SP1、KLF4和P21在卵巢漿液性腺癌中的表達(dá)及意義的研究.pdf

1、背景：卵巢惡性腫瘤病死率高、預(yù)后差，嚴(yán)重威脅了女性的生命和健康。其中上皮性惡性腫瘤占85％~90%，卵巢漿液性癌是卵巢上皮性惡性腫瘤中最常見的一種，其預(yù)后與臨床期別、病理類型、細(xì)胞分化程度、術(shù)后殘存癌灶的大小及腫瘤細(xì)胞對(duì)化療的敏感性有關(guān)。卵巢上皮性癌的發(fā)病學(xué)說——二元論，已被廣泛接受及認(rèn)可，根據(jù)卵巢癌二元論學(xué)說，將漿液性卵巢癌分為I型和II型。I型卵巢癌分化程度高，惡性程度低，主要是來自卵巢交界性腫瘤和子宮內(nèi)膜異位，鏡下常見良性-交界性

2、-癌的過渡，主要包括：低級(jí)別漿液性癌、低級(jí)別子宮內(nèi)膜癌、透明細(xì)胞癌及黏液性癌等。II型卵巢癌，分化程度低，惡性程度高，多來源于輸卵管上皮，易于早期轉(zhuǎn)移，主要包括：高級(jí)別漿液性癌、低分化子宮內(nèi)膜樣癌、未分化癌及癌肉瘤等。因?yàn)槁殉舶┑脑缙谠\斷對(duì)其預(yù)后很關(guān)鍵，所以目前找到特異的診斷指標(biāo)或有效的治療方案是治療卵巢癌的首要任務(wù)。
　　轉(zhuǎn)錄因子是一種具有特殊結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)分子，能夠行使調(diào)控基因表達(dá)的功能。SPl/Krüppel樣轉(zhuǎn)錄因子(Spl

3、-like and Krüppel-like transcription factors, SP1/KLFs)參與了細(xì)胞的增殖與分化。SP1是第一個(gè)被克隆的Sp/KLF家族中的轉(zhuǎn)錄因子，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中廣泛表達(dá)，目前關(guān)于SP1的研究已經(jīng)有很多，SP1已作為促癌蛋白被大家所熟知，但其在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的作用還未完全清楚，它在漿液性卵巢癌中的表達(dá)情況還有待進(jìn)一步研究。
　　Krüppex樣鋅指轉(zhuǎn)錄因子(Krüppel-like t

4、ranscription factors, KLFs)是SPl/Kruppel樣轉(zhuǎn)錄因子家族中的一個(gè)亞家族，KLFs對(duì)不同基因啟動(dòng)子的GT盒具有不同的親和力，因此KLFs因子在不同組織中既可作為轉(zhuǎn)錄激活因子，也可作為轉(zhuǎn)錄抑制子。KLFs在細(xì)胞增殖、分化、調(diào)亡中起重要作用。KLF4在人類組織中廣泛表達(dá)，其與SP1在鋅指的C-端具有高度同源性，已有研究證實(shí)SP1與KLF4在胰腺癌、胃癌中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，在多數(shù)腫瘤細(xì)胞中KLF4為抑癌基因，例

5、如宮頸癌，肝癌，皮膚癌等，而在乳腺癌，口腔癌中是癌基因，但其在卵巢癌中的作用還不清楚。
　　P21是P53基因下游靶基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，是CDKIs（細(xì)胞周期素依賴性激酶抑制蛋白）家庭中第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的，P21的低表達(dá)與許多腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。SP1為P21轉(zhuǎn)錄所必需，SP1對(duì)P21的調(diào)控很可能與c-Myc有關(guān)，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖。目前關(guān)于P21在卵巢癌中的作用還不十分清楚，有研究表明其作為抑癌基因發(fā)揮作用。
　　本文主要通過研究三

6、者在卵巢不同級(jí)別漿液性腺癌中的表達(dá)情況，進(jìn)一步研究卵巢漿液性癌二元論學(xué)說，尋找卵巢癌診斷及預(yù)后評(píng)估指標(biāo)，為卵巢癌的早期診斷和治療提供更好的理論依據(jù)，以提高不同級(jí)別卵巢癌患者的生存率。
　　目的：研究SP1、KLF4和P21在卵巢高級(jí)別漿液性腺癌、低級(jí)別漿液性腺癌、正常輸卵管及正常卵巢組織中的表達(dá)情況，分析SP1、KLF4和P21的表達(dá)與卵巢癌的病理分級(jí)、手術(shù)病理分期及預(yù)后的關(guān)系。分析SP1與KLF4、P21蛋白表達(dá)的相關(guān)性，進(jìn)一步

7、探討SP1、KLF4和P21在卵巢漿液性腺癌的發(fā)生、發(fā)展中所發(fā)揮的作用。
　　研究方法：收集2006年1月至2011年1月河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院婦產(chǎn)科進(jìn)行手術(shù)治療的臨床資料完整的、病理證實(shí)的卵巢漿液性腺癌標(biāo)本65例，其中高級(jí)別42例，低級(jí)別23例，另取正常輸卵管組織15例、正常卵巢組織11例作為對(duì)照，根據(jù)二元論，低級(jí)別腺癌選擇正常卵巢作對(duì)照，高級(jí)別腺癌起源于輸卵管，選擇輸卵管上皮做對(duì)照。采用免疫組織化學(xué)（S-P法）檢測(cè)卵巢漿液性腺癌

8、中SP1、KLF4和P21蛋白的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)過程嚴(yán)格按照免疫組化（S-P法）檢測(cè)試劑盒操作步驟進(jìn)行，陽性對(duì)照選擇已知的陽性病理切片，陰性對(duì)照選擇磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗。對(duì)44例具有完整隨訪記錄的卵巢漿液性腺癌患者進(jìn)行隨訪，其中低級(jí)別漿液性腺癌患者13例，高級(jí)別漿液性腺癌患者31例。運(yùn)用統(tǒng)計(jì)分析計(jì)算3年及5年生存率，分析SP1、KLF4和P21蛋白的表達(dá)以及手術(shù)病理分期、病理分級(jí)、術(shù)后化療方式、術(shù)后殘余癌灶大小與患者預(yù)后的關(guān)系。

9、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)采用X2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法，SP1、KLF4和P21三個(gè)指標(biāo)之間的相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)。結(jié)果以P<0.05為有顯著性差異。
　　結(jié)果：
　　1卵巢低級(jí)別腺癌中SP1、KLF4和P21蛋白表達(dá)情況
　　1.1 SP1蛋白表達(dá)結(jié)果
　　在正常卵巢組織、低級(jí)別腺癌中，SP1蛋白表達(dá)的強(qiáng)陽性率分別為9.1%和65.2%，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：低級(jí)別腺癌組

10、SP1蛋白表達(dá)的強(qiáng)陽性率明顯高于正常卵巢組，兩者比較有顯著差異（P<0.05）。
　　1.2 KLF4蛋白表達(dá)的結(jié)果
　　在正常卵巢組織、低級(jí)別腺癌中，KLF4蛋白表達(dá)的強(qiáng)陽性率分別為72.7%和34.8%，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：低級(jí)別腺癌組KLF4蛋白表達(dá)的強(qiáng)陽性率明顯低于正常卵巢組，兩者比較有顯著差異（P<0.05）。
　　1.3 P21蛋白表達(dá)的結(jié)果
　　在正常卵巢組織、低級(jí)別腺癌中，P21蛋白表達(dá)的強(qiáng)陽性率分別為

11、72.7%和26.1%，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：低級(jí)別腺癌組P21蛋白表達(dá)的強(qiáng)陽性率明顯低于正常卵巢組，兩者比較有顯著差異（P<0.05）。
　　2卵巢高級(jí)別腺癌中SP1、KLF4和P21蛋白表達(dá)情況
　　2.1 SP1蛋白表達(dá)結(jié)果
　　在正常輸卵管組織、卵巢高級(jí)別漿液性腺癌中，SP1表達(dá)的強(qiáng)陽性率分別為6.7%和73.8%，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：高級(jí)別腺癌組SP1蛋白表達(dá)的強(qiáng)陽性率明顯高于正常輸卵管組，兩者比較有顯著差異（P<0.05

12、）。
　　2.2 KLF4蛋白表達(dá)結(jié)果
　　在正常輸卵管組織、卵巢高級(jí)別漿液性腺癌中，KLF4表達(dá)的強(qiáng)陽性率分別為86.7%和16.7%，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：高級(jí)別腺癌組KLF4蛋白表達(dá)的強(qiáng)陽性率明顯低于正常輸卵管組，兩者比較有顯著差異（P<0.05）。
　　2.3 P21蛋白表達(dá)結(jié)果
　　在正常輸卵管組織、卵巢高級(jí)別漿液性腺癌中，P21蛋白表達(dá)的強(qiáng)陽性率分別為66.7%和11.9%，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：高級(jí)別腺癌組P21蛋

13、白表達(dá)的強(qiáng)陽性率明顯低于正常輸卵管組，兩者比較有顯著差異（P<0.05）。
　　3卵巢不同級(jí)別漿液性腺癌中SP1、KLF4和P21蛋白表達(dá)的比較
　　3.1卵巢不同級(jí)別漿液性腺癌中SP1蛋白表達(dá)情況
　　卵巢低級(jí)別腺癌組和高級(jí)別腺癌組，SP1蛋白的強(qiáng)陽性表達(dá)率分別為65.2%和73.8%，統(tǒng)計(jì)分析表明，低級(jí)別組和高級(jí)別組中SP1蛋白的強(qiáng)陽性表達(dá)率無顯著差異。（P>0.05）
　　3.2卵巢不同級(jí)別漿液性腺癌中KL

14、F4蛋白表達(dá)情況卵巢低級(jí)別腺癌組和高級(jí)別腺癌組，KLF4蛋白的強(qiáng)陽性表達(dá)率分別為34.8%和16.7%，統(tǒng)計(jì)分析表明，低級(jí)別組和高級(jí)別組中KLF4蛋白的強(qiáng)陽性表達(dá)率無顯著差異。（P>0.05）
　　3.3卵巢不同級(jí)別漿液性腺癌中P21蛋白表達(dá)情況
　　卵巢低級(jí)別腺癌組和高級(jí)別腺癌組，P21蛋白的強(qiáng)陽性表達(dá)率分別為26.1%和11.9%，統(tǒng)計(jì)分析表明，低級(jí)別組和高級(jí)別組中P21蛋白的強(qiáng)陽性表達(dá)率無顯著差異。（P>0.05）

15、r>　　4 SP1、KLF4和P21蛋白的表達(dá)與卵巢不同級(jí)別漿液性腺癌患者預(yù)后的關(guān)系
　　4.1卵巢不同級(jí)別漿液性卵巢癌的生存率比較
　　卵巢低級(jí)別腺癌組3年和5年生存率分別為：69.2%和30.8%，卵巢高級(jí)別腺癌組3年和5年生存率分別為：35.5%和9.7%。統(tǒng)計(jì)分析表明，低級(jí)別組和高級(jí)別組的3年生存率和5年生存率均有顯著差異。（P<0.05）
　　4.2 SP1蛋白的表達(dá)與卵巢不同級(jí)別漿液性腺癌預(yù)后的關(guān)系

16、　　在卵巢低級(jí)別腺癌組，SP1強(qiáng)陽性組與SP1陰性或弱陽性組相比其3年生存率（42.9%，100.0%）和5年生存率（0.00%，66.7%）差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在卵巢高級(jí)別腺癌組，SP1強(qiáng)陽性組與SP1陰性或弱陽性組相比的3年生存率（22.7%，66.7%）和5年生存率（0.00%，33.3%）均有顯著差異（P<0.05）。
　　4.3 KLF4蛋白的表達(dá)與卵巢不同級(jí)別漿液性腺癌預(yù)后的關(guān)系
　　在卵巢低級(jí)別

17、腺癌組，KLF4強(qiáng)陽性組與KLF4陰性或弱陽性組相比的3年（75.0%，66.7%）和5年生存率（50.0%，22.2%）均無顯著差異（P>0.05）。在卵巢高級(jí)別腺癌組，KLF4強(qiáng)陽性組與KLF4陰性或弱陽性組相比的3年（85.7%，20.8%）和5年生存率（42.9%，0.00%）均有顯著差異（P<0.05）。
　　4.4 P21蛋白的表達(dá)與卵巢不同級(jí)別漿液性腺癌預(yù)后的關(guān)系
　　在卵巢低級(jí)別腺癌組，P21強(qiáng)陽性組與P21

18、陰性或弱陽性組相比的3年（100%，60.0%）和5年生存率（66.7%，20.0%）均無顯著差異（P>0.05）。在卵巢高級(jí)別腺癌組，P21強(qiáng)陽性組與 P21陰性或弱陽性組相比的3年（100.0%，25.9%）和5年生存率（50.0%，3.7%）有顯著差異（P<0.05）。5 SP1、KLF4和P21在卵巢不同級(jí)別漿液性腺癌中表達(dá)的相關(guān)性分析
　　在卵巢低級(jí)別漿液性腺癌中SP1高表達(dá)與KLF4、P21的低表達(dá)無顯著相關(guān)性（P>0

19、.05），KLF4的低表達(dá)與P21的低表達(dá)之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；在卵巢高級(jí)別漿液性腺癌中SP1與KLF4、P21的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)（P<0.05），KLF4與P21的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（P<0.05）。
　　6卵巢不同級(jí)別漿液性腺癌的COX多因素生存分析
　　為進(jìn)一步確定影響卵巢漿液性腺癌的預(yù)后因素，將 Kaplan-Meier單因素生存分析篩選出的預(yù)后相關(guān)因素：SP1的高表達(dá)，KLF4的低表達(dá)、P21的低表達(dá)

20、、手術(shù)病理分期、化療方式、術(shù)后殘余癌灶大小納入 COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行多因素生存分析，進(jìn)入COX多因素回歸分析的因素可以認(rèn)為是卵巢漿液性癌預(yù)后的獨(dú)立影響因素。結(jié)果顯示：在卵巢低級(jí)別漿液性腺癌中，SP1的高表達(dá)是影響卵巢低級(jí)別漿液性腺癌預(yù)后的獨(dú)立影響因素（P=0.016）；在卵巢高級(jí)別漿液性腺癌中，SP1和臨床病理分期進(jìn)入COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型，二者為影響卵巢高級(jí)別漿液性腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素（P=0.001，P=0.012）。

21、>　　結(jié)論：
　　1在卵巢低級(jí)別腺癌和高級(jí)別腺癌中，SP1的表達(dá)升高，KLF4、P21的表達(dá)降低。提示三者參與了卵巢高、低級(jí)別漿液性腺癌的發(fā)生。
　　2 SP1、KLF4和P21在卵巢低級(jí)別和高級(jí)別漿液性腺癌中的表達(dá)無明顯差異，說明卵巢低級(jí)別和高級(jí)別漿液性腺癌的發(fā)生受多因素的調(diào)節(jié)，可能存在共同的分子基礎(chǔ)。
　　3 SP1、KLF4和P21在卵巢高級(jí)別漿液性腺癌中的表達(dá)呈顯著相關(guān)，而三者在卵巢低級(jí)別漿液性腺癌中的表達(dá)無明