16種天然植物化妝品中微生物的分離及研究.pdf

1、隨著經濟的快速發(fā)展和人們生活水平的不斷提高，化妝品安全問題受到越來越多人們的重視，微生物檢驗是化妝品質量控制的重要項目之一。天然植物性化妝品，近幾年市場銷售量很大，但我國對此類天然化妝品中微生物的研究甚少。本文以新疆產薰衣草精油，奧斯曼眼部用品，以及海娜粉系列染發(fā)產品為研究對象，通過薄膜過濾法排除防腐劑干擾，對16種天然植物性化妝品樣品中的微生物進行分離篩選，微生物通過微孔濾膜過濾后富集，再將濾膜放置于培養(yǎng)基表面培養(yǎng)，根據濾膜上生長的菌

2、落數量、菌落形態(tài)，進行分類初篩;對檢出微生物進行革蘭氏染色鏡檢，經過VITEK2生化鑒定系統(tǒng)對分離出的菌株進行鑒定，采用美國Nccls頒布的標準方法對已鑒定致病菌做藥物敏感試驗;構建用于天然植物化妝品中典型致病菌的菌落PCR快速檢測技術，并選取三株已鑒定的菌株，依據特異型基因，設計特異性引物，建立多重PCR快速檢測體系，實現同時檢測天然植物化妝品中三種致病菌的方法。
　　試驗結果可知16種樣品通過運用濾膜法，對膏霜、乳劑，油狀液體

3、，固體粉狀三類天然植物化妝品分別進行膜過濾前稀釋，抑制防腐劑干擾試驗，分離篩選出典型菌，結果較滿意。在卵磷脂-吐溫80上16種樣品菌生長情況可知，膏霜、乳劑狀樣品和油狀樣品的最佳稀釋比為10-3，即10mL供試液，進行薄膜過濾后再用含0.1％吐溫80，0.9％生理鹽水(45℃)沖洗薄膜3次，每次100ml;而固體粉狀樣品由于含菌量較大，稀釋比例在10-4時，菌落生長數量可計且單菌落多，即10mL供試液，進行薄膜過濾后再用含0.1％吐溫8

4、0，0.9％生理鹽水(45℃)沖洗薄膜4次，每次100ml。通過驗證實驗，采用薄膜過濾法，接種7株代表菌的染菌回收率均高于90％，可見薄膜過濾法能有效去除防腐劑對含菌檢出率的干擾。
　　對檢出100株微生物進行分離篩選，革蘭氏染色鏡檢，經過VITEK2生化鑒定系統(tǒng)鑒定得到37株致病菌:糞大腸桿菌5株，金黃色葡萄球菌1株，銅綠假單胞桿菌3株，肺炎克雷伯氏菌6株，地衣芽孢桿菌10株，陰溝腸桿菌10株，鏈球菌1株，腸球菌1株。6類抗生素

5、藥物與試劑藥敏試驗結果均得到顯著抑菌直徑環(huán)，且各菌株呈現不同程度的耐藥性，無出現重大錯誤判定結果。
　　針對分離出的地衣芽孢桿菌RpoB基因、肺炎克雷伯氏菌phoE基因、銅綠假單胞桿菌gyrA基因作為靶基因，設計3對特異性引物，所建立的三重PCR具有很高的敏感性和特異性，試驗通過對退火溫度、3對引物、Mg2+、EasyTaq DNA Polymerase等參數的優(yōu)化，確定三重PCR的反應體系和反應程序。結果如下:10×Easy T

6、aq Buffer(Mg2+)1.5μ L，2.5 mM dNTPs2.5μ L，10μ MgyrA上下游引物各1.0μ L、10μ MphoE上下游引物各1.0μL、10μMRpoB上下游引物各0.5μL，模板DNA各2μ L，5 U/μL EasyTaqDNA Polymerase0.5μL，ddH2O補足25μL;反應程序為:94℃預變性3 min;按照94℃45 s，58℃45 s，72℃60 s進行30個循環(huán);最后72℃延伸7