雞艾美耳球蟲核糖體小亞基序列分析.pdf

1、雞球蟲病是一種由艾美耳球蟲引起的危害極為嚴重的全球性寄生蟲病，造成嚴重的經(jīng)濟損失，在中國更為嚴重。本實驗對實驗室保存的4種18株艾美耳球蟲孢子化卵囊的18SrDNA序列進行克隆測序，其中15株進行系統(tǒng)發(fā)育研究，另外3株柔嫩艾美耳球蟲地克珠利、馬杜拉霉素和敏感株進行抗藥性差異分析。 1.系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系研究 為了確定來自不同地區(qū)雞球蟲種/株的親緣關(guān)系，研究其分類學地位，本項研究對實驗室收藏的堆型艾美耳球蟲上海株(E.acerv

2、ulinaShanghaistrain，EASH)、堆型艾美耳球蟲揚大株(E.acervulinaYangdastrain，EAYD)、巨型艾美耳球蟲上海株(E.maximaShanghaistrain，EMSH)、巨型艾美耳球蟲Banksadde株(EmaximaBanksaddestrain，EMBA)、巨型艾美耳球蟲Tysons株(E.maximaTysonsstrain，EMTY)、巨型艾美耳球蟲Townsend株(E.maxi

3、maTownsendstrain，EMTO)、巨型艾美耳球蟲連云港株(EmaximaLianyungangstrain，EMLY)、毒害艾美耳球蟲上海株(E.necatrixShanghaistrain，ENSH)、柔嫩艾美耳球蟲1A121株(Etenella1A121strain，ETAS)、柔嫩艾美耳球蟲2KF株(Etenella2KFstrain，ETKF)、柔嫩艾美耳球蟲2YM6株(Etenella2YM6strain，ETYM

4、)、柔嫩艾美耳球蟲吳株(EtenellaWustrain，ETWU)、柔嫩艾美耳球蟲北京株(EtenellaBeijingstrain，ETBJ)、柔嫩艾美耳球蟲啟東株(E.tenellaQindongstrain，ETQD)和柔嫩艾美耳球蟲WLR1株(EtenellaWLR1strain，ETWL)孢子化卵囊的18SrDNA基因進行克隆、測序，并與從GenBank下載的雞球蟲18SrDNA序列，使用軟件DNAstar5.0MegAli

5、gn進行系統(tǒng)發(fā)育分析：4種艾美耳球蟲同源性在94.6﹪～99.4﹪之間；7株E.tenella的同源性在99.0﹪～99.9﹪之間，5株Emaxima的同源性在96.9﹪～99.8﹪之間。測序所得的4種球蟲和GenBank下載的4種球蟲18SrDNA序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹顯示，這8種雞艾美耳球蟲(另外4種球蟲18SrDNA序列下載自GenBank)形成2個分支：Ⅰ，EASH、EMSH、Emivati、E.mitis、E.brunetti和

6、E.praecox；Ⅱ，ENSH和ETAS。Emaxima和Etenella各株的系統(tǒng)發(fā)育樹均根據(jù)地域關(guān)系產(chǎn)生2個分支。通過本實驗進一步證明我國和美國雞球蟲各種/株艾美耳球蟲的分類地位；同時也為艾美耳球蟲分子遺傳學鑒定提供理論基礎(chǔ)。 2.抗藥性差異分析 為了研究抗球蟲藥地克珠利和馬杜拉霉素對柔嫩艾美耳球蟲18SrDNA的影響，分別對本實驗室人工誘導的柔嫩艾美耳球蟲地克珠利抗藥珠(Etenellaanti-diclazur

7、ilstrain，ETAD)、柔嫩艾美耳球蟲馬杜拉霉素抗藥珠(Etenellaanti-maduramycinstrain，ETAM)和柔嫩艾美耳球蟲藥物敏感株(E.tenelladrug-sensitivestrain，ETDS)孢子化卵囊的18SrDNA基因進行克隆、測序，并通過生物信息軟件進行對比差異分析。通過軟件DNAstar5.0MegAlign多序列比對發(fā)現(xiàn)：ETAM株3個堿基發(fā)生突變，T170突變?yōu)镃，T646突變?yōu)镃，G