、顯微鏡觀察融合蛋白熒光的方法檢測蛋白表達，用鎳柱純化帶HIS標簽的NP。5、包被純化的NP，包被板與商品化試劑盒同時檢測羊血清中SFTSV抗體，比較檢測的效果。6、用純化的NP免疫BALBC小鼠，測定血清滴度。結果1、構建出核蛋白NP，糖蛋白GN、GC，M片段分段蛋白的真核表達載體，構建出NP、GN、GC、M1分別和GFP的融合蛋白表達載體，測序正確。檢測到上述蛋白在VERO細胞中的表達。2、用NP自行包被的包被板與商品化的試劑盒在檢測羊血清陽性率的效果上，沒有統(tǒng)計學差異。3、用NP免疫BALBC小鼠獲得有效陽性血清。結論1、構建的PVAX1真核表達載體，轉染VERO細胞后可表達NP、GN、GC及M片段的分段蛋白，但M片段編碼的蛋白表達量較低。2、用PVAX1構建的表達載體在VERO細胞中表達出的NP在ELISA和免疫動物方面具有良好的生物學活性。

簡介：分類號墾12墨魚【DC密級重慶醫(yī)科大學碩士學位論文重慶地區(qū)呼吸道感染住院患兒病毒病原學與病情嚴重論文題目程度相關性分析作者姓名彭才靜指導教師姓名職稱、單位名稱劉恩梅教授重慶醫(yī)科大學附屬兒童醫(yī)院申請學位級別碩士學科、專業(yè)名稱兒科學論文答辯年月2012年5月2012年5月目錄符號說明1中文摘要2英文摘要4論文正文重慶地區(qū)呼吸道感染住院患兒病毒病原學與病情嚴重程度相關性分析。，6研究背景61材料與方法82研究結果143討論27全文小結31參考文獻32文獻綜述37致謝44攻讀學位期間發(fā)表的文章目錄45

簡介：目的研究拉米夫定治療慢性乙型肝炎出現(xiàn)病毒學反彈患者乙型肝炎病毒YMDD變異情況。探討乙肝病毒YMDD變異與肝臟功能損傷程度、血清HBVDNA的關系。方法選取402例來自本院感染科門診和病房的服用拉米夫后出現(xiàn)HBVDNA反彈的慢性乙型肝炎患者血清樣品所有患者皆經(jīng)HBVDNA熒光定量和肝功能檢測確認。應用PCR熒光法定性檢測YMDD變異情況。并研究其與肝臟功能損傷程度及血清HBVDNA之間的關系。結果402例患者有309例檢測出YMDD變異7687％其中120例為YVDD變異74例為YIDD變異115例為YVDDYIDD聯(lián)合變異309例YMDD變異患者中同時檢測出變異株與野生株占6926214309僅檢測出變異株占307495309。另外93例為YMDD野生型陽性。發(fā)生YIDD、YVDD聯(lián)合變異患者其血清HBVDNA含量顯著高于單一發(fā)生YIDD或YVDD變異的患者P003、P000發(fā)生YMDD聯(lián)合突變的乙肝患者其肝臟功能損傷的程度明顯較單一發(fā)生YIDD或YVDD變異者嚴重P001、P003。93例野生株陽性患者與變異株比較患者其肝臟功能損傷的程度及血清HBVDNA水平無明顯差異P033、P019。結論多數(shù)拉米夫定治療慢性乙型肝炎出現(xiàn)病毒學反彈患者體內(nèi)可以檢測出YMDD變異株且以變異株與野生株共存為主拉米夫定治療發(fā)生YIDD、YVDD混合突變的患者其血清HBVDNA含量顯著高于單一發(fā)生YIDD或YVDD變異的患者發(fā)生YMDD共生變異的乙肝患者其肝功能損傷的程度明顯重于單一發(fā)生YIDD或YVDD變異的患者。拉米夫定治療慢性乙型肝炎出現(xiàn)病毒學反彈患者中野生株陽性患者與變異株比較患者其肝臟功能損傷的程度及血清HBVDNA水平無明顯差異。