肌動(dòng)蛋白降解規(guī)律與死亡時(shí)間推斷的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景：肌動(dòng)蛋白是構(gòu)成細(xì)胞骨架的主要蛋白質(zhì)之一，幾乎可表達(dá)于所有的真核細(xì)胞?，F(xiàn)已證實(shí)心肌和肝臟內(nèi)肌動(dòng)蛋白的死后降解規(guī)律具有時(shí)間相關(guān)性，可用于死亡時(shí)間推斷。但是機(jī)體死后各臟器之間肌動(dòng)蛋白的降解規(guī)律是否具有差異性?環(huán)境因素(如溫度、濕度)、人為因素(如致死方式)是否會(huì)對(duì)肌動(dòng)蛋白的死后降解造成的影響?肌動(dòng)蛋白的死后形態(tài)學(xué)改變是否也與死亡時(shí)間具有相關(guān)關(guān)系?以及在人體組織內(nèi)，肌動(dòng)蛋白的死后降解規(guī)律是否也具有時(shí)間相關(guān)性?目前有關(guān)這些問(wèn)題還未見(jiàn)有研

2、究報(bào)道。因此，本次實(shí)驗(yàn)將對(duì)上述這些問(wèn)題進(jìn)行探討。 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?(1)觀察大鼠死后不同時(shí)間心、肝、脾、肺、腎、腦和骨骼肌等組織內(nèi)肌動(dòng)蛋白的含量變化，為晚期死亡時(shí)間推斷尋找參考指標(biāo)。 (2)探討大鼠骨骼肌肌動(dòng)蛋白纖維的形態(tài)學(xué)變化與死亡時(shí)間的相關(guān)性。 (3)研究不同溫度條件下大鼠骨骼肌肌動(dòng)蛋白死后降解規(guī)律的差異性。 (4)探討環(huán)境濕度對(duì)大鼠骨骼肌肌動(dòng)蛋白死后降解規(guī)律的影響。 (5)比較不同死亡原

3、因?qū)Υ笫蠊趋兰〖?dòng)蛋白死后降解規(guī)律的影響。 (6)探討大鼠骨骼肌肌動(dòng)蛋白的降解規(guī)律與離體時(shí)間的關(guān)系。 (7)探討人體胸大肌肌動(dòng)蛋白含量變化與離體時(shí)間的關(guān)系。 實(shí)驗(yàn)方法： (1)大鼠經(jīng)機(jī)械性窒息法致死后隨機(jī)分為7組，分別于死后0、24、48、72、96、120和168h剖取心、肝、脾、肺、腎、腦和骨骼肌等組織，采用免疫印跡及圖像分析技術(shù)檢測(cè)上述組織內(nèi)肌動(dòng)蛋白的含量，應(yīng)用SPSS11.5軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)

4、學(xué)分析。 (2)分別采用光學(xué)顯微鏡、激光掃描共聚焦顯微鏡和透射電鏡對(duì)大鼠死后不同時(shí)間骨骼肌(右后肢的內(nèi)收大肌)肌動(dòng)蛋白纖維的形態(tài)學(xué)變化進(jìn)行觀察。 (3)應(yīng)用免疫印跡及計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)，測(cè)量并分析在不同溫度條件下(10℃、20℃和30℃)大鼠死后168h內(nèi)骨骼肌肌動(dòng)蛋白的含量變化差異。 (4)對(duì)不同濕度條件下(30％、50％和70％)大鼠死后0、24、48、72、96、120和168h骨骼肌肌動(dòng)蛋白的含量進(jìn)行檢測(cè)

5、。 (5)將大鼠分別采用機(jī)械性窒息、失血性休克和電擊法致死，采用免疫印跡及計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)檢測(cè)并分析不同致死方式組大鼠死后168h內(nèi)骨骼肌肌動(dòng)蛋白的含量變化差異。 (6)采用免疫印跡及計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)檢測(cè)大鼠骨骼肌離體0、24、48、72、96、120和168h時(shí)肌動(dòng)蛋白的含量，觀察其含量變化與離體時(shí)間的關(guān)系。 (7)收集外科手術(shù)中切除的人體胸大肌組織，置于人工氣候箱內(nèi)保存(恒溫20℃，濕度恒定50％)，采用

6、免疫印跡及計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)檢測(cè)其離體0、24、48、72、96、120和168h后肌動(dòng)蛋白的含量。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： (1)大鼠死后，其心肌、肝、脾、肺、腎、腦和骨骼肌等組織內(nèi)肌動(dòng)蛋白含量均隨死亡時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸下降，與死亡時(shí)間具有相關(guān)性。但肌動(dòng)蛋白在上述各器官內(nèi)的死后降解速度有差異(P＜0.05)，在腦組織的降解速度最快，其余依次為肺、脾、肝、腎、心肌和骨骼肌。 (2)隨著死亡時(shí)間的延長(zhǎng)，大鼠骨骼肌纖維的橫紋逐漸模

7、糊、消失，細(xì)胞核固縮、溶解(光學(xué)顯微鏡觀察)；由肌動(dòng)蛋白構(gòu)成的細(xì)肌絲逐漸崩解、紊亂，直至肌小節(jié)和細(xì)肌絲結(jié)構(gòu)消失(透射電鏡觀察)；骨骼肌肌動(dòng)蛋白纖維在死后24h即可發(fā)生不同程度的抗肌動(dòng)蛋白抗體的缺染，缺染面積的變化趨勢(shì)與死亡時(shí)間相關(guān)，至死后168h，幾乎觀察不到抗肌動(dòng)蛋白抗體的陽(yáng)性產(chǎn)物(激光掃描共聚焦顯微鏡觀察)。 (3)不同溫度組大鼠骨骼肌肌動(dòng)蛋白的降解速度進(jìn)行組間比較時(shí)，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；環(huán)境溫度與死亡時(shí)

8、間之間具有交互作用(F=8.894，P=0.001)。肌動(dòng)蛋白相對(duì)含量與環(huán)境溫度、PMI的多元回歸方程為：Y=136689.8-465.5X1-1377.7X2，R2=0.823(Y為肌動(dòng)蛋白的IOD值，X1為PMI，下同：X2為環(huán)境溫度)。 (4)不同濕度組大鼠骨骼肌肌動(dòng)蛋白的降解速度進(jìn)行組間比較時(shí)，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，環(huán)境濕度的升高，肌動(dòng)蛋白的降解速度加快。肌動(dòng)蛋白相對(duì)含量與環(huán)境濕度、PMI的多元回歸方程

9、為：Y=136689.8-465.5X1-1377.7X2，R2=0.823(X2為環(huán)境濕度)。 (5)不同死亡原因組大鼠骨骼肌肌動(dòng)蛋白降解速度進(jìn)行組間比較時(shí)，失血性休克組大鼠骨骼肌肌動(dòng)蛋白的死后降解速度慢于其它兩組(P＜0.05)。肌動(dòng)蛋白相對(duì)含量與死亡原因、PMI的多元回歸方程為：Y=118112.8-438.6X1-4972.5X2，R2=0.793(X2為死亡原因：1=機(jī)械性窒息、2=失血性休克、3=電擊致死)。

10、 (6)大鼠骨骼肌肌動(dòng)蛋白含量變化與離體時(shí)間呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，肌動(dòng)蛋白含量變化趨勢(shì)與在體組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。肌動(dòng)蛋白相對(duì)含量與標(biāo)本保存方式、PMI(或離體時(shí)間)的多元回歸方程為：Y=82422.6-420.5X1+15884.3X2，R2=0.865(X2為標(biāo)本保存方式：1=在體、2=離體保存)。 (7)人體胸大肌肌動(dòng)蛋白的含量變化與離體時(shí)間呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，其降解規(guī)律與大鼠骨骼肌肌動(dòng)蛋白死后降解規(guī)律有差異(P＜

11、0.05)，但在大多數(shù)離體時(shí)間點(diǎn)，人體胸大肌與大鼠骨骼肌肌動(dòng)蛋白的含量差值不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.334)。人體胸大肌肌動(dòng)蛋白相對(duì)含量與PMI的回歸方程及R2值為：Y=108288.8-342.28X，R2=0.89(X離體時(shí)間)。 結(jié)論： (1)大鼠死后心、肝、脾、肺、腎、腦和骨骼肌肌動(dòng)蛋白的降解規(guī)律具有組織差異性，有助于較晚期死亡時(shí)間的推斷。但是肌動(dòng)蛋白在上述組織中的含量變化均與死亡時(shí)間具有相關(guān)性。 (2)

12、大鼠骨骼肌肌動(dòng)蛋白纖維的形態(tài)學(xué)改變與死亡時(shí)間具有相關(guān)性，有助于早期死亡時(shí)間推斷。 (3)骨骼肌肌動(dòng)蛋白的死后降解速度會(huì)受環(huán)境溫度影響，在一定范圍內(nèi)有隨溫度升高而加快的趨勢(shì)。 (4)環(huán)境濕度會(huì)影響骨骼肌肌動(dòng)蛋白的死后降解速度，二者在一定范圍內(nèi)呈正相關(guān)關(guān)系。 (5)死亡原因會(huì)影響大鼠骨骼肌肌動(dòng)蛋白的死后降解速度，骨骼肌肌動(dòng)蛋白的死后降解規(guī)律可能會(huì)有助于某些死亡原因的判斷。 (6)大鼠離體骨骼肌肌動(dòng)蛋白的含量變