通過聚乙烯亞胺共沉淀技術制備海藻糖合酶交聯(lián)聚集體及對其性質的研究.pdf

1、目前對海藻糖合酶的固定化大多會采用有載體固定化技術，制備出的固定化酶存在單位體積酶活低、穩(wěn)定性差、固定化效率低等缺點。另外，海藻糖合酶在水相中的催化反應會有副產物葡萄糖的生成。為了解決上述問題，本文采取聚乙烯亞胺(PEI)共沉淀酶的策略，利用一種新型無載體固定化技術即交聯(lián)酶聚集體技術(CLEAs)對海藻糖合酶進行固定化。所制備的固定化酶固定化效率高、單位體積酶活高、穩(wěn)定性好。同時初步探討了低水分活度的反應溶劑離子液對海藻糖合酶交聯(lián)聚集體

2、活性及反應性能的影響。主要內容包括:
　　(1)對海藻糖合酶進行分子結構模擬，獲得其蛋白質三維結構模擬圖。分析表明所模擬的海藻糖合酶分子表面有13個Lys，確定了對其使用CLEAs技術進行固定化的可行性以及采用PEI進行共沉淀策略制備海藻糖合酶CLEAs-PEI-PEG的必要性。
　　(2)以PEG為輔助沉淀劑，將酶與PEI進行共聚集沉淀，然后以戊二醛為交聯(lián)劑制備出海藻糖合酶CLEAs（簡稱CLEAs-PEI-PEG）。研究

3、了制備條件對CLEAs-PEI-PEG酶活的影響規(guī)律，確定了最優(yōu)制備條件:酶濃度為0.5mg/mL、酶與PEI濃度比例為:1∶0.8（PEI濃度為1％，w∶v）、PEG終濃度為25％(w∶v)、酶與交聯(lián)劑濃度比例為1∶0.5（交聯(lián)劑濃度為2.5％，w∶v）。
　　(3)研究CLEAs-PEI-PEG的相關酶學性質及其微觀結構。與游離酶相比，海藻糖合酶CLEAs-PEI-PEG的最適溫度為60℃，提高了10℃;最適pH值為6.5，與