BvM14-CaM基因在煙草中的轉(zhuǎn)化及表達.pdf

1、甜菜M14品系是由野生白花甜菜(Beta corolliflora Zoss.)與栽培甜菜(Betavulgaris L.)種間雜交，進一步回交獲得的甜菜無融合生殖單體附加系。甜菜M14品系染色體組不但含有18條栽培甜菜染色體，還含有一條白花甜菜第9號染色體，而且這條附加的染色體的傳遞率高達96.5％。因此，甜菜M14品系是研究無融合生殖的絕佳材料之一。
　　 在本實驗室的前期工作中，以栽培甜菜為對照，已經(jīng)從甜菜M14品系中獲得

2、了298個特異的ESTs，而且已經(jīng)全部進行了測序和生物信息學的分析；然后，利用RACE技術(shù)從甜菜M14品系的298個ESTs中克隆得到了甜菜M14品系表達基因BvM14-CaM基因的cDNA全長。對BvM14-CaM基因的生物信息學分析結(jié)果顯示：BvM14-CaM基因cDNA與不同物種的鈣調(diào)蛋白基因的核酸序列同源性非常高；BvM14-CaM基因編碼的蛋白與不同植物中的鈣調(diào)蛋白也都有很高的相似性。研究表明鈣調(diào)蛋白與植物的抗逆性密切相關(guān)。<

3、br>　　 本實驗將BvM14-CaM基因的cDNA片段全長轉(zhuǎn)入模式植物煙草中，研究BvM14-CaM基因與植物抗逆性間的關(guān)系，驗證BvM14-CaM基因的功能。實驗中利用表達載體pBI121與BvM14-CaM基因構(gòu)建了植物表達載體pBI-M14-CaM-TNOS-PCaMV35S，并將其導入根癌農(nóng)桿菌EHA105中。利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化系統(tǒng)，將攜帶有pBI-M14-CaM-TNOS-PCaMV35S質(zhì)粒的農(nóng)桿菌利用葉盤法轉(zhuǎn)入模式植物煙草

4、中，獲得轉(zhuǎn)基因植株。經(jīng)基因組DNA的PCR、RT-PCR、Northern印跡等分子生物學檢測及GUS組織化學染色檢測后表明，BvM14-CaM基因已轉(zhuǎn)入煙草中。
　　 對轉(zhuǎn)BvM14-CaM基因的煙草植株進行低溫(4℃)、高溫(42℃)、高滲和高鹽四種脅迫處理，處理完畢后觀察植株的變化，結(jié)果顯示：由于BvM14-CaM基因的轉(zhuǎn)入，使煙草植株對這四種逆境環(huán)境的適應性明顯提高。
　　 實驗結(jié)果表明：甜菜M14品系表達基因B