玻璃體液取樣方法及死亡時(shí)間推斷的研究.pdf

1、尸體化學(xué)研究尸體血液、腦脊液、玻璃體液(vitreoushumour,VH)以及其它體液中化學(xué)成分的死后變化。玻璃體液具有解剖位置相對(duì)隔離、不易受到污染和死后變化、腐敗緩慢等特點(diǎn)，是尸體化學(xué)研究的理想檢材。死亡時(shí)間推斷是法醫(yī)病理學(xué)研究的首要任務(wù)之一，VH成分死后變化與PMI關(guān)系也成為國(guó)內(nèi)外法醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)。近年來(lái)，研究重點(diǎn)集中到提高推斷準(zhǔn)確度上，包括取樣方法、成分選擇以及PMI推斷方程建立方法等。 本文重點(diǎn)探索VH微量取樣方法及

2、推斷方程置信區(qū)間的作用，分述如下： 第一部分微量取樣VH的方法研究 VH在尸體化學(xué)研究中占有重要位置。眼科生理學(xué)研究認(rèn)為玻璃體內(nèi)各部分物質(zhì)含量不均一，即存在“濃度梯度”，Coe因此認(rèn)為應(yīng)一次取出所有VH以避免其影響樣本物質(zhì)含量。隨著檢驗(yàn)技術(shù)的提高，近年有學(xué)者提出了微量或部分取樣VH。還有學(xué)者觀察認(rèn)為雙眼VH物質(zhì)含量也不一致，或死后改變不同步。上述爭(zhēng)議影響了VH的取樣和研究方法，未見(jiàn)取樣方法專項(xiàng)研究報(bào)道。 本部分采

3、用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，初步探討樣本物質(zhì)含量與眼內(nèi)濃度梯度和雙眼濃度差的關(guān)系，比較微量取樣與一次取樣的差異，以及間隔取樣的可行性及對(duì)PMI研究的影響。在法醫(yī)學(xué)界首次研究了VH微量重復(fù)取樣和間隔微量取樣的可行性，為人體研究提供取樣方法準(zhǔn)備。 實(shí)驗(yàn)1VH鈣、鉀、鈉、氯、磷含量與濃度差的研究 目的研究VH樣本鈣、鉀、鈉、氯、磷含量與眼內(nèi)“濃度梯度”的關(guān)系，以及雙眼VH樣本物質(zhì)含量及其死后變化是否一致，研究重復(fù)微量取樣的可行性以及是否存在雙

4、眼濃度差異。 結(jié)論死后VH雙眼物質(zhì)含量及死后變化一致；所謂玻璃液濃度梯度未顯著影響微量重復(fù)取樣樣本的物質(zhì)含量，微量重復(fù)取樣樣本總體一致。 實(shí)驗(yàn)2微量取樣與一次取樣VH的比較研究 目的比較微量取樣與一次取樣的差異，研究?jī)煞N取樣方法對(duì)樣本物質(zhì)含量的影響。 結(jié)論一次取樣與微量取樣VH物質(zhì)含量總體一致，但是取樣方法對(duì)樣本物質(zhì)含量的離散度有影響。一次取樣樣本的變異程度和雙眼間濃度差的彌散程度較大；微量取樣的穩(wěn)定性、

5、可重復(fù)性較好，更適于VH死后研究。 實(shí)驗(yàn)3間隔多次微量取樣玻璃體液研究 目的探索間隔多次微量取樣的可行性，以及對(duì)PMI研究的影響。 結(jié)論P(yáng)MI96h內(nèi)，間隔微量取樣未顯著影響VH鈣、鉀、鈉、氯離子和無(wú)機(jī)磷等物質(zhì)含量的死后變化；間隔時(shí)間、雙眼交替微量取樣對(duì)鈣、鉀和鈉死后變化趨勢(shì)無(wú)影響，可以替代傳統(tǒng)一次取樣方法成為玻璃體液PMI研究的取樣方法之一。 第二部分VH成分死后變化及角膜上皮基底細(xì)胞核DNA含量變化與

6、PMI關(guān)系的研究 推斷死亡時(shí)間是VH研究的重要課題之一。迄今為止PMI推斷方程不一、推斷準(zhǔn)確度不高。有學(xué)者提出對(duì)死因、年齡、溫度等進(jìn)行控制、VH多成分研究建立多元推斷方程、以PMI為自變量建立推斷方程等以提高推斷準(zhǔn)確度，部分國(guó)外學(xué)者還注意到了置信區(qū)間對(duì)總體推斷結(jié)果的影響。 本部分采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，運(yùn)用第一部分的研究成果，間隔微量取樣觀察了VH鉀、鈉、鎂、銨離子的死后變化；結(jié)合本系在檢測(cè)DNA含量推斷PMI研究領(lǐng)域的豐富經(jīng)驗(yàn)，

7、研究了排列規(guī)則、成分單一的角膜上皮基底細(xì)胞DNA含量相關(guān)7個(gè)參數(shù)的死后變化。從置信區(qū)間角度討論各參數(shù)PMI推斷價(jià)值，并在多指標(biāo)、參數(shù)范圍探討多元擬合推斷方程的意義。這項(xiàng)研究為國(guó)內(nèi)PMI推斷引入了評(píng)價(jià)新標(biāo)準(zhǔn)，為今后研究指標(biāo)篩選和建立多元分析提供重要方法參考。 實(shí)驗(yàn)4間隔取樣VH檢測(cè)鉀、鈉、鎂、銨含量推斷PMI研究 目的雙眼交替間隔取樣、觀察家兔VH鉀、鈉、鎂和銨等離子含量死后變化，結(jié)合置信區(qū)間評(píng)估各參數(shù)的PMI推斷價(jià)值。

8、 結(jié)論死后96h內(nèi)，VH鉀、鈉、鎂、銨離子含量變化均與PMI相關(guān)，可建立推斷方程。推斷方程及其置信區(qū)間均與PMI推斷準(zhǔn)確度有關(guān)，評(píng)價(jià)方程時(shí)應(yīng)考慮推斷置信區(qū)間：鈉、鎂方程的95％置信區(qū)間為13h～15h，整體PMI價(jià)值偏低；鉀95％置信區(qū)間隨PMI逐步擴(kuò)大，可能影響PMI72h以后的推測(cè)精度。綜合考慮，72hPMI內(nèi)，鉀研究?jī)r(jià)值較高；而死后24h～96h內(nèi)銨的研究?jī)r(jià)值較大。 實(shí)驗(yàn)5角膜上皮基底細(xì)胞DNA含量以及VH鉀、鈉含量

9、與PMI關(guān)系的研究 目的運(yùn)用圖像分析技術(shù)，研究家兔角膜上皮基底細(xì)胞DNA含量變化與PMI的關(guān)系；并結(jié)合實(shí)驗(yàn)4觀察結(jié)果，探索多元PMI推斷方程對(duì)推斷準(zhǔn)確度的影響。 結(jié)論死后120h內(nèi)，家兔角膜上皮基底細(xì)胞DNA含量與死亡時(shí)間相關(guān)，其中A、IOD和AG建立的PMI推斷方程平均推斷偏差較小，具有較高研究?jī)r(jià)值。擬建多元方程應(yīng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和置信區(qū)間測(cè)算；死后12h～96h，同時(shí)觀測(cè)VH鈉含量及角膜上皮基底細(xì)胞細(xì)胞核DNA平均灰度(