武漢地區(qū)輪狀病毒的分子流行病學研究.pdf

1、目的該次研究目的是了解武漢地區(qū)輪狀病毒性腹瀉的主要流行毒株,以及A組輪狀病毒的基因型和亞組的流行特征,并對B組輪狀病毒進行基因序列分析,為確立我國輪狀病毒的主要流行株以及構建有效的輪狀病毒疫苗奠定分子流行病學基礎.方法利用共用的下游引物RVG9和6個A組輪狀病毒G基因型G1-4、G8和G9的特異性上游引物,建立一步多重RT-PCR方法檢測G基因型;利用引物Con2、Con3進行第一輪RT-PCR,以5個P基因型P[6]、P[8]、P[9

2、]、P[4]和P[10]的特異性引物進行第二輪PCR,建立多重巢式RT-PCR方法檢測P基因型.2002年11月-2003年10在武漢市兒童醫(yī)院腹瀉門診按系統(tǒng)抽樣方法收集5歲以下兒童腹瀉樣本,利用聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)檢出輪狀病毒陽性樣本,進行G、P基因分型和VP6亞組分析,不能分型樣本利用PCR擴增產物進行測序,并對其基因序列進行分析.另外對2000年12月-2002年12月在武漢地區(qū)發(fā)現的兩例B組輪狀病毒,利用PCR擴增其V

3、P7、NSP2和NSP5基因,并連接到克隆載體pUCm-T上,轉化至感受態(tài)細胞One-shot Top10F',提取轉化菌質粒經限制性內切酶Pst Ⅰ酶切分析,篩選出陽性菌提取質粒,對插入片段進行了測序和核苷酸序列分析.結論該研究是首次對武漢地區(qū)輪狀病毒進行了系統(tǒng)的分子流行病學分析,武漢地區(qū)存在A組和B組輪狀病毒,其中A組輪狀病毒以G3P[8]型為優(yōu)勢流行株,亞組以基因亞組3為主;B組輪狀病毒與ADRV起源相同,且在20年里變異很小,基