雙交聯(lián)劑體系氨基酰化酶交聯(lián)聚集體的制備和研究.pdf

1、本文采用酶交聯(lián)聚集技術(shù)，以戊二醛和乙二醇二縮水甘油醚混合共同作為交聯(lián)劑，制備了氨基?；福‥.C.3.5.1.14）交聯(lián)聚聚集體，探索了雙交聯(lián)劑體系制備交聯(lián)聚集體的可行性并優(yōu)化了反應(yīng)制備工藝條件。得到如下結(jié)果：
　?。?）采用乙醇、丙酮和乙二醇二甲醚三種有機(jī)溶劑作為沉淀劑沉降游離態(tài)的酶，乙醇的沉淀作用最好。當(dāng)乙醇用量為90％V/V時(shí)，酶蛋白幾乎全部被沉淀下來，酶活保留率為82%。丙酮和乙二醇二甲醚隨也有著較好的沉淀效果，但在沉淀過

2、程中容易奪取酶分子表面的結(jié)合水，從而導(dǎo)致酶活性保留率的下降。
　?。?）氨基?；溉狈Ρ砻姘坊瑹o法與戊二醛有效的交聯(lián)。乙二醇二縮水甘油醚（EGDE）是一種較為新穎的環(huán)氧型交聯(lián)劑，交聯(lián)機(jī)理與戊二醛不同，其環(huán)氧基團(tuán)可以和胺基、巰基、羥基等多種基團(tuán)反應(yīng)。通過將戊二醛和乙二醇二縮水甘油醚混合共同作為交聯(lián)劑使用，提高了氨基?；傅慕宦?lián)效率。當(dāng)酶與戊二醛和乙二醇二縮水甘油醚的質(zhì)量比為1:0.75:2，在30℃下反應(yīng)12個(gè)小時(shí)后，制備生成的氨

3、基?；附宦?lián)聚集體有63.42%的酶活保留率。
　?。?）采用固定化技術(shù)，氨基?；傅牟僮鞣€(wěn)定性得到明顯提高。大量的酶分子團(tuán)聚交聯(lián)在一起，使固定化酶的整體結(jié)構(gòu)比較穩(wěn)定，熱穩(wěn)定性和耐熱耐酸性能方面，固定化酶要明顯好于自由酶。由于底物要克服更大的傳質(zhì)阻力才能到達(dá)酶顆粒的活性核心，固定化酶最適溫度比自由酶高10℃。固定化酶的最適pH為8.0，自由酶為7.0。
　　（4）固定化酶在重復(fù)水解5次后還保留著90%的初始酶活性，重復(fù)使用1