2005～2006年河北省流感流行和流感病毒血凝素HA1基因變異特征研究.pdf

1、目的：掌握2005～2006年河北省流感流行情況；對新分離流感病毒株血凝素HAl基因進(jìn)行核苷酸序列測定和氨基酸序列的推導(dǎo)，與最近流行代表株進(jìn)行比較，及時(shí)發(fā)現(xiàn)流感病毒新變異株，為疫苗株選擇等流感防治工作提供科學(xué)依據(jù)。 方法：在2005年10月～2006年3月通過中國流感/禽流感監(jiān)測信息系統(tǒng)，收集河北省5市12所流感監(jiān)測哨點(diǎn)醫(yī)院門診就診病例和流感樣病例(ILI，influenza-likeillness)監(jiān)測數(shù)據(jù)，用Excel軟件進(jìn)

2、行統(tǒng)計(jì)，分析ILI在人群中的流行變化趨勢；將來自監(jiān)測哨點(diǎn)醫(yī)院和流感暴發(fā)疫情的咽拭子標(biāo)本用狗腎傳代(MDCK)細(xì)胞培養(yǎng)和分離流感病毒，用豚鼠紅細(xì)胞和流感病毒標(biāo)準(zhǔn)參考血清進(jìn)行鑒定分型。按照標(biāo)本采集時(shí)間和分型鑒定結(jié)果，隨機(jī)抽取流行前、中、后期分離到的甲1、甲3、乙型共9株以及流感暴發(fā)疫情中分離到流感毒株4株，利用RT-PCR方法擴(kuò)增出HAl基因片斷，對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行核苷酸序列測定，用DNAStar軟件與近年流感流行代表株進(jìn)行序列比較，分析其核苷

3、酸序列和氨基酸序列的同源性及變異情況，以及變異對流感病毒抗原性改變的意義。 結(jié)果：(1)12所流感監(jiān)測哨點(diǎn)醫(yī)院ILI就診百分比為4.50％。內(nèi)科門診ILI就診百分比為0.59％，就診比最高的是2005年12月份，為0.85％。兒科門診ILI就診百分比為9.82％，就診百分比最高的是2005年12月份，為11.25％。其中5歲以下兒童為主要發(fā)病人群，占ILI的55％(10914/19829)。與我省2004～2005年流行期接近。

4、(2)2005～2006年流行期河北省流感監(jiān)測哨點(diǎn)醫(yī)院采集ILI咽拭子標(biāo)本938份，分離出流感病毒92株，經(jīng)分型鑒定，H1N1亞型57株，H3N2亞型6株， B型29株。2006年4、5月份在石家莊、承德發(fā)生的2起流感暴發(fā)疫情中采集標(biāo)本15份，分離出4株流感病毒，均為B型。(3)在流行期內(nèi)出現(xiàn)了優(yōu)勢流行株的交叉更替，2005年10月～12月以甲1亞型為優(yōu)勢流行株，2006年2～3月份以乙型流感病毒為優(yōu)勢流行株，并且發(fā)生了乙型流感病毒引起

5、的流感暴發(fā)疫情。(4)抽取的13株新分離流感病毒株利用特異性引物，采用RT-PCR方法分別擴(kuò)增HAl區(qū)基因片斷，均出現(xiàn)相應(yīng)條帶。(5)對擴(kuò)增出的流感病毒HAl區(qū)基因片段進(jìn)行核苷酸序列分析，與近年全國流感病毒流行代表株進(jìn)行核苷酸、氨基酸序列同源性比較。3株H1N1亞型流感病毒與1999～2005年全國流行代表株A/NewCaledonia/20/99的核苷酸序列同源性為97.0％～98.1％，氨基酸序列同源性為98.1％～98.7％，5～

6、7個(gè)位點(diǎn)(173V>A259W>R 260Y>F 281E>K 322V>A)氨基酸發(fā)生了替換，但均不在抗原決定簇上。3株H3N2亞型流感病毒與2005～2006年H3N2亞型疫苗株A/Calfornia/7/2004的核苷酸序列同源性為98.0％～98.2％，氨基酸序列同源性為98.7％～99.0％，3個(gè)位點(diǎn)氨基酸發(fā)生了替換，其中兩個(gè)在抗原決定簇B區(qū)(188N>D、193S>F)，一個(gè)在受體結(jié)合位點(diǎn)(225D>N)。7株B型流感病毒屬

7、Victoria系，與Victoria系代表株B/HongKong/113l/2001核苷酸序列同源性為96.4％～96.8％，氨基酸序列同源性均為97.7％，7個(gè)位點(diǎn)發(fā)生了氨基酸替換，其中6個(gè)(80K>R、116R>H、121N>T、129K>N、164E>D、197S>N)參與抗原表位構(gòu)成。 結(jié)論：(1)2005～2006年流感流行期河北省ILI就診高峰為2005年12月至2006年1月，HlNl亞型、H3N2亞型和B型同

8、時(shí)流行，并出現(xiàn)了H1N1亞型和B型優(yōu)勢流行的交叉更替。(2)新分離H1N1亞型毒株在基因特性上與疫苗株A/NewCaledonia/20/1999比較，HAl區(qū)己發(fā)生了氨基酸替換，但替換位點(diǎn)對HAl抗原性該改變意義不大。(3)新分離H3N2亞型毒株基因特性與疫苗株A/Calfornia/7/2004相近，但在HAl抗原決定位點(diǎn)發(fā)生了氨基酸替換。與2006～2007年疫苗株A/Wisconsin/67/2005類似。(4)新分離B型毒株為