一株禽H1N1流感病毒血凝素蛋白的純化、鑒定和結(jié)構(gòu)分析.pdf

1、甲型流感是含有八個(gè)負(fù)鏈RNA片段的RNA病毒,共編碼11種蛋白質(zhì)。其中的血凝素蛋白(HA),是流感病毒主要的表面蛋白之一,負(fù)責(zé)與宿主細(xì)胞受體結(jié)合而啟動(dòng)病毒感染。目前研究表明,HA具有受體結(jié)合偏好性,禽流感病毒HA偏好Siaα2,3Gal糖受體,人流感病毒HA偏好Siaα2,6Gal糖受體。所以,禽流感病毒不能在人類(lèi)中有效復(fù)制,人流感病毒也不能通過(guò)天然途徑在水禽中有效復(fù)制。如果禽流感病毒要感染人,必須和人流感病毒共同感染被稱(chēng)為“基因混合器

2、”的中間宿主豬,重組獲得新的受體結(jié)合偏好性。然而,引發(fā)1997年香港禽流感病毒感染人事件的禽H5N1流感病毒株仍然具有Siaα2,3Gal糖受體偏好性,這說(shuō)明HA的受體結(jié)合偏好性理論可能不適應(yīng)于一些禽流感病毒亞型。
　　因?yàn)镠1N1流感病毒感染人類(lèi)歷史記錄最長(zhǎng),而且和H3N2共同流行于人類(lèi)、豬和禽類(lèi)中,是研究流感病毒宿主適應(yīng)性和跨種傳播的理想模型。所以本論文以一株禽H1N1流感病毒A/WDK/JX/12416/2005為主要研究對(duì)

3、象,首先綜合應(yīng)用雞胚培養(yǎng)病毒、超速離心、蔗糖密度梯度離心、酶切、堿性陰離子交換、透析、SDS-PAGE電泳等技術(shù),獲得了高純度HA蛋白。這是一套直接從病毒顆粒上獲得流感病毒血凝素蛋白的方法,這種方法確保所獲得的血凝素蛋白分子結(jié)構(gòu)同病毒顆粒上的血凝素蛋白高度一致。
　　在用質(zhì)譜進(jìn)一步鑒定純化的HA蛋白時(shí),通過(guò)和HA基因序列比較發(fā)現(xiàn),HA蛋白序列有七個(gè)氨基酸置換位點(diǎn),分別是E103K,R130K,T169I,I338V,N387S,S

4、398I/L和I399S。因?yàn)榱鞲胁《臼褂貌煌木酆厦笝C(jī)制進(jìn)行復(fù)制和轉(zhuǎn)錄,這些置換可能是在基因復(fù)制過(guò)程引入,也可能是在病毒mRNA轉(zhuǎn)錄過(guò)程引入。這個(gè)結(jié)果,第一次提供了流感病毒HA蛋白氨基酸序列和HA基因序列不一致的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。
　　本文通過(guò)X射線(xiàn)衍射解出第一株禽H1N1流感病毒HA以及其與人、禽流感病毒受體類(lèi)似物復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),除了糖基化方式外,禽流感病毒HA和哺乳動(dòng)物流感病毒HA的結(jié)構(gòu)大體相似,而且并沒(méi)有表現(xiàn)出偏好Si