高血壓肝陽上亢證患者血清miRNAs表達(dá)的研究.pdf

1、目的：通過對比肝陽上亢證高血壓患者、非肝陽上亢證高血壓患者及正常人血清中微小RNA(microRNA，miRNA)的表達(dá)譜的不同，明確高血壓病肝陽上亢證與miRNA之間是否存在相關(guān)性，探索高血壓肝陽上亢證患者血清中是否存在特異性表達(dá)的一個miRNA或幾個miRNAs。
　　方法：1.在本院體檢中心及心內(nèi)科門診收集初發(fā)高血壓病或非初發(fā)但是未服用降壓藥的高血壓患者及健康體檢者的空腹血清，將所收集的病例分為三組，分別是肝陽上亢組、非肝陽

2、上亢組、健康組。
　　2.分別抽取肘靜脈血5ml，存于無抗凝的干燥試管，3000r/min離心10分鐘，抽取血清，-30℃凍存。采用Trizol LS法提取血清中RNA，按照miRNeasy Mini Kit操作手冊，使用吸附柱進(jìn)行RNA的富集。
　　3.利用Solexa測序方法對以上3組樣本進(jìn)行基因測序分析，檢測出肝陽上亢組與非肝陽上亢組、肝陽上亢組與正常人群組、非肝陽上亢組與正常組之間差異表達(dá)的基因。
　　4.利用

3、miRNA在線預(yù)測軟件miRWalk2.0整合肝陽上亢組與非肝陽上亢組、肝陽上亢組與正常人群組中共有的差異表達(dá)miRNA，篩選出可能與肝陽上亢證相關(guān)的miRNAs。
　　5.使用實時熒光定量PCR檢測篩選出的miRNAs在各組的表達(dá)量，包括其濃度及總量。
　　結(jié)果：發(fā)現(xiàn)肝陽上亢組與正常組的miRNA的表達(dá)量均存在明顯差異(P＜0.01);肝陽上亢組與非肝陽上亢組比較miRNA的表達(dá)量也存在明顯差異(P＜0.01);非肝陽上亢

4、組與正常組比較miRNA的表達(dá)量無差異(P=0.26,P＞0.05)。肝陽上亢組與非肝陽上亢組miRNA的濃度比較存在明顯差異(P＜0.01);肝陽上亢組與正常組miRNA的濃度比較也存在明顯差異(P＜0.01);非肝陽上亢組與正常組miRNA的濃度比較無明顯差異，(P=0.15，P＞0.05)。肝陽上亢組與正常組:共檢測到miRNA1037個，其中差異表達(dá)的miRNA有653個(P＜0.05)，表達(dá)下調(diào)的miRNA223個，表達(dá)上調(diào)的

5、miRNA430個;非肝陽上亢組與正常組:共檢測到miRNA963個，其中差異表達(dá)的miRNA有573個，表達(dá)下調(diào)的miRNA256個，表達(dá)上調(diào)的miRNA317個;肝陽上亢組與非肝陽上亢組:共檢測到miRNA957個，其中差異表達(dá)的miRNA有720個，表達(dá)下調(diào)的miRNA277個，表達(dá)上調(diào)的miRNA433個。結(jié)果在高表達(dá)的基因群中發(fā)現(xiàn)miR-126。熒光定量結(jié)果顯示肝陽上亢組miR-126的表達(dá)顯著高于非肝陽上亢組與正常組(P＜0