化妝品微生物檢驗(yàn)及安全技術(shù)規(guī)范比較

1、化妝品微生物檢驗(yàn),化妝品因含有水分，油脂，蛋白質(zhì)，多元醇等，為微生物的生長創(chuàng)造了良好的條件，造成產(chǎn)品變質(zhì)。為了抑制微生物的繁殖和消費(fèi)者使用過程中的產(chǎn)品污染，往往在化妝品中加入防腐劑(尼珀?duì)柦鸺字⒁阴?、丙脂及苯氧乙醇?，但不能過量。因此，化妝品一方面為微生物的生長繁殖提供了良好的環(huán)境；另一方面由于防腐劑的應(yīng)用又可抑制微生物的生長。為了避免測(cè)試結(jié)果可能出現(xiàn)假陰性（實(shí)際應(yīng)該生長或是污染了，由于防腐劑的存在而導(dǎo)致結(jié)果不生長或是結(jié)果偏小

2、），需要添加中和劑。,化妝品中常用的中和劑,樣品中：國際方法：尼泊金酯類防腐劑的中和劑：吐溫80（30g/L）和卵磷脂(3g/L)+普通肉湯。化妝品安全技術(shù)規(guī)范：培養(yǎng)基成分中直接有卵磷脂（1g）吐溫80（7g）。（稀釋法也能同步起到中和的效果）生產(chǎn)用水中的余氯：每125ml水樣中加入0.1mg硫代硫酸鈉。（注意添加方式和使用范圍）,化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn),,,,,,,微生物檢驗(yàn)方法,（2015版化妝品安全技術(shù)規(guī)范）GB/T 7918.1-

3、1987 化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 總則 菌落總數(shù) （2015版化妝品安全技術(shù)規(guī)范）GB/T 7918.2-1987 化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 耐熱大腸菌群（2015版化妝品安全技術(shù)規(guī)范）糞大腸菌群：GB/T 7918.3-1987 化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 銅綠假單胞菌 （2015版化妝品安全技術(shù)規(guī)范）GB/T 7918.4-1987 化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 綠膿桿菌 金黃色葡萄球菌 （2015版化妝品安

4、全技術(shù)規(guī)范）GB/T 7918.5-1987 化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 金黃色葡萄球菌 霉菌和酵母菌：（2015版化妝品安全技術(shù)規(guī)范）,方法比較,2007版化妝品衛(wèi)生規(guī)范與2015版化妝品安全技術(shù)規(guī)范對(duì)比：,總則,總則重點(diǎn),1.具有代表性。2.不少于2個(gè)包裝單位的取樣中共取10g或10mL。3.供檢樣品，應(yīng)嚴(yán)格保持原有的包裝狀態(tài)。容器不應(yīng)有破裂，在檢驗(yàn)前不得打開，防止樣品被污染。4.應(yīng)置于室溫陰涼干燥處，不要冷藏或冷凍。4.宜先取

5、出部分樣品做微生物檢驗(yàn)。5.嚴(yán)格上微生物無復(fù)測(cè)一說。（可能的因素多），因此對(duì)微生物檢驗(yàn)人員要求嚴(yán)格。6.生物安全開始重視。,詳細(xì)操作步驟,詳細(xì)操作步驟重點(diǎn),1.所配制培養(yǎng)基可冷藏和冷卻備用為分步驟檢測(cè)提供基礎(chǔ)。2.菌落總數(shù)和霉菌酵母菌總數(shù)a.單位CFU/g或CFU/ml。b.二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，應(yīng)以四舍五入法計(jì)算。c.“不可計(jì)”注明稀釋度。Colony Forming Unitsd.特有的形態(tài)和培養(yǎng)特性（霉

6、菌和酵母菌）。,樣品的制備,液體樣品,膏、霜、乳劑半固體狀樣品,固體樣品,樣品的制備注意事項(xiàng),無菌容器、材料及操作,樣品的均一性,玻璃珠,磁力攪拌,均質(zhì)器,樣品的檢驗(yàn)及保管,及時(shí)檢驗(yàn),樣品應(yīng)放在室溫陰涼干燥處,樣品先進(jìn)行微生物檢驗(yàn)(原料)，再做其他指標(biāo),須防止微生物的再污染和擴(kuò)散,測(cè)試方法：,菌落總數(shù)檢驗(yàn),菌落總數(shù)（Aerobic bacterial count）：化妝品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后（如培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間

7、、pH值、需氧性質(zhì)等），1g（1mL）檢樣中所含菌落的總數(shù)。所得結(jié)果只包括一群本方法規(guī)定的條件下生長的嗜中溫的需氧性和兼性厭氧菌落總數(shù)。,測(cè)定菌落總數(shù)便于判明樣品被細(xì)菌污染的程度，是對(duì)樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)總評(píng)價(jià)的綜合依據(jù)。,測(cè)試流程,48小時(shí)出結(jié)果（30-300）：,TTC亦不可多加會(huì)抑制菌落生長,為便于區(qū)別化妝品中的顆粒與菌落，可在每 100mL 卵磷脂吐溫 80 營養(yǎng)瓊脂中加入 1mL 0.5％的 TTC 溶液，如有細(xì)菌存在，培養(yǎng)后菌落呈

8、紅色，而化妝品的顆粒顏色無變化。,接種陽性菌計(jì)算回收率,推薦了解：人員培訓(xùn)能力掌握的檢驗(yàn)重要指標(biāo)。有條件可做視具體樣品測(cè)試結(jié)果。在膏霜類化妝品中,微生物都是吸附或附著于顆粒狀的原料中,檢測(cè)時(shí)不易洗脫下來,因此,需要驗(yàn)證檢測(cè)方法的有效性。,耐熱大腸菌群,未檢出2天，檢出3-4天耐熱大腸菌群 Thermotolerant coliform bacteria系一群需氧及兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌，在44.5℃培養(yǎng)24h—48h能發(fā)酵

9、乳糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣。該菌主要來自人和溫血?jiǎng)游锛S便，可作為糞便污染指標(biāo)來評(píng)價(jià)化妝品的衛(wèi)生質(zhì)量, 推斷化妝品中有否污染腸道致病菌的可能。,★糞大腸菌群檢查流程圖,鏡檢,結(jié)果報(bào)告,根據(jù)發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，平板上有典型菌落，并經(jīng)證實(shí)為革蘭氏陰性短桿菌，靛基質(zhì)試驗(yàn)陽性，則可報(bào)告被檢樣品中檢出耐熱大腸菌群。,銅綠假單胞菌,未檢出2天，檢出4天銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）屬于假單胞菌屬，為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶陽性，能

10、產(chǎn)生綠膿菌素。此外還能液化明膠，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在 42℃±1℃條件下能生長。,該菌對(duì)人有致病力，可使傷處化膿，引起敗血癥等。在自然界中分布甚廣，空氣、水、土壤,,,,,最終結(jié)果判斷,增菌培養(yǎng),供試液的制備,,,,,書寫檢驗(yàn)記錄單,分離純化,無菌落或無特征菌落,配培養(yǎng)基和稀釋液,,,★銅綠假單胞菌檢查流程圖,36±1℃,18~24h,36±1℃,18~24h,鏡檢,,十六烷三甲基溴化銨平板,SCDL

11、P培養(yǎng)基,黃綠色菌膜,,灰白色濕潤,,氧化酶試驗(yàn),粉紅/紫紅色,,,,,綠膿菌素試驗(yàn),鹽酸層呈粉紫色氯仿層呈藍(lán)綠色,,硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗(yàn),,N2,明膠液化試驗(yàn),明膠培養(yǎng)基（高層）,明膠液化,,,結(jié)果報(bào)告,被檢樣品經(jīng)增菌分離培養(yǎng)后，經(jīng)證實(shí)為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶及綠膿菌素試驗(yàn)皆為陽性者，即可報(bào)告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌；如綠膿菌素試驗(yàn)陰性而液化明膠、硝酸鹽還原產(chǎn)氣和42℃生長試驗(yàn)三者皆為陽性時(shí)，仍可報(bào)告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。,金黃

12、色葡萄球菌,未檢出2天，檢出3天金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）為革蘭氏陽性球菌，呈葡萄狀排列，無芽胞，無莢膜，能分解甘露醇，血漿凝固酶陽性。,該菌是葡萄球菌中對(duì)人類致病力最強(qiáng)的一種，能引起人體局部化膿性病灶，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致敗血癥。,,,,,革蘭染色、鏡檢→ 生化試驗(yàn):血漿凝固酶試驗(yàn) 甘露醇發(fā)酵試驗(yàn),最終結(jié)果判斷,增菌培養(yǎng),供試品的處理,,,,,書寫檢驗(yàn)記錄單,分離純化,無

13、菌落或無特征菌落,配培養(yǎng)基和稀釋液,,,36±1℃,36±1℃,24±2h,24~48h,★金黃色葡萄球菌檢查流程圖,鏡檢,耐鹽分,Baird Parker’s平板,灰/黑色,,血漿凝固酶試驗(yàn),血漿凝塊,,液態(tài)血漿,,甘露醇高鹽瓊脂,結(jié)果報(bào)告,凡在上述選擇平板上有可疑菌落生長，經(jīng)染色鏡檢，證明為革蘭氏陽性葡萄球菌，并能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，血漿凝固酶試驗(yàn)陽性者，可報(bào)告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。,霉菌和酵母菌,霉

14、菌和酵母菌數(shù)測(cè)定（Determination of molds and yeast count）化妝品檢樣在一定條件下培養(yǎng)后，1g或1mL化妝品中所污染的活的霉菌和酵母菌數(shù)量，藉以判明化妝品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般衛(wèi)生狀況。本方法根據(jù)霉菌和酵母菌特有的形態(tài)和培養(yǎng)特性，在虎紅培養(yǎng)基上，置28℃±2℃培養(yǎng)5d，計(jì)算所生長的霉菌和酵母菌數(shù)。（5-50）,革蘭氏染色,檢驗(yàn)結(jié)果正確的保證,設(shè)備方面： 恒溫培養(yǎng)設(shè)備

15、 高壓滅菌器（驗(yàn)證） 超凈工作臺(tái)（生物安全柜） 均質(zhì)器(旋渦混合器) 天平（0.1g） 顯微鏡（可要可不要無硬性要求）,壓力滅菌器的檢定（強(qiáng)檢）,出廠合格證：只是表示該儀器設(shè)備符合出廠標(biāo)準(zhǔn)。安全需要強(qiáng)檢（安全閥和壓力表）。至于溫度性能緊急時(shí)可以用廠家校準(zhǔn)證書替代。問題1：量值得傳遞過程？結(jié)論？量值溯源過程？,常規(guī)潔凈工作臺(tái)？,試劑要求： 無菌容器（？）及溶液； 試劑充足；

16、 空間充分（10平方米2人操作）； 培養(yǎng)基的制備（有效期的確認(rèn)）與質(zhì)量控制（促生長與回收率的驗(yàn)證）推薦項(xiàng)；,目前大部分微生物實(shí)驗(yàn)室,人員操作方面： 無菌操作，避免污染； 一定專業(yè)技術(shù)或工作經(jīng)驗(yàn)（招聘與外部審核時(shí)） 相互協(xié)作； 測(cè)試結(jié)果的證明。,日常維護(hù)： 設(shè)備的計(jì)量與保證； 超凈臺(tái)及時(shí)清潔與殺菌（操作前后半小時(shí)）； 檢驗(yàn)后材

17、料的及時(shí)處理； 環(huán)境衛(wèi)生（沉降菌的檢測(cè)每周）。,油性樣品如何處理,稀釋液生理鹽水-極性溶劑、液體石蠟-非極性溶劑、吐溫80-非離子型表面活性劑，分子一端是親水基團(tuán)，一端是親油基團(tuán)，常用作增溶劑和油/水乳化劑。決定了加入的順序。,問題2,微生物許可檢驗(yàn)項(xiàng)目,問題3,注：① 指甲油卸除液不需要測(cè)微生物項(xiàng)目。② 乙醇含量≥75%（w/w）者不需要測(cè)微生物項(xiàng)目。③ 配方中沒有微生物抑制作用成分的產(chǎn)品（如物理脫毛類產(chǎn)品、純植物染