甜菜M14品系BvM14-Rab、BvM14-MADS box基因的表達(dá)分析.pdf

1、甜菜M14品系單體附加系是將優(yōu)良遺傳育種材料二倍體栽培甜菜(BetavulgarisL.)與四倍體野生白花甜菜(BetacorollinaeZoss.)進(jìn)行雜交，再與栽培甜菜回交，篩選出的帶有白花甜菜第9號(hào)染色體的單體附加系，該條染色體在栽培甜菜全套染色體的背景下，使得甜菜M14品系具備野生種白花甜菜的多種優(yōu)良特性，因此，對(duì)甜菜M14品系特異表達(dá)基因的研究具有重要的價(jià)值和意義。
　　 Rab蛋白家族作為細(xì)胞內(nèi)囊泡運(yùn)輸重要的分子開

2、關(guān)，可以與GTP的結(jié)合和水解過程相偶聯(lián)，從而調(diào)節(jié)蛋白的合成、內(nèi)吞、降解和分泌等活動(dòng)，此外，Rab蛋白還參與植物的抗逆過程。MADS-box基因家族主要影響植物花期及花器官的發(fā)育并參與植物的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)，是一類在植物生長(zhǎng)發(fā)育過程中起著重要作用的轉(zhuǎn)錄因子，具有調(diào)控其它基因轉(zhuǎn)錄的功能。
　　 課題組前期工作已經(jīng)利用DDRT-PCR、SSH和RACE等技術(shù)獲得了甜菜M14品系特異表達(dá)的BvM14-Rab基因和BvM14-MADSbox基因的

3、cDNA全長(zhǎng);成功構(gòu)建了BvM14-Rab基因的原核表達(dá)載體pET-28a-BvM14-Rab，通過正交試驗(yàn)，得到融合蛋白BvM14-Rab的最優(yōu)表達(dá)條件;并獲得了轉(zhuǎn)甜菜BvM14-Rab基因的T2代煙草，進(jìn)行了分子水平的表達(dá)檢測(cè)，但尚未進(jìn)行蛋白質(zhì)水平的檢測(cè)。
　　 本研究是基于課題組前期的工作基礎(chǔ)，對(duì)轉(zhuǎn)甜菜BvM14-Rab基因的T2代煙草，進(jìn)行蛋白質(zhì)表達(dá)水平的檢測(cè)，并分別對(duì)甜菜BvM14-Rab基因和BvM14-MADSbo

4、x基因進(jìn)行組織特異性表達(dá)分析，為深入探究基因的表達(dá)提供依據(jù)。
　　 本試驗(yàn)對(duì)課題組前期獲得的原核表達(dá)載體pET-28a-BvM14-Rab進(jìn)行誘導(dǎo)，檢測(cè)出BvM14-Rab融合蛋白以包涵體的形式成功表達(dá)，通過Ni離子親和層析，被含有咪唑濃度為300mmol/L的EluteBuffer大量洗脫出BvM14-Rab蛋白，并根據(jù)BvM14-Rab融合蛋白具有的9個(gè)抗原決定簇，免疫新西蘭大白兔制備抗血清，利用得到的陽性血清經(jīng)Westem