鮑“肌肉萎縮癥”病毒與類皰疹病毒的流行病學(xué)研究.pdf

1、1999年至2002年間，在中國(guó)南方沿海，許多養(yǎng)殖場(chǎng)的鮑出現(xiàn)了重大的病害并大量死亡。首次爆發(fā)是在福建省東山縣，然后蔓延至南方沿海其他地方，包括廣東、海南、臺(tái)灣等省，給南方鮑養(yǎng)殖業(yè)造成重創(chuàng)。研究認(rèn)為該鮑流行病是由低溫病毒引起的，而鮑“肌肉萎縮癥”病毒（abalone shriveling syndrome-associated virus，AbSV）和鮑類皰疹病毒(abalone Herpes-like Virus，AbHV)可能就是該低

2、溫病毒病病原。為進(jìn)一步掌握AbSV和AbHV兩種病原的流行特點(diǎn)及規(guī)律，采集了2012年4月至2013年1月，2013年5月至2013年10月期間，中國(guó)南方沿海包括福建東山，廣東汕頭、惠來、汕尾、惠東，海南三亞等七個(gè)地區(qū)的養(yǎng)殖鮑。其中2012年4月至2013年1月的鮑樣品由上一屆楊蕊同學(xué)完成采集、DNA提取、病毒檢測(cè)，在此采用，旨在更全面宏觀的分析兩種病毒的流行情況。利用SYBR GreenⅠ染料法熒光定量PCR檢測(cè)AbSV在鮑體內(nèi)的含量

3、以及Taqman探針法熒光定量PCR檢測(cè)AbHV的含量。研究發(fā)現(xiàn)AbSV和AbSV仍存在于中國(guó)南方沿海養(yǎng)殖鮑體內(nèi)。AbSV流行開始于8月或9月，在9月或者10月達(dá)到高峰期；緯度較低的養(yǎng)殖場(chǎng)鮑體內(nèi)病毒含量略高些，如廣東汕尾、惠東。AbSV流行的最適溫度是25-29℃。AbHV流行開始于9月或10月，在11月或12月達(dá)到高峰期。AbHV的開始流行時(shí)間和達(dá)到高峰期時(shí)間都比AbSV要晚一個(gè)月。AbHV的含量隨季節(jié)溫度變化有兩個(gè)高峰期，分別在17

4、-19℃和26-29℃。另外，結(jié)果分析顯示，AbSV或AbHV的含量與鮑的種類（雜色鮑和皺紋盤鮑）、鮑的規(guī)格大小以及兩種養(yǎng)殖方式（人工池內(nèi)養(yǎng)殖和海區(qū)筏式養(yǎng)殖）沒有明顯的相關(guān)性。
　　AbSV結(jié)構(gòu)形態(tài)還未確定，需要進(jìn)一步的純化分離為形態(tài)結(jié)構(gòu)鑒定打下基礎(chǔ)。本研究?jī)?yōu)化氯化銫梯度超速離心方法分離純化AbSV，發(fā)現(xiàn)AbSV位于浮力密度1.35-1.42g/ml的位置。為防止病毒在離心過程中被重金屬氯化銫破壞解聚，加入1％甲醛處理，對(duì)AbSV

5、具有很好的保護(hù)和分離效果。首次建立了AbSV層析分離純化技術(shù)，結(jié)果顯示AbSV位于電導(dǎo)為32—40 mg/cm的位置。而層析分離純化的AbSV組分濃縮后進(jìn)行SDS-PAGE實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)了其與陰性（不含AbSV）鮑樣品不同的蛋白條帶。
　　在AbSV和AbHV的人工感染實(shí)驗(yàn)中，注射和混養(yǎng)兩種人工感染方式均未使雜色鮑(Haliotis diversicolor)和皺紋盤鮑(H. discus)感染AbSV。兩種人工感染方式使雜色鮑均感染

6、了AbHV，并全部死亡。注射感染的雜色鮑在第4天開始死亡，并在第8天達(dá)到死亡高峰期；混養(yǎng)感染的雜色鮑第7天開始死亡，在第11天達(dá)到死亡高峰期。注射感染的雜色鮑開始死亡時(shí)間以及達(dá)到死亡高峰期時(shí)間均比混養(yǎng)感染的雜色鮑提前3天。此次人工感染溫度為19℃，AbHV兩種方式感染雜色鮑成功，并且流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)其最適溫度之一是在17-19℃，這些均與之前的研究認(rèn)為AbHV為低溫病毒相符。另外，混養(yǎng)感染的皺紋盤鮑未感染AbHV，說明其對(duì)AbHV有一定